Анализ на вич методом пцр


Вирус иммунодефицита человека. Чума 20-го века.

По статистике, предоставленной Всемирной организацией здоровья совместно с организацией ООН ЮНЭЙДС, за последние сорок лет более 25 миллионов пациентов скончались от заболеваний ВИЧ и СПИД. Не зря эпидемиологи окрестили ВИЧ чумой 20-го века, так как урон, нанесенный этой инфекцией человечеству, имеет колоссальные масштабы. Наиболее сильно заражению подверглись страны африканского континента. Заражение сильно бьет по экономике и без того нестабильных государств, народ нищенствует.

resim-254

При появившейся симптоматике чрезвычайно важна оперативная диагностика заражения организма ВИЧ-инфекцией, потому как вовремя пройденный курс терапии способен спасти или хотя бы увеличить срок жизни пациента. В нынешнее время технологический прогресс шагнул далеко: изобретены новейшие способы диагностики вируса ВИЧ и СПИДа, лечение доступно для любого человека планеты, достоверность анализов характеризуется малой долей погрешности, а терапия большим процентов эффективности.

Диагностика инфекции ВИЧ


resim-255

В нашей стране выявление присутствия в организме пациента ВИЧ-инфекции представляет собой комплекс анализов:

  • Иммуноферментный анализ
  • Иммунный блоттинг
  • Полимеразная цепная реакция
  • Экспресс-тесты

Иммунофермнтный анализ.

Скрининг (тест ИФА) является первоначальной стадией определения заражения в организме. Он базируется на образованных в искусственных условиях белковых соединениях вируса, которые идентифицируют продуцируещиея иммунными клетками антитела как реакцию на заражение. Происходит химическая реакция между реактивами, вследствие чего индикаторный элемент меняет цвет. Значит, результат теста положительный. Информацию по такому способу можно получить через пару недель с момента инфицирования. Таковой способ выявляет не присутствие инфекции у пациента, а определяет вырабатывающиеся к этой инфекции антитела. Бывает, продуцирование антител стартует через 10-15 дней с момента инфицирования, но в подавляющем большинстве случаев позднее – через 1-1,5 месяца.

Информация по такому анализу обрабатывается от двух до десяти дней.


Достоверность диангоза на ВИЧ подкрепляется анализом ИБ. Исключительно положительный тест ИБ на вирус может служить веской причиной для утверждения инфицирования.

Суть анализа:

В лаборатории берут пробу венозной крови на анализ. Пробу дополнительно подготавливают, белковые соединения, которые в ней присутствуют, электризуются в испытательной камере, далее их распределяют в гелевой субстанции соответственно молекулярной массе. Бумажную полосу с напылением реактива несколько раз помещают в подготовленную пробу. При наличии в пробе антител к вирусу происходит химическая реакция и на тестовой полосе становятся видны черточки. Когда появляются 2 или 3 черточки p24, gp41, и gp120 или gp160, результат теста положительный.

При получении положительного результата по анализу ИБ с погрешностью в один процент можно сделать заключение о наличии инфекции ВИЧ в организме.

Экспресс-тесты на ВИЧ и СПИД

Новейшими технологиями для определения вируса иммунодефицита в организме являются экспресс-методы. Информацию по такому анализу можно получить через несколько минут после проведения. Наиболее высокая достоверность у иммунохромаграфических тестов – специальных тест-полос, на поверхности которых напыляется слой реагента. Антитела, содержащиеся в испытуемом материале, контактирует с реагентом, изменяя окраску индикатора. Через несколько минут проявляются две полоски, что указывает на наличие инфекции. Наличие единственной полосы означает отсутствие инфекции.


Такой тест можно использовать как дополнительный, информация по такому тесту обязательно подтверждается другими исследованиями.

Сколько стоит экспресс-тест на ВИЧ?

Экспресс-тест на ВИЧ в среднем обойдется в 200-1000 рублей.

Полимеразная цепная реакция

ПЦР – анализ крови, позволяющий с малым процентом погрешности определить присутствие заражения инфекцией в организме. Практическая суть данного способа тестирования в анализе молекул дезоксирибонуклеиновой и рибонуклеиновой кислоты.

Нередко встречается, что разные инфекции с разной этиологией протекают со схожей симптоматикой. Анализ ПЦР диагностирует инфекцию, причину ее образования, классифицирует степень заражения пациента и количественный состав вредоносных микроорганизмов. С помощью ПЦР специалист способен выявить даже крошечную толику молекул вируса, содержащуюся в организме, а при идеальных условиях одинарные злокачественные бактерии и штаммы вируса. Такая информативность обеспечивает специалисту возможность правильного выбора курса терапии.


Подробно о сути анализа

Анализ основывается га многочисленном повторении отдельно выбранного отрезка цепи ДНК с добавлением ферментов в лабораторной среде. В ходе процесса копируется тот отрезок, который подходит по нужным параметрам и обязательно, чтобы этот отрезок был частью испытуемой пробы. Маленькие отрезки ДНК копируются в специально созданной среде с добавлением химических веществ, ускоряющих процесс.

Компоненты реакции

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

  • Матрица дезоксирибонуклеиновой кислоты с присутствием отрезка ДНК, готовящегося к амплификации
  • Пара праймеров – по одному для каждого из отрезков цепи
  • Специальное химически активное вещество полимераза, которое ускоряет процесс полимеризации ДНК.
  • Дезоксирибонуклеозидтрифосфаты
  • Заряженные частицы магния двухвалентного
  • Буферный раствор, который создает нужные условия для протекания процесса, а именно кислотность, концентрацию соли и заряженных частиц магния в растворе.

Обычно для защиты образца от перегрева в пробу с реагентами помещают вазелин, так как этот продукт содержит жиры и имеет высокую температуру кипения.

Анализ ПЦР диагностирует РНК инфекции. Характерная особенность такого анализа – большая достоверность, он помогает выявить заражение вирусом ВИЧ через полторы недели с момента инфицирования. Иногда бывает, что анализ дал ложные сведения, потому как его сильная чувствительность вызывает реакцию на антитела к другим вирусам в организме.


Сколько стоит сдать ПЦР-исследование?

Такой способ диагностики не дешевый. Он предполагает наличие новейшей медицинской аппаратуры и определенных знаний в этой области. Поэтому ПЦР-диагностика не используется для групповых анализов.

Анализ на ПЦР можно сдать в специализированных клиниках нашей страны в среднем за 3500 рублей.

ПЦР-диагностика. Причины для проведения

ПЦР назначают для:

  • Диагностики ВИЧ у ребенка, если мать была подвержена заражению инфекцией – вирус мог передаться через плаценту внутриутробно.
  • Определения вируса, когда иммуноферментный анализ дал размытые сведения
  • Отслеживания количественного уровня вируса в организме
  • Тестирования доноров

Результат анализа ПЦР не является достаточным основанием для постановки диагноза. Для этого нужно комплексное обследование наряду с прохождением других тестов. ПЦР скорее используется как вспомогательный метод, позволяющий разобраться в сложных случаях.

Сколько стоит сдать анализ на ВИЧ?

Помощь по диагностике вируса иммунодефицита можно получить абсолютно бесплатно в государственных медучреждениях. В частных клиниках диагностика ВИЧ обойдется от 3 до 5 тысяч рублей.


Источник: testanaliz.ru

ПЦР (полимеразная цепная реакция) представляет собой метод молекулярной генетики, который позволяет анализировать любую короткую последовательность ДНК (или РНК) даже в образцах, содержащих только мельчайшие количества ДНК или РНК, тем самым определив наличие/отсутствие патогенного возбудителя (определить, например есть ли в человеке вирус ВИЧ или гепатита Б или микобактерии туберкулёза). ПЦР используется для воспроизведения/умножения/клонирования (амплификации) выбранных участков ДНК или РНК для анализа.

Метод ПЦР настолько прост, что его может поставить даже школьник)

Раньше амплификация ДНК включала клонирование сегментов, представляющих интерес, в векторы для экспрессии в бактериях и занимала недели. Но теперь, когда ПЦР делается в пробирках, требуется всего несколько часов. ПЦР является высокоэффективной, так что из ДНК может быть сделано огромное количество копий.

Более того, ПЦР использует те же молекулы, которые природа использует для копирования ДНК:

  • Два «праймера», коротких одноцепочечных последовательностей ДНК, которые синтезируются так, чтобы соответствовать началу и концу растяжения ДНК, подлежащей копированию.
  • Фермент, называемый полимеразой, который перемещается вдоль сегмента ДНК, считывает его код и собирает копию.
  • Куча блоков ДНК, которые необходимо сделать этой полимеразе.

То есть ПЦР — это такая техника при которой частицы ДНК (иногда РНК) умножаются в определенном растворе или на специальной поверхности, где они могут быть депонированы.

ПЦР — это метод, с помощью которого учёные могут находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл.

Ключом к пониманию ПЦР является знание о том, что каждый человек, животное, растение, паразит, бактерия или вирус содержит генетический материал — ДНК (или РНК) последовательности (нуклеотидные последовательности или кусочки ДНК (или РНК)), которые уникальны для каждого индивидуума. То есть, если образец содержит сегменты ДНК или РНК,

задача ПЦР как метода — умножить (амплифицировать), сделать как можно больше их копий, чтобы можно было идентифицировать кому они могут принадлежать (определенному человеку, животному или патогенному организму), даже если есть только следы наличия ДНК/РНК.

Однако ПЦР-амплификация является лишь частью диагностического теста. После проведения амплификации амплифицированные сегменты необходимо сравнить с другими нуклеотидными сегментами, но уже из известного источника (например, конкретного человека, животного или патогенного организма). Это сравнение уникальных сегментов часто выполняется путем размещения нуклеотидных последовательностей, сгенерированных ПЦР, рядом с известными нуклеотидными последовательностями от людей, патогенов или других источников в специальном геле.


Когда электрический ток проходит через гель, то различные нуклеотидные последовательности образуют полосы, которые напоминают «лестницу» в соответствии с их электрическим зарядом и молекулярным размером. Это называется гель-электрофорез.  Они мигрируют на одни и те же уровни в геле, показывая идентичность нуклеотидных последовательностей. Этот метод является одним из самых популярных последних этапов ПЦР-тестов.

ПЦР лестницы.

Как ПЦР работает?

В 1983 году Кари Муллис разработал основные этапы по амплификации ДНК-последовательностей. Он и Майкл Смит были удостоены Нобелевской премии за создание ПЦР в 1993 году.

Анализ на вич методом пцр


[email protected] 574w" data-sizes="(max-width: 308px) 100vw, 308px" />

ПЦР проводится в одной пробирке с соответствующими химическими веществами и при определенной температуре нагревания.

Необходимы следующие реагенты или химикаты:

  • Образец, содержащий нуклеотидную последовательность (из крови, волос, гноя, кожи и т. д.).
  • ДНК-праймеры: короткая одноцепочечная ДНК, которая присоединена к нуклеотидным последовательностям, которая способствует синтезу комплементарной цепи нуклеотидов.
  • ДНК-полимераза: фермент, который, когда ДНК связывается с праймером, спускается по фрагменту ДНК с добавлением структурных блоков ДНК для образования комплементарных пар оснований и, таким образом, синтезирует комплементарную нуклеотидную цепь ДНК (введение термостойкой ДНК-полимеразы, Taq-полимеразы , полученной из термостойких бактерий, заметно улучшает способность к ПЦР).
  • Большой избыток структурных блоков ДНК, называемых нуклеотидами (аденин, тимидин, цитозин и гуанин, сокращенные как: A, T, C и G соответственно) в растворе.

    гда эти блоки соединены вместе, они образуют нуклеотидную последовательность или одну нить ДНК. Когда эти строительные блоки связывают свой комплементарный строительный блок слабыми водородными связями (например, A будет связываться только с T и G только с C) образуется комплементарная нуклеотидная последовательность ДНК, которая связана с исходной одноцепочечной ДНК. Когда связывание завершается, комплементарная ДНК с двойной цепью образуется в определенной последовательности.

Кари Муллис очень интересный, прикольный дядечка, посмотрите как он интересно рассказывает, как он придумал ПЦР:

Он верит в астрологию, но не верит, что ВИЧ вызывает СПИД.) 

Затем полимеразно-цепная реакция начинается с сегмента ДНК из образца, который помещается в пробирку с указанными выше реагентами. Раствор нагревают до 94°С. Нагревание разрушает водородные связи, которые позволяют образовывать комплементарные цепи ДНК, поэтому в смеси существуют только одиночные нити (это называется денатурацией двухцепочечной ДНК).

Смеси дают остыть до 54°C. При этой температуре ДНК-праймеры и ДНК-полимераза связываются с отдельной одноцепочечной ДНК (это называется отжигом ДНК). Поскольку строительных блоки в избытке (высокая концентрация) в смеси, полимераза использует их для создания новых комплементарных нитей ДНК (называемых расширением ДНК), и этот процесс происходит быстрее при 72°C. Этот процесс создает новую двухцепочечную молекулу ДНК из каждой из одиночных нитей исходной молекулы.

Этот цикл повторяется примерно 40 раз в машине, называемой термическим циклером (термосайклером), который автоматически повторяет циклы нагрева-охлаждения, при этом количество каждой последовательности ДНК удваивается каждый раз, когда цикл нагрева-охлаждения завершается. То, что изначально было одним коротким сегментом ДНК, можно было увеличить до примерно 100 миллиардов копий после 40 циклов удвоения.

Когда необходим тест на ПЦР?

Тест на ПЦР является основой для ряда тестов, которые могут отвечать на многие различные медицинские вопросы, которые помогают врачам диагностировать и лечить пациентов. Например, тесты ПЦР могут обнаруживать и идентифицировать патогенные организмы у пациентов, особенно тех, которые трудно культивировать (например, ВИЧ и другие вирусы и некоторые грибы).

Одни врачи назначают ПЦР-тесты, чтобы помочь диагностировать генетические заболевания, в то время как другие врачи используют ПЦР для обнаружения биологических родственных отношений, таких как идентификация родителей детей. ПЦР-тесты также используются для идентификации и характеристики генетических мутаций и перегруппировок, обнаруженных при определенных раковых заболеваниях.

Тем не менее, ПЦР-тесты были модифицированы и внедрены во многие аспекты научных исследований, включая эволюционную биологию, генетическую отпечатку пальцев, судебно-медицинские исследования и многие другие.

Что такое ОТ-ПЦР?

Обратно-транскриптазный ПЦР (RT-PCR) — это тест на ПЦР, который предназначен для обнаружения и измерения количества РНК. Хотя первоначальные тесты ПЦР амплифицировали ДНК, многие вирусы и другие биологические компоненты (например, митохондрии) используют РНК в качестве своего генетического материала. RT-PCR отличается от обычной ПЦР сначала взятием РНК и превращением нити РНК в нить ДНК. Это делается по существу тем же самым методом для ПЦР, описанным выше, за исключением использования фермента, называемого обратной транскриптазой, вместо ДНК-полимеразы.

Обратная транскриптаза позволяет перевести одну нить РНК в комплементарную цепь ДНК. Как только эта реакция происходит, рутинный метод ПЦР можно затем использовать для амплификации ДНК. RT-PCR используется для обнаружения и изучения многих РНК-вирусов. RT-PCR не следует путать с другим вариантом ПЦР, называемым ПЦР в реальном времени (реал-тайм).

ПЦР в реальном времени представляет собой вариацию ПЦР, которая позволяет анализировать амплифицированную ДНК в течение обычных 40 циклов процедуры. Хотя процедура аналогична обычной ПЦР с циклированием, ПЦР реального времени использует флуоресцентные красители, прикрепленные к некоторым из строительных блоков или небольших нуклеотидных нитей. В зависимости от используемого метода флуоресценция возникает, когда образуются амплифицированные нити ДНК. Количество флуоресценции можно измерить на протяжении 40 циклов и позволяет исследователям измерять определенные продукты и их количества во время циклов амплификации.

Это часто позволяет исследователям или техническим специалистам пропускать гель-электрофорез или другие вторичные процедуры, необходимые для анализа продуктов ПЦР, тем самым обеспечивая более быстрые результаты. ПЦР в реальном времени и RT-PCR являются вариациями или модификациями исходного теста ПЦР. Тем не менее, существует еще много вариантов (не менее 25), которые существуют и используются для решения конкретных проблем. Все они имеют разные названия, такие как сборка ПЦР, ПЦР с горячим началом, мультиплексная ПЦР, твердотельная ПЦР и многие другие.

ПЦР будет развиваться и дальше, чтобы помочь ответить на многие другие вопросы в медицине, биологии и других областях науки.

Что такое ПЦР анализ на ВИЧ?

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — метод умножения  генетического материала вируса, анализ, который определяет генетический материал вируса — РНК или ДНК ВИЧ.

Если вирус содержится в минимальном значении, то в результате реакции это количество многократно увеличивается. Поэтому ПЦР имеет высокое диагностическое значение.

Обычно этот тест используется для определения ВИЧ в донорской крови или для раннего определения наличия ВИЧ в организме до выработки специфических антител к ВИЧ. Специфические антитела определяют обычные тесты на ВИЧ (ИФА), но только через 1-3, редко 12 месяцев после заражения. А с помощью ПЦР можно дать достаточно точный ответ через 14 дней с достоверностью 98% и даже через 5 дней, но тогда достоверность будет 80%.  ПЦР на ВИЧ — это дорогой и более трудоемкий анализ, чем ИФА, поэтому его используют не всем подряд, а только по особым показаниям (доноры, пострадавшие от медицинской аварии с ВИЧ-инфицированным) или платно.

Качественный ПЦР анализ на ВИЧ

Качественный ПЦР анализ на ВИЧ — определяет есть вирус ВИЧ-1/ВИЧ-2 или его нет, но он не определяет количество копий вируса (для определения количества используется количественный ПЦР). Качественный ПЦР НЕ делают тем у кого известен диагноз «ВИЧ-инфекция». Его делают только тем, у кого пока неизвестно  — инфицирован он ВИЧ или нет.

Это метод определения комплиментарного участка ДНК в геноме клетки лимфоцита пораженного ВИЧ. Т.е. определяется не сам вирус, а материал, который вирус встраивает в клетку. В ядре клетки уже будет храниться его ДНК из которой он потом будет считываться и  размножаться (копировать самого себя).

Количественный ПЦР анализ на ВИЧ

Количественный ПЦР анализ на РНК ВИЧ  — определяет количество копий РНК вируса в крови (для определения вируса в клетках используют ПЦР ДНК, например у детей). Делается только у ВИЧ-инфицированных, для контроля лечения, определения выраженности процесса развития болезни, эффективности лечения.

Через сколько времени после заражения можно обнаружить ВИЧ с помощью метода ПЦР?

Через сколько дней можно сдавать ПЦР на ВИЧ после контакта с ВИЧ положительным партнёром?

ВИЧ с помощью ПЦР можно обнаружить через 4-14 дней после заражения. Отрицательный результат ПЦР на ВИЧ достоверен после 14 дней после рискованного контакта, но по действующим нормативам всё равно требуется обследование с помощью ИФА. 

Чем отличается ПЦР ДНК от ПЦР РНК ВИЧ?

РНК обычно используется в количественных тестах для оценки вирусной нагрузки у диагностированных лиц, например, для оценки эффективности терапии.

ДНК — в мононуклеарных клетках, например, для диагностики у детей, там, где антитела к ВИЧ матерей мешает использовать метод ИФА.

И тот и другой тест могут быть и количественными, и качественными.

И тот, и другой можно в особых случаях применить диагностики, но с учетом конкретных ограничений, которые накладывают технические параметры системы, т.е. по назначению врача.

Может ли ПЦР на ВИЧ быть ложноположительным, причины?

Если всё сделано правильно: медсестра не перепутала пробирки, посмотрела паспорт, прежде, чем делать забор крови, правильно промаркировала пробирку, правильно выписала направление и т.д., а специалист лаборатории (обычно это врач-лаборант)  сделал всё согласно инструкции, им были соблюдены все требования лабораторного регламента (например, правильно «расскапал» биоматериал, без перекрестной контаминации (загрязнения) и т.д.) и была использована качественная тест-система, ТО ПЦР ложноположительным быть МОЖЕТ только в 2% случаях (это связано с чувствительностью используемых тест-систем).

Но если были допущены ошибки со стороны персонала медицинского учреждения, ТО ПЦР может быть ложноположительным, более чем в 2% случаев. 

Как сдается ПЦР на ВИЧ?

Для исследования на ВИЧ методом ПЦР сдаётся кровь из вены, желательно (но необязательно) утром натощак.

Где можно сдать анализы на ПЦР ВИЧ?

Для этого нужно ввести в поиск Вашего браузера «сдать пцр вич» и добавить в запрос Ваш населенный пункт и Вы увидите организации, которые занимаются у Вас исследованиями на ПЦР.

Например,

Сколько стоит анализ на ВИЧ методом ПЦР?

Около 1,5-3 тыс. руб. в зависимости от региона.

Какова достоверность результатов ПЦР анализа на ВИЧ?

Через 14 дней после заражения достоверность ПЦР на ВИЧ составляет 100%, с 4-5 дня — достоверность 80%.

Сколько времени делается анализ ПЦР на ВИЧ?

Технически 4-6 часов, но в реальности зависит от организации работы лаборатории и обычно результат выдается через 2-3 дня.

ПЦР на ВИЧ у новорожденного ребенка

Так как у ребёнка до 1,5 лет рожденного от ВИЧ+ матери сохраняются её антитела против ВИЧ, то определить заражен ВИЧ ребенок или нет с помощью ИФА невозможно. В такой ситуации используется ПЦР:

  • Если у ребенка возрастом 1 мес с помощью ПЦР обнаружили вирус, значит он заразился.
  • Если у ребенка в 1-2 месяца и 4-6 месяцев ПЦР отрицательная, то при условии, что мать не кормила его своим грудным молоком — ребёнок здоров.

Источник: spid-vich-zppp.ru

Информация об исследовании


ПРАВИЛА ПРОВЕДЕНИЯ ОБСЛЕДОВАНИЯ НА ВИЧ-ИНФЕКЦИЮ

Первичный анализ на ВИЧ — ВИЧ (АТ и АГ к ВИЧ 1/2 скрининг).

ВИЧ-инфекция — тяжелое вирусное заболевание с длительным бессимптомным периодом, характеризующееся поражением иммунной системы человека и опасное своей поздней диагностикой. Часто термины «ВИЧ» и «СПИД» употребляются как синонимы, фактически же СПИД является терминальной (последней) стадией ВИЧ-инфекции, длительность которой составляет 1-2 года. По данным исследований, с момента инфицирования до вступления болезни в терминальную стадию при отсутствии лечения, в среднем, проходит 9-11 лет. Ранняя диагностика заболевания методом ИФА или ПЦР анализа на ВИЧ позволяет своевременно начать антиретровирусную терапию, остановить прогрессирование болезни и долгие годы вести полноценную жизнь, несмотря на присутствие вируса иммунодефицита человека в организме.  

Пути передачи ВИЧ:

  • незащищенные половые контакты;
  • переливание крови и препаратов крови;
  • использование нестерильных инструментов при проведении медицинских вмешательств;
  • ранения медперсонала нестерильным инструментом;
  • перинатальное инфицирование: передача вируса во время беременности и родов.

Анализы на СПИД (ВИЧ) назначают:

  • при случайном половом контакте;
  • при планировании беременности и во время беременности;
  • при подготовке к госпитализации;
  • при резком снижении веса;
  • при длительном повышении температуры тела неясного генеза.

Экспресс анализ крови на ВИЧ

ВИЧ относится к семейству ретровирусов (Retroviridae), подсемейству лентивирусов (Lentivirus). Попадая в организм человека, он поражает клетки иммунной системы Т-хелперы, макрофаги, дендритные клетки. Ретровирус трансформирует свою РНК в участок ДНК, который встраивается в геном клетки-хозяина. При делении пораженной клетки дочерние получают вирусный геном. К антигенам вируса на поверхности зараженных клеток в организме вырабатываются антитела, на выявлении которых основана диагностика ВИЧ-инфекции по методу иммуноферментного анализа (ИФА). Сдавать анализ рекомендуется через 1,5 — 3 месяца после момента предполагаемого заражения, ранее тест ИФА не информативен. Лаборатория Гемотест использует альтернативный метод Real-Time ПЦР (ПЦР с детекцией продуктов в режиме реального времени), обнаруживающий не антитела к ВИЧ, а сам вирус в организме. Обладая высокой чувствительностью и достоверностью, метод позволяет выявлять даже единичные частицы вируса уже через 10 дней (средний показатель) с момента потенциального заражения, когда антитела в крови еще отсутствуют.

Сдать анализ ПЦР на ВИЧ рекомендуется в следующих случаях:

  • для выявления вируса в период «серонегативного окна»;
  • при сомнительном результате иммуноблота;
  • для определения генотипа вируса — ВИЧ-1 или ВИЧ-2;
  • для контроля вирусной нагрузки на организм;
  • для определения ВИЧ-статуса новорожденных, если мать ВИЧ-инфицированна;
  • после переливания крови.

Анонимный анализ на ВИЧ

Согласно п.2, ст.8 ФЗ РФ № 38-ФЗ, пациент может анонимно сдать анализ на ВИЧ и получить результат по индивидуальному номеру заказа, не подлежащему разглашению. Тем, кто по каким-либо причинам не имеет возможности приехать на обследование в одно из отделений Лаборатории Гемотест, мы рекомендуем воспользоваться услугой по выезду медсестры для взятия крови с последующей регистрацией взятой пробы как анонимного заказа.

Обращаем Ваше внимание: результаты анонимных анализов на СПИД (ВИЧ) не могут быть использованы для профессиональных осмотров, госпитализации или предоставления лечащему врачу в поликлинике.

Результаты исследования на ВИЧ независимо от их результата выдаются только при личном  обращении  пациента в лабораторное отделение. При обследовании несовершеннолетних (до 14 лет) детей — законному представителю, указанному в заказе. 

Результаты выдаются при предъявлении договора, сметы и документа, удостоверяющего личность самого пациента или представителя пациента, указанного в заказе.

По телефону и электронной почте результаты исследований не сообщаются.

ЕСЛИ АНАЛИЗ НА ВИЧ НАЗНАЧЕН В ЦЕЛЯХ ПОДГОТОВКИ К ГОСПИТАЛИЗАЦИИ ИЛИ ДЛЯ ПРЕДОСТАВЛЕНИЯ В ЛПУ, РЕГИСТРАЦИЯ ЗАЯВОК НА ЕГО ПРОВЕДЕНИЕ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ при обязательном предоставлении пациентом следующих данных:

 

  • Фамилия, имя, отчество
  • День, месяц и год рождения
  • Сведения о регистрации
  • Страховой полис (серия и номер страхового полиса, наименование страховой компании)
  • Ксерокопия (скан) паспорта 

Сколько делают анализы на ВИЧ?

 Результаты теста ИФА можно получить через 1 рабочий день, но не ранее 1,5-3 месяцев с момента предполагаемого заражения, результат ПЦР-диагностики можно узнать уже через 10 дней с момента предполагаемого заражения. Срок исполнения теста по методу Real-Time ПЦР составляет 3 рабочих дней.  

Источник: www.gemotest.ru

ПЦР — это один из основных методов диагностики инфекционных заболеваний. Применяется он и при определении ВИЧ инфекции.

проведение ПЦР теста на ВИЧ

Используется ПЦР для различных целей.

Это может быть:

  • первичная диагностика инфекционного заболевания;
  • оценка прогноза;
  • определение вирусной нагрузки;
  • подбор лечения;
  • определение резистентности к антиретровирусным препаратам.

В ходе реакции ПЦР выявляют РНК вируса или ДНК провируса из клеток крови. Точность исследования достаточно высокая.

Наибольшая точность у метода, предполагающего обнаружение ДНК. Он позволяет выявить провирус при его концентрации от 1 до 5 копий ДНК на 1 миллион клеток. Исследование обладает высокой специфичностью. Она достигает 97%. Причем, если обнаруживается высокая вирусная нагрузка, то специфичность теста достигает 100%.

Анализ на вич методом пцр

Ложноположительные результаты всегда дают низкий уровень вирусной нагрузки. Поэтому при обнаружении такого результата может потребоваться повторное определение ДНК провируса.

ПЦР имеет ограниченное применение. Этот анализ используется чаще всего не для первичной диагностики инфекции, а уже в процессе лечения. Тогда как первичная диагностика проводится с помощью серологических исследований. Это анализы, при которых в крови определяется уровень антител к ВИЧ. Они стоят гораздо дешевле.

ПЦР обходится пациенту в частных лабораториях в сумму 150-200 долларов США. Тем не менее, иногда этот способ бывает необходимым и при первичной диагностике инфекции. Он раньше всего становится информативным. С помощью анализа можно диагностировать ВИЧ уже в острый период. В это время человек страдает от повышенной температуры тела, боли в мышцах и суставах, тошноты высыпаний на коже и других симптомов. Хотя иногда они отсутствуют.

Острый период наступает сразу после инфекционного. В это время антитела методом ИФА еще могут не определяться. А ПЦР уже становится положительной. Однако оснований для назначения данного исследования при возникновении у больного ранних симптомов ВИЧ обычно не возникает. Потому что эти симптомы неспецифичны.

Человек просто идет к терапевту и лечится от острой респираторной вирусной инфекции.

мужчина у терапевта

Только если у него есть основания считать, что он заражен ВИЧ-инфекцией, может проводиться первичная диагностика методом ПЦР. Например, если человек имел половые контакты с ВИЧ-положительным партнером. А впоследствии у него проявились симптомы, вызывающие подозрение на инфицирование. Тогда ПЦР даст возможность раньше выявить заболевание и получить своевременную терапию. Ему будут назначены антиретровирусные препараты, которые блокируют размножение вируса и предотвращают нарушения иммунитета.

Антитела становятся положительными только в латентный период. Определение ДНК провируса может быть качественным или количественным. Качественный анализ означает, что результат выдается положительный или отрицательный. Вирусная нагрузка не определяется.

В диагностике ВИЧ вирусная нагрузка имеет большое прогностическое значение. Поэтому чаще используется количественный тест. ПЦР таким образом помогает выяснить, насколько много вирусов содержится в крови пациента. Исходя из этого, планируется необходимый объем терапевтических мероприятий.

Тест ПЦР ультрачувствительный. Он почти не дает ложноотрицательных анализов. Потому что благодаря ПЦР можно выявлять даже минимальные концентрации вируса в организме.

диагностика ВИЧ в лаборатории

Этот метод часто используется для первичной диагностики ВИЧ инфекции у детей, которые рождены от больных матерей.

Анализ на антитела в детском возрасте не информативен. Потому что в их крови могут циркулировать антитела матери. Их наличие не говорит о том, что ребенок болен. Поэтому в первые 2 месяца жизни малыш должен сдать анализ на ВИЧ методом ПЦР. Через несколько месяцев его проводят повторно. Если оба анализа отрицательные, нет оснований полагать, что у ребенка инфекция. Скорее всего, он здоров. Но кормить грудью его нельзя. Потому что вирус передается через грудное молоко.

В возрасте 1 год при отрицательных результатах анализов ребенка снимают с учета. Показанием для обследования детей может быть только их рождение от ВИЧ-позитивных матерей. Потому что симптомов инфекции у них нет до возраста 5 лет и более. Очень редко клинические признаки появляются раньше.

В среднем риск передачи ВИЧ от матери к ребенку, если она больна, составляет 30%. Антитела в детском организме к этому возбудителю могут обнаруживаться в течение первых полутора лет жизни. К этому времени ребенок серопозитивный всегда, независимо от наличия у него заболевания. После 2 лет жизни диагностика может проводиться с помощью анализа крови на антитела.

Анализ нет смысла сдавать в первые дни жизни ребенка. Потому что в это время возможны ложноотрицательные результаты. Только у одного ребенка из трех в этот период может быть выявлено ДНК провируса в случае, если малыш инфицирован. А вот спустя месяц чувствительность теста достигает 93%.

ВИЧ у детей

Это меньше, чем у взрослых. Именно по этой причине требуется двукратное проведение теста с разрывом в 1-2 месяца. Проведение химиопрофилактики ВИЧ не снижает диагностической ценности исследования, что является одним из его преимуществ.

Помимо ДНК провируса, определяется также РНК вируса иммунодефицита человека. Это исследование проводится в основном не для первичной диагностики. Оно назначается пациентам с уже диагностированным заболеванием. Основная цель — это мониторинг эффективности терапии и прогноз патологии. Для определения РНК — это ранний маркер результативности лечения.

С помощью этого метода:

  • решается вопрос о назначении антиретровирусной терапии;
  • оценивается, насколько эффективным является проводимое лечение;
  • проводится мониторинг клинического течения инфекции;
  • у беременных с помощью данного теста на месяц до родов определяется риск передачи ВИЧ ребенку, соответственно, оценивается целесообразность кесарева сечения.

Кроме того, с помощью ПЦР тестируют донорскую кровь. Данный метод диагностики указан в соответствующем приказе РФ от 2008 года.

донорская кровь

Разные тест-системы выявляют вирус в разных концентрациях. Минимальный порог отличается. Он может быть от 20 копий в мл, тогда как другие системы определяют только от 150 копий в мл.

Вместе с исследованием на РНК вируса иммунодефицита может быть проведена оценка чувствительности к антиретровирусным препаратам. Это возможно только в случае, если вирус определяется в количестве более 1 тысячи копий в мл.

Оценивается чувствительность к таким препаратам:

  • ингибиторам протеазы;
  • ненуклеозидным или нуклеозидным ингибиторам обратной транскриптазы.

Показания к исследованию:

  • снижение эффективности проводимой терапии, если нет других видимых причин уменьшения эффекта от препаратов;
  • острый период инфекции, до начала антиретровирусной терапии, если точно известно, что человек инфицирован от партнера, у которого лечение стало неэффективным (имеет место резистентность к препаратам).

Резистентность к антиретровирусной терапии может быть первичной или вторичной.

  • Первичная — это когда человек изначально заражен устойчивым вирусом.
  • Вторичная развивается в случае, когда человек неправильно лечился.

Например, не вовремя получал препараты, делал перерывы в лечении, получал неадекватные дозы и т.д.

ВИЧ-инфицированный

Признаки резистентности:

  • РНК вируса иммунодефицита не снижается в течение 6 недель лечения;
  • рецидив заболевания (обнаружение высокой концентрации РНК на фоне непрекращающейся терапии, если ранее была достигнута супрессия).

При этом важно исключить другие возможные причины прогрессирования болезни, за исключением резистентности. Нужно убедиться, что лечение действительно было непрерывным. То есть, что больной не игнорировал рекомендации врача и не прекращал лечение. А также что он не имеет заболеваний, при которых может нарушиться усвоение лекарственного препарата в желудочно-кишечном тракте.

Определение резистентности к антиретровирусным лекарствам дает возможность пересмотреть схему терапии. В неё включают те препараты, к которым вирус чувствительный.

Такое лечение не приводит к полному излечению ВИЧ, но:

  • продлевает жизнь;
  • сохраняет трудоспособность пациента;
  • уменьшает риск передачи инфекции;
  • нормализует состояние иммунитета.
     

 диагноз - ВИЧ

Через сколько можно

Часто пациенты спрашивают, через сколько времени можно делать анализ методом ПЦР на ВИЧ. Это исследование проводится гораздо раньше, чем ИФА. Патологию можно выявить в остром периоде, а иногда и в инкубационном периоде. Сдавать анализ можно через 2-4 недели. В то время как кровь на антитела сдают не раньше, чем через 6 недель.

ПЦР на ВИЧ может быть положительным уже спустя 14-21 день после возможного инфицирования.

кровь на ВИЧ: обнаружено

Но если анализ отрицательный, это не гарантирует отсутствие инфекции.

Лучше провести подтверждающий тест медом ИФА через несколько недель. А вот если ПЦР положительный, то очень мало шансов, что результаты анализа неправильные. Сдать анализ на ВИЧ методом ПЦР можно в нашей клинике.

Наши преимущества:

  • нет очередей — сдача анализов по записи на определенное время;
  • быстрые сроки выполнения анализов;
  • возможность анонимного исследования;
  • никому кроме вас мы не сообщим результаты анализов.

У нас используются самые современные методы диагностики, включая определение РНК вируса или ДНК провируса. При необходимости можно оценить результаты терапии и провести оценку резистентности ВИЧ к лечению антиретровирусными препаратами. Результаты вы получите через несколько дней.

Источник: www.venerologia.ru

Вирус иммунодефицита человека. Чума 20-го века.

По статистике, предоставленной Всемирной организацией здоровья совместно с организацией ООН ЮНЭЙДС, за последние сорок лет более 25 миллионов пациентов скончались от заболеваний ВИЧ и СПИД. Не зря эпидемиологи окрестили ВИЧ чумой 20-го века, так как урон, нанесенный этой инфекцией человечеству, имеет колоссальные масштабы. Наиболее сильно заражению подверглись страны африканского континента. Заражение сильно бьет по экономике и без того нестабильных государств, народ нищенствует.

resim-254

При появившейся симптоматике чрезвычайно важна оперативная диагностика заражения организма ВИЧ-инфекцией, потому как вовремя пройденный курс терапии способен спасти или хотя бы увеличить срок жизни пациента. В нынешнее время технологический прогресс шагнул далеко: изобретены новейшие способы диагностики вируса ВИЧ и СПИДа, лечение доступно для любого человека планеты, достоверность анализов характеризуется малой долей погрешности, а терапия большим процентов эффективности.

Диагностика инфекции ВИЧ

resim-255

В нашей стране выявление присутствия в организме пациента ВИЧ-инфекции представляет собой комплекс анализов:

  • Иммуноферментный анализ
  • Иммунный блоттинг
  • Полимеразная цепная реакция
  • Экспресс-тесты

Иммунофермнтный анализ.

Скрининг (тест ИФА) является первоначальной стадией определения заражения в организме. Он базируется на образованных в искусственных условиях белковых соединениях вируса, которые идентифицируют продуцируещиея иммунными клетками антитела как реакцию на заражение. Происходит химическая реакция между реактивами, вследствие чего индикаторный элемент меняет цвет. Значит, результат теста положительный. Информацию по такому способу можно получить через пару недель с момента инфицирования. Таковой способ выявляет не присутствие инфекции у пациента, а определяет вырабатывающиеся к этой инфекции антитела. Бывает, продуцирование антител стартует через 10-15 дней с момента инфицирования, но в подавляющем большинстве случаев позднее – через 1-1,5 месяца.

Информация по такому анализу обрабатывается от двух до десяти дней.

Достоверность диангоза на ВИЧ подкрепляется анализом ИБ. Исключительно положительный тест ИБ на вирус может служить веской причиной для утверждения инфицирования.

Суть анализа:

В лаборатории берут пробу венозной крови на анализ. Пробу дополнительно подготавливают, белковые соединения, которые в ней присутствуют, электризуются в испытательной камере, далее их распределяют в гелевой субстанции соответственно молекулярной массе. Бумажную полосу с напылением реактива несколько раз помещают в подготовленную пробу. При наличии в пробе антител к вирусу происходит химическая реакция и на тестовой полосе становятся видны черточки. Когда появляются 2 или 3 черточки p24, gp41, и gp120 или gp160, результат теста положительный.

При получении положительного результата по анализу ИБ с погрешностью в один процент можно сделать заключение о наличии инфекции ВИЧ в организме.

Экспресс-тесты на ВИЧ и СПИД

Новейшими технологиями для определения вируса иммунодефицита в организме являются экспресс-методы. Информацию по такому анализу можно получить через несколько минут после проведения. Наиболее высокая достоверность у иммунохромаграфических тестов – специальных тест-полос, на поверхности которых напыляется слой реагента. Антитела, содержащиеся в испытуемом материале, контактирует с реагентом, изменяя окраску индикатора. Через несколько минут проявляются две полоски, что указывает на наличие инфекции. Наличие единственной полосы означает отсутствие инфекции.

Такой тест можно использовать как дополнительный, информация по такому тесту обязательно подтверждается другими исследованиями.

Сколько стоит экспресс-тест на ВИЧ?

Экспресс-тест на ВИЧ в среднем обойдется в 200-1000 рублей.

Полимеразная цепная реакция

ПЦР – анализ крови, позволяющий с малым процентом погрешности определить присутствие заражения инфекцией в организме. Практическая суть данного способа тестирования в анализе молекул дезоксирибонуклеиновой и рибонуклеиновой кислоты.

Нередко встречается, что разные инфекции с разной этиологией протекают со схожей симптоматикой. Анализ ПЦР диагностирует инфекцию, причину ее образования, классифицирует степень заражения пациента и количественный состав вредоносных микроорганизмов. С помощью ПЦР специалист способен выявить даже крошечную толику молекул вируса, содержащуюся в организме, а при идеальных условиях одинарные злокачественные бактерии и штаммы вируса. Такая информативность обеспечивает специалисту возможность правильного выбора курса терапии.

Подробно о сути анализа

Анализ основывается га многочисленном повторении отдельно выбранного отрезка цепи ДНК с добавлением ферментов в лабораторной среде. В ходе процесса копируется тот отрезок, который подходит по нужным параметрам и обязательно, чтобы этот отрезок был частью испытуемой пробы. Маленькие отрезки ДНК копируются в специально созданной среде с добавлением химических веществ, ускоряющих процесс.

Компоненты реакции

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

  • Матрица дезоксирибонуклеиновой кислоты с присутствием отрезка ДНК, готовящегося к амплификации
  • Пара праймеров – по одному для каждого из отрезков цепи
  • Специальное химически активное вещество полимераза, которое ускоряет процесс полимеризации ДНК.
  • Дезоксирибонуклеозидтрифосфаты
  • Заряженные частицы магния двухвалентного
  • Буферный раствор, который создает нужные условия для протекания процесса, а именно кислотность, концентрацию соли и заряженных частиц магния в растворе.

Обычно для защиты образца от перегрева в пробу с реагентами помещают вазелин, так как этот продукт содержит жиры и имеет высокую температуру кипения.

Анализ ПЦР диагностирует РНК инфекции. Характерная особенность такого анализа – большая достоверность, он помогает выявить заражение вирусом ВИЧ через полторы недели с момента инфицирования. Иногда бывает, что анализ дал ложные сведения, потому как его сильная чувствительность вызывает реакцию на антитела к другим вирусам в организме.

Сколько стоит сдать ПЦР-исследование?

Такой способ диагностики не дешевый. Он предполагает наличие новейшей медицинской аппаратуры и определенных знаний в этой области. Поэтому ПЦР-диагностика не используется для групповых анализов.

Анализ на ПЦР можно сдать в специализированных клиниках нашей страны в среднем за 3500 рублей.

ПЦР-диагностика. Причины для проведения

ПЦР назначают для:

  • Диагностики ВИЧ у ребенка, если мать была подвержена заражению инфекцией – вирус мог передаться через плаценту внутриутробно.
  • Определения вируса, когда иммуноферментный анализ дал размытые сведения
  • Отслеживания количественного уровня вируса в организме
  • Тестирования доноров

Результат анализа ПЦР не является достаточным основанием для постановки диагноза. Для этого нужно комплексное обследование наряду с прохождением других тестов. ПЦР скорее используется как вспомогательный метод, позволяющий разобраться в сложных случаях.

Сколько стоит сдать анализ на ВИЧ?

Помощь по диагностике вируса иммунодефицита можно получить абсолютно бесплатно в государственных медучреждениях. В частных клиниках диагностика ВИЧ обойдется от 3 до 5 тысяч рублей.

Источник: testanaliz.ru


You May Also Like

About the Author: admind

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.