Специфические серологические маркеры вич инфекции


Для диагностики ВИЧ-инфекции проводится определение в крови антител к вирусу, его антигенов или генетического материала. Основных методов исследования два: Комботест, в ходе которого определяются антитела и антигены, а также ПЦР для оценки концентрации РНК в крови. Первое исследование в основном используют для первичной диагностики ВИЧ, второе – для оценки вирусной нагрузки, и лишь в небольшом числе случаев для первичной диагностики.

Особенности назначения исследования на вирус иммунодефицита

Обследование на ВИЧ проводится в рамках скрининга, по клиническим или эпидемиологическим показаниям. В некоторых случаях оно является обязательным, в других – добровольным.

Обязательное обследование

Специфические серологические маркеры вич инфекции

Обязательному периодическому обследованию на эту инфекцию подлежат:


  1. Доноры любого биоматериала. Чаще всего донорство используется в гематологии и онкологии. Доноры могут сдавать кровь и половые клетки (сперматозоиды, яйцеклетки). Реже используется донорство стволовых клеток, внутренних органов. В ходе переливания крови или использования любого другого биоматериала может произойти передача ВИЧ, поэтому всех доноров проверяют на эту инфекцию. В случае получения даже сомнительных результатов анализов донорство для них запрещают пожизненно.
  2. Представители некоторых профессий обследуются каждый раз, устраиваясь на работу. Некоторые также проходят периодическое профилактическое обследование на ВИЧ.
  3. Беременные. Согласно действующему приказу, беременных обследуют однократно, в последнем триместре. Если женщина не прошла диагностику в этот период, анализы берутся сразу после поступления в роддом.
  4. Дети, рожденные от ВИЧ-инфицированных матерей. Требует проведения обследования минимум три раза. Первый раз диагностика проводится сразу после рождения. Затем требуются повторные анализы в возрасте одного и полутора лет.
  5. Все учащиеся в военных учебных заведениях – обследуются однократно, при поступлении. Анализы также сдают при поступлении на воинскую службу.
  6. Иностранцы, которые запрашивают российское гражданство, вид на жительство или разрешение на работу в РФ.

Добровольное обследование

Поводом для добровольного обследования на ВИЧ-инфекцию могут стать три группы показаний. Это пациенты, имеющие симптомы острого заболевания, лица с признаками иммунодефицита, а также люди без каких-либо проявлений ВИЧ, но имеющие высокий риск этого заболевания (обнаружение одного или нескольких факторов риска, свидетельствующих о значительной вероятности заражения).

Симптомы, которые могут оказаться признаками ВИЧ-инфекции, являющиеся поводом для обследования:


Симптомы острой ВИЧ инфекции
  • сохраняющийся более 1 месяца подряд частый жидкий стул, повышенная температура тела или увеличенные лимфоузлы двух и более групп;
  • снижение массы тела на 10% и больше, если для потери веса нет других объяснений (спорт, тяжелый физический труд, низкокалорийная диета и т.д.);
  • приобретенное слабоумие, если для него не было других причин (алкоголизм, черепно-мозговые травмы и т.д.).

В заключительной фазе ВИЧ у пациентов резко снижается клеточный иммунитет. Клинические признаки иммунодефицита тоже могут быть поводом для обследования:

  • длительные, плохо поддающиеся лечению, частые пневмонии;
  • любые бактериальные, вирусные, грибковые инфекции, которые протекают тяжелее, чем у большинства людей (включая диссеминированную герпетическую инфекцию, герпетический менингоэнцефалит, инвазивный кандидоз или глубокие микозы);
  • хронические воспалительные процессы малого таза у пациентов женского пола, которые не поддаются лечению стандартными методами.

Следующие заболевания часто ассоциированы с ВИЧ-инфекцией, поэтому являются показаниями для лабораторной диагностики:

  • опоясывающий герпес у лиц, моложе 60 лет;
  • криптококкоз (кроме легочной формы);
  • пневмоцистная пневмония;
  • поражения головного мозга токсоплазмой;
  • криптоспоридиоз;
  • гистоплазмоз;
  • саркома Капоши;
  • онкогематологические заболевания.

Обследоваться на ВИЧ рекомендовано лицам из групп риска по этому заболеванию. К факторам риска относятся гомосексуализм, проституция, беспорядочная половая жизнь, наркомания, пребывание в местах лишения свободы. Обследуют контактных лиц: в основном после полового акта с носителем инфекции или медицинских работников, проконтактировавших с кровью ВИЧ-позитивного пациента.

Методы лабораторной диагностики иммунодефицита

Основным методом первичной диагностики у взрослых является одновременное определение антител к ВИЧ 1 и 2 типов и антигена р25/24. Для этого используют ИФА или иммунохемилюминесцентный анализ. В качестве подтверждающего теста используют иммуноблот (может обозначаться аббревиатурой ИБ).

ПЦР используют как уточняющий метод для определения показаний к назначению лечения, оценки его эффективности. В некоторых ситуациях метод используют для первичной диагностики. Он применяется:

  1. Для обследования контактных лиц. Антитела в крови не образуются моментально. Они появляются только через несколько месяцев. Чтобы получить ответ в короткие сроки, определяется наиболее ранний маркер ВИЧ в крови – РНК вируса.

  2. Для обследования новорожденных. В их крови циркулируют материнские антитела. Поэтому проведенный анализ ИФА всегда будет положительным, независимо от того, болен ребенок или нет. Но вирусной РНК в его крови быть не должно. Поэтому ПЦР позволяет дать ответ, заразился ли новорожденный во время родов.

Расшифровка результата анализа при СПИДе

Стандартная схема обследования пациента предполагает проведение ИФА. В случае получения положительного результата нужно исключение ложноположительных реакций. Поэтому выполняется иммуноблот. Этот тест считается подтверждающим, он очень редко дает ложные результаты. Если они и бывают, то в основном связаны с человеческим фактором – ошибкой лаборатории, в которой проводилось тестирование.

Расшифровка ИФА и ИБ

Первичная диагностика может дать три варианта результатов:

  • ИФА и иммуноблот отрицательные – ВИЧ исключают, человеку может быть выдана справка об отсутствии у него этой инфекции. Но если пациент входит в группу риска по этому заболеванию, его уведомляют о существовании серологического окна и рекомендуют пройти обследование повторно, через 3 месяца.
  • ИФА положительная, а ИБ отрицательный – человек должен снова пройти исследование через 3 месяца. Это период окончания «серологического окна». Если человек инфицирован, к этому времени образуется больше антител, и они будут выявлены с помощью лабораторных тестов.
  • ИФА положительная, ИБ положительный – ставится диагноз ВИЧ. Человек бессрочно отстраняется от донорства. Ему требуется дальнейшее наблюдение и обследование для оценки клинического течения заболевания, определения показаний к антиретровирусной терапии.

Результаты обследования с помощью иммуноблота могут быть сомнительными. В этом случае человек должен наблюдаться в течение 6 месяцев. Повторное обследование проводят через 1-3 месяца. Если снова получен сомнительный результат, с высокой вероятностью человек здоров. Последнее обследование проводят спустя полгода. Получение сомнительного результата не является поводом для установления ВИЧ. Но пациент пожизненно отстраняется от донорства.

При выполнении перечисленных тестов расшифровка не представляет затруднений. На бумаге, выданной пациенту, пишется, положительный результат получен в ходе анализа или отрицательный. Количественных результатов нет.

Расшифровка ПЦР

Особого внимания заслуживает расшифровка результатов ПЦР. Ведь этот анализ дает количественные показатели. Он не только оценивает факт наличия или отсутствия вируса, но также сообщает врачу о количестве копий РНК вируса на 1 мл крови. Иногда обозначение результатов выглядит по-другому: может использоваться геномный эквивалент.

Интерпретация результатов ПЦР:

  • Любое количество копий вирусной ДНК – повод для установления диагноза ВИЧ-инфекции.
  • Вирусная нагрузка 100 000 копий/мл и более – оценивается как высокая.
  • Вирусная нагрузка 10 000 копий/мл и меньше – классифицируется как низкая.

Вирусная нагрузка – важный показатель, позволяющий оценить эффективность проводимой антиретровирусной терапии. ПЦР помогает понять, работают ли назначенные врачом препараты. Если они работают, то назначение лекарств позволяет снизить вирусную нагрузку на 99% в течение 2 недель. У 85% пациентов после начала антиретровирусной терапии через 4 недели вирусная нагрузка не превышает 1000 копий/мл. Если лечение начинают при исходном уровне РНК ВИЧ меньше 1000 копий/мл, то через 2 недели она становится неопределяемой. При исходном уровне РНК 1 миллион копий/мл вирус перестает определяться в крови в среднем через 113 дней терапии.

В ходе лечения вирусная нагрузка при помощи ПЦР измеряется через каждые 4 недели. Этого срока вполне достаточно, чтобы спрогнозировать дальнейшую динамику. Если препарат не работает, это видно намного раньше – уже через 1-2 недели ПЦР позволяет получить результаты, которые демонстрируют вирусологическую неудачу с точностью 99%.

Порог определения вирусной нагрузки у разных лабораторных тестов отличается. В основном он составляет 20-50 копий/мл. Целью лечения является достижение отрицательных результатов ПЦР. До этого момента тест проводится каждый месяц. После получения отрицательного результата достаточно дальнейшего контроля 1 раз в 3 месяца. С такой периодичностью лабораторных контроль успешности лечения осуществляется до того момента, пока вирусная нагрузка снова не начнет увеличиваться. В этом случае пациента вновь будут обследовать через каждые 4 недели.


Обычно в первый месяц терапии вирусная нагрузка уменьшается в 100 раз и более. Максимум через 6 месяцев (при высокой исходной нагрузке) она становится неопределяемой.

Теоретически, ПЦР может определять вирус иммунодефицита не только в крови. В качестве материала для тестирования подходит эякулят, вагинальное отделяемое или ликвор. Но в медицинской практике такие исследования не проводятся. Их используют только в научных целях.

Значительно реже ПЦР используется как метод, позволяющий определить показания для начала антиретровирусной терапии. Пациентов с нормальным иммунитетом, без уменьшения CD4 клеток, обычно не лечат. В том числе в случаях, когда вирусная нагрузка высокая. Но эти показатели напрямую взаимосвязаны. Обычно чем выше количество копий РНК вируса, тем быстрее прогрессируют иммунные нарушения.

Основным исследованием, позволяющим оценить показания к началу антиретровирусной терапии, остается определение CD4. По европейским рекомендациям, лечение может быть назначено при уровне CD4 более 350 клеток/мкл только при наличии дополнительных факторов риска развития СПИД. Одним из них является вирусная нагрузка свыше 100 000 копий РНК в мл крови.

Как исключают вероятность получения ложного результата исследований

Основной метод диагностики ВИЧ – ИФА. Он обладает чувствительностью 99% и специфичностью 99,5%. Это означает, что ложноотрицательные результаты получает 1 из 100 пациентов, ложноотрицательные – 1 из 200 больных. К тому же, анализ может оказаться отрицательным в первые месяцы после инфицирования. Риск его получения, в зависимости от сроков проведения:


  • через 3 месяца – 5-10%;
  • через 6 месяцев – 1-2%.

ИФА дает и ложноположительные результаты. Их основные причины:

  • наличие антител к аутоантигенам HLA класса II;
  • реактивные воспалительные процессы;
  • заболевания печени;
  • недавняя вакцинация.

Методы решения проблемы:

  • Использование подтверждающих тестов: иммунный, линейный блот.
  • В период «серологического окна» для диагностики используют ПЦР. Метод также может применяться для подтверждения результатов ИФА.
  • У новорожденных используют только ПЦР.
  • Применение ПЦР с «двойной мишенью» практически исключает ложноотрицательные результаты. Используется при исследовании донорской крови.

Если для первичной диагностики использовалась ПЦР, при возникновении сомнений в результатах тест может быть проведен повторно. Методы обнаружения РНК ВИЧ-1 дают 2-5% ложных отрицательных результатов. Концентрация вируса при этом всегда составляет менее 2000 копий/мл. Повторное проведение теста с высокой вероятностью дает правильный отрицательный результат, если пациент не инфицирован.

Источник: ticf.org

Диагностика ВИЧ-инфекции и СПИДа


Сегодня, наверное, каждый человек слышал о ВИЧ и СПИДе и знает, что эти заболевания очень опасны, что передаются они в основном во время незащищенного барьерным способом полового акта. А между тем, первые случаи инфицирования были зафиксированы не так давно — в 1978 году (у нескольких мужчин-гомосексуалов из США и Швеции). Сам вирус был открыт в 1983 году.

Вирус иммунодефицита человека, как и любой другой вирус, самостоятельно размножаться не может, для этого ему необходима живая клетка, в которую он «встраивает» свою генетическую информацию. После того как это происходит, зараженный человек становится носителем вируса, но долгое время никаких признаков инфицирования может не обнаруживаться.

В первую очередь ВИЧ атакует и разрушает лимфоциты (Т-лимфоциты, или хелперы). Они отвечают за иммунный ответ организма, распознавание и уничтожение инфицированных клеток. В результате заболевший теряет способность противостоять инфекциям.

У здорового человека количество Т-лейкоцитов составляет 1200–3000 клеток/мкл. После ВИЧ-инфицирования число клеток снижается. При этом заболевший продолжает чувствовать себя нормально. Данный период болезни может длиться на протяжении многих лет. Но наступает момент, кода количество клеток-хелперов достигает критической отметки. Это может проявиться следующими проблемами:

  • кандидоз полости рта и ЖКТ;
  • опоясывающий лишай (герпес);
  • неделями не спадающая высокая температура;
  • ночная потливость;
  • диарея;
  • частые ОРЗ и ОРВИ и др.

Если число Т-лимфоцитов снижается до 200 клеток/мкл, то диагностируют СПИД. Организм больного в таком состоянии не может сопротивляться даже простейшим микроорганизмам — от дрожжей до вирусов. У здорового человека к ним развивается резистентность, тогда как страдающего СПИДом они могут довести до летального исхода. Чаще всего возбудителями смертельных заболеваний становятся токсоплазма, криптоспоридии, цитомегаловирус. Кроме того, снижение лимфоцитов провоцирует образование злокачественных опухолей.

При отсутствии должного лечения пациенты с ВИЧ-инфекцией не переступают порог выживаемости в 10 лет. Грамотно и своевременно назначенная терапия затормаживает развитие болезни, в разы увеличивая продолжительности жизни больного. ВИЧ-положительный человек в таком случае может дожить до преклонных лет.

Основной метод диагностики инфекции — анализ крови. С момента заражения до появления антител в крови проходит 1–3 месяца.

Методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции

Разные виды лабораторных анализов венозной крови, взятой натощак, позволяют обнаружить наличие или отсутствие ВИЧ-инфекции в крови. Рассмотрим виды этих исследований.

Качественный анализ

  • Скрининговое исследование иммуноферментными (ИФА) методами представляет собой выявление антител к антигенам ВИЧ-типов: ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Уже со второй недели после инфицирования могут появиться антитела, хотя они способны обнаружиться и позже — через несколько месяцев. В последующее время количество антител растет и сохраняется в крови пациента. При наличии антител в большинстве случаев клинические признаки ВИЧ не проявляются 2–10 лет.
    Отметим, что данный тест не всегда точен, возможен ложноположительный результат. В любом случае при положительном результате назначается повторный анализ через 2-3 недели.
  • Верификационное исследование методом иммуноблота проводится, если описанный выше анализ дважды дал положительный результат. Данное исследование сочетает анализ ИФА и метод электрофореза, который позволяет разделить по молекулярному весу входящие в состав вируса антигены. Данное исследование имеет максимальную точность.

Количественный анализ

  • Полимеразная цепная реакция (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени дает возможность определить концентрацию вирусной РНК в плазме крови. Тест проводят в целях ранней диагностики возможного инфицирования после случая повышенного риска (на 7–10 день после предположительного инфицирования).
    Также данный анализ назначается для оценки эффективности применяемой терапии, для решения вопроса о начале антиретровирусной терапии, о проведении кесарева сечения у инфицированных беременных за 4 недели до родов.
    Такое исследование крови проводят новорожденным детям инфицированных матерей. Полученный дважды положительный ответ говорит о заражении ребенка.

Показания к назначению

Поводом пройти исследование на ВИЧ-инфекцию может стать множество причин. Тест необходим перед оперативным вмешательством, в случае планирования беременности, риск приобретения данной инфекции несут случайные половые контакты. Отдельная категория граждан (врачи, педагоги, работники пищевых производств, продавцы пищевой продукции и др.) обязана проходить тест в рамках оформления медицинской книжки, являющейся обязательным условием допуска к работе.

Что касается тревожных симптомов, то обычно врачи назначают анализ на ВИЧ при следующих состояниях:

  • Резкая потеря веса.
  • Диарея, длящаяся более трех недель.
  • Лихорадка неясного происхождения.
  • Увеличение лимфатических узлов в разных областях.
  • Лейкопения и лимфопения.
  • Тяжелые инфекционные заболевания: пневмония, кандидоз внутренних органов, туберкулез, манифестный токсоплазмоз, частые случаи обострения герпесвирусной инфекции и другие.

Специальной подготовки перед сдачей венозной крови не требуется. Единственное — это воздержание от приема пищи в течение 8–10 часов. Также накануне рекомендуется избегать физических и эмоциональных нагрузок, отказаться от употребления алкоголя.

Проведение анализа на ВИЧ

Вся процедура забора венозной крови занимает не более пяти минут. После взятия материала место укола дезинфицируют и заклеивают специальным пластырем. Так как анализ берется натощак, во избежание головокружения после забора крови следует выпить сладкий чай или съесть кусочек шоколада.

В государственных поликлиниках, чтобы получить направление на анализ, придется сначала посетить участкового терапевта. В частных же медицинских центрах нужно просто заполнить заявку на анализ. Для этого в клинике попросят предъявить паспорт или какой-либо другой документ, удостоверяющий личность (миграционная карта, водительские права, военный билет и т. д.). Документ позволит идентифицировать результаты анализа. Впрочем, тест на ВИЧ можно сделать и анонимно. В этом случае заявке и образцу крови, который отправляется на анализ в лабораторию, присваивается номер, известный лишь пациенту и медицинскому персоналу. Однако результаты анонимных исследований не могут быть представлены для госпитализации, в женские консультации и не могут быть зарегистрированы в ОРУИБ (Отдел регистрации и учета инфекционных болезней).

Расшифровка результатов исследования

Следует помнить, что интерпретировать результаты исследования и поставить точный диагноз способен только врач. Полученный результат ни в коем случае не может быть поводом для самолечения, к тому же одни и те же результаты у разных пациентов могут говорить о противоположной клинической картине.

Качественный анализ на ВИЧ

  • Скрининговый — если антител в крови нет, то в ответе пишут: «Отрицательно». Если же антитела к ВИЧ обнаружены, проводится повторное исследование. В случае если и оно дало положительный результат, пробу исследуют методом иммуноблота.
  • Верификационный — если на тест-полоске обнаружены потемнения в местах локализации белков gp160, gp120, gp41, то ставят диагноз «ВИЧ». Другим вирусам соответствует свой набор белков.
    При этом важно учитывать, что метод иммуноблота позволяет точно установить наличие вируса лишь тогда, когда набор антител в крови является полным, а именно, если одновременно обнаружены белки: gp160, gp120, gp41 — то это однозначно трактуется как ВИЧ-инфекция. Но если хотя бы одного из перечисленных белков нет, например, отсутствует gp41, но есть gp160, gp120, то тест расценивается как сомнительный и требует повторного проведения.

Количественный анализ на ВИЧ

Показывает объем выявленной РНК вируса иммунодефицита человека, выраженный в C/ml (копии/мл). Интерпретировать результаты следует следующим образом:

  1. РНК не выявлена, либо значение ниже предела чувствительности метода (20 копий/мл).
  2. Меньше 20 копий/мл — РНК выявлена в концентрации на пределе чувствительности метода, характеристика с удовлетворительной точностью невозможна.
  3. От 20 до 10 6 копий/мл — полученное значение находится в пределах линейного диапазона, результат достоверен.
  4. Больше 10 6 копий/мл — РНК выявлена в указанной концентрации, выходящей за верхний предел линейного диапазона.

Сроки и стоимость анализа

Анализы на ВИЧ можно сдать в частных клиниках. В этом случае стоимость скринингового исследования иммуноферментными методами в среднем составит от 400 до 800 рублей. Срок выполнения исследования — один рабочий день, хотя возможна и срочная диагностика, в таком случае ответ будет получен через 2 часа.

Верификационное исследование методом иммуноблота обойдется в 3000–5000 рублей. Результаты станут известны через 3–7 рабочих дней.

Полимеразная цепная реакция с детекцией в режиме реального времени представляет собой более сложный анализ, поэтому его стоимость намного выше — она составляет 10 000–12 000 рублей. Результаты исследования готовятся в среднем 10–14 рабочих дней.

Согласно законодательству все иммунные анализы в государственных медицинских учреждениях проводятся бесплатно. В обязательном порядке проверку на ВИЧ-инфекцию проходят беременные женщины, пациенты, готовящиеся к оперативному вмешательству и госпитализации. В остальных случаях направление на данное исследование назначается по усмотрению врача.

Пройти анализ на ВИЧ-инфекцию сегодня не составляет сложности. Сама процедура практически безболезненна и занимает считанные минуты. Современное оборудование и методики проведения теста позволяют получить максимально точные результаты.

Специфические серологические маркеры вич инфекции

Источник: www.kp.ru

Serological Markers for Inflammatory Bowel Disease in AIDS Patients with Evidence of Microbial Translocation
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2981579/

Задуманные и разработанные эксперименты: АК RB DG. Проводили эксперименты: AK PA. Проанализированы данные: АК RB DG. Написал газету: AK DG.

Разбивка слизистой оболочки кишечника при хронической ВИЧ-инфекции позволяет транслоцировать бактериальные продукты, такие как липополисахариды (ЛПС) из кишечника в кровоток. Микробная транслокация также возникает при воспалительном заболевании кишечника (IBD). Серологические маркеры IBD полезны для диагностики IBD и для дифференциации между болезнью Крона (CD) и язвенным колитом (UC). Здесь мы оцениваем выявление серологических маркеров IBD у ВИЧ-инфицированных пациентов с развитыми заболеваниями и их связь с маркерами ВИЧ-инфекции.

Серологические маркеры IBD (ASCA, pANCA, anti-OmpC и anti-CBir1) были измерены с помощью ELISA в плазме у пациентов со СПИДом (n = 26) с низким количеством CD4 (<300 клеток>

Серологические маркеры IBD были обнаружены примерно у 65% больных СПИДом с подтверждением микробной транслокации. Образец антител, соответствующий IBD, был обнаружен у 46%; из них 75% имели CD-подобный рисунок. Мета-анализ данных из 20 опубликованных исследований по серологическим маркерам IBD у субъектов CD, UC и non-IBD показал, что серологические маркеры IBD чаще обнаруживаются у пациентов со СПИДом, чем при контроле за небом IBD и здоровом контроле, но реже чем у пациентов с CD. Не было никакой связи между серологическими маркерами IBD и маркерами ВИЧ-инфекции (вирусная нагрузка вируса и количество CD4) в когорте исследования.

Серологические маркеры IBD могут обеспечить неинвазивный подход к мониторингу воспалительных заболеваний кишечника, связанных с ВИЧ. Необходимы дальнейшие исследования для изучения их клинического значения у ВИЧ-инфицированных лиц.

Т-клетки CD4 в связанной с кишечником лимфоидной ткани (GALT) являются основными клетками-мишенями ВИЧ, а GALT является важным сайтом для репликации и патогенеза ВИЧ [1] — [4]. Значительная потеря CD4 Т-клеток происходит в желудочно-кишечном тракте в течение первых нескольких недель инфекции [5] — [7]. Позже, при хронической ВИЧ-инфекции, потеря целостности GALT и нарушение барьера слизистой оболочки кишечника приводит к микробной транслокации [8] — [10], о чем свидетельствует выпуск таких микробных продуктов, как бактериальные эндотоксины (липополисахариды (LPS) компонент грамотрицательных бактерий) в кровообращение (эндотоксемия) [11]. Микробная транслокация из протекающей кишки может способствовать иммунной активации при хронической ВИЧ-инфекции [11] — [15]. Повышенные уровни плазменной ЛПС и бактериальной 16S рДНК были использованы для измерения транслокации микробных продуктов из желудочно-кишечного тракта [11], [16].

Микробная транслокация также является отмеченной особенностью воспалительного заболевания кишечника (ИБД) [17] — [20]. IBD включает группу кишечных заболеваний, характеризующихся хроническим воспалением кишечника; Болезнь Крона (CD) и язвенный колит (UC) являются общими клиническими подтипами IBD. Кишечная бактериальная флора запускает и подавляет аберрантный иммунный ответ у генетически восприимчивого хозяина, что приводит к хроническому воспалению кишечника [21], [22]. Низкий уровень эндотоксемии имеет патогенное значение в ВЗК; это происходит у 31% -48% пациентов с СД и у 17% -28% пациентов с УЦ [18], [23], с более высокой частотой у пациентов с активным ИБС (94% на CD, 88% в УЗ) [19 ].

Роль кишечной микрофлоры в патофизиологии IBD подчеркивается наличием реактивности антител к микробным антигенам. Эти серологические маркеры могут быть полезны для различения CD и UC, а также для помощи в диагностике IBD наряду с клинической историей, эндоскопией и физическим осмотром [24]. В настоящее время доступны серологические маркеры IBD: ASCA (антитело против Saccharomyces cerevisiae) [25] — [31], pANCA (перинуклеарное антитело против нейтрофилов) [25] — [30], [32] и анти-OmpC (антитело против наружной мембраны порин C E.coli) [28], [33] — [37]. ASCA, которая направлена ​​против маннозного эпитопа в фосфопептидоманнане клеточной стенки Saccharomyces cerevisiae [30] — [32], связана с CD [25] — [27], [37] — [41]. Чувствительность и специфичность для обнаружения ASCA-антител в CD составляют 50% -70% и 80% -90% соответственно [25], [27], [29], [30], [32], [37], [ 42], [43]. pANCA представляет собой антитело, направленное против цитоплазматических компонентов нейтрофилов с перинуклеарным рисунком окраски [25], [44], [45]. pANCA обнаруживается у 40% -80% пациентов с UC, но также у 6% -20% пациентов с CD, которые могут быть классифицированы как имеющие UC-подобный фенотип [30], [32], [37], [46] , [47], с чувствительностью и специфичностью между 55% ​​-70% и 80% -95% у пациентов с УЦ [27], [29], [30], [32], [37], [43], [45 ] — [47]. Антитела против OmpC обнаруживаются у 40% -55% пациентов с CD [25], [48] — [51], чувствительность и специфичность которых варьируются от 20% до 55% и 75% -95%, соответственно [25], [34], [37], [50], [52]. Анти-CBIR1 (антитела против бактериального флагеллина) представляет собой новый серологический маркер, связанный с IBD [28], [35], [53] — [58]. CBiel1 флагеллин является иммунодоминантным и колитогенным антигеном кишечной микробной флоры [58]. Anti-CBir1 обнаружен примерно у 50% пациентов с CD [28], [35], [53], [55] — [58] и независимо связан со сложными CD [25], [33], [35] , [59].

Ряд параллелей наблюдается между ВИЧ и IBD с точки зрения болезни кишечника [60] — [62]. У ВИЧ-инфицированных пациентов была описана небольшая атрофия кишечной ворсинки и дефекты энтероцитов. Поскольку эти дефекты обычно возникают в отсутствие кишечных патогенов, термин «энтеропатия» был использован [60], [62], [63]. Характерными особенностями ВИЧ-энтеропатии являются диарея, воспаление желудочно-кишечного тракта, повышенная проницаемость кишечника и снижение восстановления и регенерации слизистой оболочки [1], [2], [60], [64]. В предыдущих исследованиях сообщалось о редких случаях ИББ у ВИЧ-инфицированных пациентов [61], [65] — [67]. Однако, насколько нам известно, ни одно из сообщений не изучало распространенность антител ASCA, OmpC и CBir1 при ВИЧ-инфекции.

Ранее мы продемонстрировали, что повышенные уровни циркулирующих ЛПС коррелируют с активацией моноцитов во время ВИЧ-инфекции и, таким образом, могут способствовать хронической иммунной активации [12]. В настоящем исследовании мы оценивали определение серологических маркеров IBD у больных СПИДом с низким числом лимфоцитов CD4 (<300 клеток>

Пациенты со СПИДом с числом лимфоцитов CD4 <300 клеток>

Образцы замороженной плазмы отгружали на сухом льду в лабораторию Prometheus (Сан-Диего, Калифорния) и анализировали слепым способом; Сотрудники Prometheus не имели доступа к клинической информации, за исключением статуса ВИЧ / HCV. Прометей IBD Serology 7 — это самый полный доступный тест IBD с использованием нескольких фирменных маркеров и использование технологии распознавания образов Smart Diagnostic Algorithm на базе компьютера для помощи в диагностике IBD, а также для различения CD и UC. Тесты Прометей IBD Serology 7 включают следующие анализы: ASCA IgA и IgG, антитела против OmpC IgA, IgG против CBIR1 и аутоантител pANCA с помощью ELISA и иммунофлуоресцентный анализ (IFA) для определения перинуклеарной картины нейтрофилов и чувствительности ДНК. Контрольный срез для каждого анализа определяли лабораториями Prometheus (ASCA IgA <20 eu>

В соответствии с инструкциями изготовителя использовали мультиплексный иммуноанализ (Bi-source 25-plex Human Cytokine Assay, Invitrogen., CA, USA), состоящий из флуоресцентных микросфер, конъюгированных с моноклональным антителом, специфичным для белка-мишени, для измерения уровней следующих цитокины IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, IFN-, IFNγ , TNF-α-гранулоцитарно-моноцитарный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), моноцитарный хемоаттрактивный белок (MCP-1 / CCL2), макрофагальный воспалительный белок (MIP-1β / MIP-1α), IP-10, MIG, эотаксин и RANTES. Вкратце, плазму разбавляли 1: 1 и инкубировали с шариками, связанными с антителом. Комплексы промывали и затем инкубировали с биотинилированным детектирующим антителом, за которым следовал стрептавидин-фикоэритрин, перед оценкой титров концентрации цитокинов. Рекомбинантные цитокины использовали для установления стандартных кривых. Уровни цитокинов определяли с использованием устройства считывания мультиплексных матриц из инструментальной системы Luminex ™ (Bio-Plex Workstation из Bio-Rad Laboratories, США). Концентрацию аналита рассчитывали с использованием программного обеспечения Bioplex Manager.

Данные анализировали с использованием теста Манна-Уитни U и коэффициента ранговой корреляции Спирмена. Различия считались значимыми при p <0,05.

Чтобы исследовать частоту и структуру серологических маркеров IBD у пациентов со СПИДом, мы использовали тест Promoteheus IBD Serology 7 для выявления серологических маркеров IBD в образцах плазмы. Субъекты были отобраны из более крупной когорты из 119 субъектов СПИДа с числом лимфоцитов CD4 <300 клеток> 80 пг / мл); Уровни ЛПС были определены в предыдущем исследовании с использованием диаза-связанного лизата лимуата Limulus (LAL). Исследовательская когорта состояла из 26 пациентов со СПИДом с относительно высокой плазменной вирусной нагрузкой (медиана 10 935 копий / мл, диапазон <50-2, 210 000) и низким числом CD4 (медиана 80 клеток / мкл, диапазон 3-261), а также высокая частота внутривенное употребление наркотиков (IVDU) (65%), коинфекция HCV (50%) и связанная с ВИЧ деменция (HAD) (50%). Одиннадцать субъектов были как IVDU, так и HCV-положительными. Демографические и клинические характеристики когорты исследования показаны в таблице 1. Все пациенты были на ВААРТ, но только 23% были подавлены вирусологически (менее 400 копий РНК ВИЧ / мл).

В когорте исследования (n = 26) ASCA IgA, pANCA и anti-OmpC были обнаружены в 31% (8/26), тогда как ASCA IgG и анти-CBir1 были обнаружены в 15% (4/26) (таблица 2 ). Лаборатории Prometheus классифицировали предметы как имеющие CD- или UC-подобный рисунок в соответствии с технологией Smart Diagnostic Algorithm Technology. Согласно этой классификации 46% (12/26) испытуемых показали структуру, согласующуюся с IBD, с 75% (9/12), имеющую CD-подобную структуру и 25% (3/12), имеющую UC-подобную структуру , У пациентов с положительной структурой IBD антитела ASCA IgA и IgG были обнаружены у 50% и 33%, тогда как анти-OmpC, anti-CBir1 и pANCA были обнаружены соответственно у 67%, 33% и 42% (таблица 2 ). Три пациента с шаблоном pANCA (+) против OmpC (+) и 1 с паттерном pANCA (+) против CBIR1 (+) (n = 1) также могут быть классифицированы как имеющие шаблон, соответствующий UC-подобному CD [ 25], [29], [48], [68], [69], [70]. Таким образом, серологические маркеры IBD были обнаружены примерно у 65% пациентов со СПИДом с высокими уровнями ЛПС в плазме, у 46% пациентов была сходная с IBD картина, а у большинства из них была CD-подобная картина.

Сокращения: Героин IVDU — Внутривенные потребители наркотиков, употребляющие героин, или героин и кокаин; ASCA IgA / Ig — антитела против Saccharomyces cerevisiae; Anti-OmpC IgA — Покровная наружная мембрана C на E.coli; Anti-CBir1- распознает бактериальный флагеллиновый антиген, ассоциированный с IBD; pANCA-аутоантитела — специфическое к панда-аутоантителе IBNA (NSNA, специфическое для нейтрофилов ядерное аутоантитело);

* На основе интеллектуального алгоритма Prometheus;

** пациенты с UC-подобным рисунком согласно Smart Algorithm также классифицируются как имеющие UC-подобную структуру CD;

*** Один пациент с CD-образным рисунком в соответствии с интеллектуальным алгоритмом Prometheus также классифицируется как имеющий UC-подобный образ диска.

Предыдущие исследования показали, что больные СПИДом с ИБД героина, коинфекцией HCV или HAD имеют более высокие уровни ЛПС в плазме по сравнению с соответствующими контрольными группами [12], [71]. Кроме того, злоупотребление психоактивными веществами и коинфекция HCV связаны с увеличением заболеваемости бактериальными инфекциями [72]. Поэтому мы рассмотрели схему ASCA, pANCA, anti-OmpC и anti-CBir1 у пациентов со СПИДом, классифицированных по этим подгруппам (таблица 2 и данные не показаны). Не было существенной разницы в частоте или величине серологических маркеров IBD между потребителями героина IVDU по сравнению с пациентами без злоупотребления психоактивными веществами, HCV-положительными по сравнению с HCV-отрицательными субъектами или HAD по сравнению с пациентами, не страдающими HAD (таблица 2 и данные не показано). Таким образом, не было различий в величине или частоте серологических маркеров IBD в этих клинических подгруппах.

Более высокие уровни ASCA IgG (медиана 31,4 EU / мл, диапазон 12-120 по сравнению с 12 EU / ml, 12-27,9, p = 0,027), анти-OmpC (25,9 EU / мл, 4,7-111, по сравнению с 7,1 EU / мл, 1-15,3, р = 0,005) и анти-CBIR1 (18,6 EU / мл, 8-37,7 по сравнению с 9,1 EU / мл, 5,5-15,6, p = 0,001) были обнаружены у пациентов с положительной структурой IBD, как по сравнению с отрицательной моделью (таблица 3 и рис. S1). Напротив, между этими двумя группами не было достоверной разницы между уровнями ASCA IgA и pANCA (p = 0,135 и p = 0,540). Затем мы исследовали взаимосвязь серологических маркеров IBD с маркерами ВИЧ-инфекции, плазменными LPS и EndoCAb. Уровни РНК ВИЧ, количество лимфоцитов CD4, плазменные уровни sCD14, плазмы LPS и IgM EndoCAb были одинаковыми в 2 группах (таблица 3). Кроме того, не было достоверных корреляций (корреляция Спирмена) между уровнями отдельных серологических маркеров IBD и уровнями РНК ВИЧ, количеством клеток CD4, плазменными SCD14 или уровнями ЛПС в плазме (данные не показаны). Таким образом, мы не обнаружили никакой связи между серологическими маркерами IBD и маркерами ВИЧ-инфекции или уровнями ЛПС плазмы в когорте исследования.

Сокращения: IBD — воспалительное заболевание кишечника;

** числа представляют медианные значения; Статистический анализ проводили с использованием теста Манна-Уитни,

* p <0,05 статистически значимо; Антитела ASCA IgA / IgG- Anti-Saccharomyces cerevisiae; Anti-OmpC IgA - Покровная наружная мембрана C на E.coli; Anti-CBir1- распознает бактериальный флагеллиновый антиген, ассоциированный с IBD; pANCA autoantibody-

IBD-специфическое аутоантитело pANCA (NSNA, специфическое для нейтрофилов ядерное аутоантитело).

В IBD дисрегулированный воспалительный ответ связан с повышением активности слизистых и системных уровней цитокинов (то есть IL-1, IL-6, IL-8, IL-12 и TNF) [73]. Мы использовали мультиплексный анализ для измерения уровней 25 цитокинов и хемокинов в образцах плазмы у 20 больных СПИДом в когорте исследования и изучения их взаимосвязи с отдельными серологическими маркерами IBD. Мы обнаружили более высокие уровни IL-2R, CXCL9, CXCL10, CCL2 и IL-6 (p = 0,001, 0,0003, 0,0002, 0,017 и 0,0005 соответственно) в плазме больных СПИДом по сравнению с здоровыми неинфицированными средствами контроля (данные не показаны) , Никаких существенных различий в уровнях цитокинов / хемокинов не наблюдалось, когда субъекты СПИДа были сгруппированы в соответствии с позитивным (n = 9) по сравнению с отрицательным вариантом IBD (n = 11) (данные не показаны). Только IL-10 показал тенденцию к значимости (медиана 7,26 (диапазон 0-41,94 пг / мл) против 2,14 (0-8 пг / мл) соответственно, p = 0,087, данные не показаны), причем более высокие уровни у пациентов с положительным Модель IBD. Затем мы исследовали ассоциацию отдельных серологических маркеров IBD с уровнями IL-1β, IL-2R, IL-6, IL-10, IL-17, IP-10, IFNγ, TNF, MIP-1α, MIP-1β и MCP-1 и обнаружил положительную корреляцию только между антителом против CBIR1 и IL-6 (r = 0,447, p = 0,048, фиг. S2). Вместе с предыдущими исследованиями, демонстрирующими, что антиген CBir1 может индуцировать IL-6 и другие провоспалительные цитокины [56], [58], это открытие повышает вероятность того, что транслокация флагеллина в кровообращение может быть фактором, который способствует иммунной активации при СПИДе.

Предыдущие данные свидетельствуют о том, что величина ответов антител к микробным антигенам связана с повышенным риском осложненного CD [25], [42], [59]. Мы протестировали эту гипотезу относительно прогрессирования ВИЧ-инфекции, подсчитав количество положительных антител (ASCA, pANCA, anti-OmpC и anti-CBir1) и скорректировав их с 0-3 (таблица 4). Ни у одного из испытуемых не было положительного ответа на все 4 антитела; 26,9% (7/26) — 1, 30,7% (8/26) — 2, 7,6% (2/26) — 3, а 34,6% (9/26) — от нуля. Сорок два процента (6/14) субъектов с числом лимфоцитов CD4 <100 клеток> 100 клеток / мкл имели ответы на антитела к 2 антигенам, но эта разница не достигала статистических значение (p = 0,676). Субъекты, сгруппированные в соответствии с уровнями РНК ВИЧ> 10 000 против <10000 копий> 109 пг / мл против <109 пг>

Используемые сокращения: HAD-ассоциированная с ВИЧ деменция; Героина IVDU — героина, употребляющего наркотики внутривенно; LPS-липополисахарид;

Тестируемые антитела — антитела ASCA IgA / IgG- Anti-Saccharomyces cerevisiae; Anti-OmpC IgA — Покровная наружная мембрана C на E.coli;

Anti-CBir1- распознает бактериальный флагеллиновый антиген, ассоциированный с IBD; аутоантитела pANCA — специфичное для IBD аутоантитела pANCA (NSNA, специфическое для нейтрофилов ядерное аутоантитело);

* представляет собой срез выше среднего значения для когорты исследования.

В этом исследовании мы исследовали серологические маркеры IBD у пациентов со СПИДом с высокими уровнями ЛПС в плазме и обнаружили серологическую картину, подобную IBD, в 46%. Среди испытуемых с положительной структурой IBD у 75% была CD-подобная картина, а у 25% была UC-подобная картина. Связь pANCA с CD-маркерами была описана как UC-подобный рисунок Крона [25], [29], [43], [69], [70]. Основываясь на этой классификации, 15% исследуемой когорты имели UC-подобную структуру CD. Эти данные согласуются с частым появлением заболеваний кишечника, связанных с ВИЧ, с участием тонкой и толстой кишки у больных СПИДом [1], [2], [3], [4]. Антитела к микробным антигенам (ASCA IgG, anti-OmpC и anti-CBir1) были обнаружены на более высоких уровнях у пациентов со СПИДом по сравнению с пациентами без серологической картины IBD. Эти данные вместе с серологическими маркерами обнаружения IBD у примерно 65% больных СПИДом с высоким уровнем ЛПС плазмы предполагают, что маркеры IBD, в частности ASCA, anti-OmpC и anti-CBir1, могут обеспечить неинвазивный подход для мониторинга связанных с ВИЧ воспалительные заболевания кишечника и, возможно, терапевтические реакции.

Наша первоначальная гипотеза заключалась в том, что высокие уровни ЛПС в плазме или маркеры ВИЧ-инфекции будут связаны с обнаружением серологических маркеров IBD. Однако мы не обнаружили различий в уровнях ЛПС между субъектами СПИДа по сравнению с серологической моделью, сходной с IBD, и отсутствием связи между частотой или величиной серологических маркеров IBD и уровнями РНК ВИЧ, количеством клеток CD4, уровнями SCD14 или LPS в плазме. Мы обнаружили более высокую величину ответов антител к двум антигенам у пациентов со СПИДом с низким числом лимфоцитов CD4 или высокой вирусной нагрузкой по сравнению с другими клиническими подгруппами, но эта разница не достигла статистической значимости. Антитела pANCA ранее были обнаружены у 18% до 41,9% пациентов с симптоматической ВИЧ-инфекцией [74], [75], [76] и у 20% пользователей героина с системными осложнениями независимо от ВИЧ-инфекции [77]. В соответствии с этими выводами, мы обнаружили ПАНСА у 31% больных СПИДом и 38% потребителей героина. Тем не менее, обнаружение или уровни pANCA не различало подгруппы, классифицированные по положительной схеме IBD, маркеры ВИЧ-инфекции или употребление героина IV. Вместе эти неожиданные результаты могут отражать различия в комстантализме кишечника, другие факторы хозяина, которые влияют на гомеостаз кишечника или ограничения нашего исследования, такие как малый размер выборки, дизайн поперечного сечения или выбор предметов с высокими уровнями ЛПС. В качестве альтернативы, серьезность заболевания кишечника, связанного с ВИЧ, не может быть обнаружена серологическими измерениями маркеров IBD или биомаркеров ВИЧ-инфекции. Мы также не можем исключить возможность того, что отсутствие ответов антител к микробным антигенам у 35% (9/26) больных СПИДом с высоким уровнем ЛПС отражает ослабленные гуморальные иммунные ответы. Другим ограничением нашего исследования является отсутствие данных об эндоскопии или патологии кишечника для когорты исследования. Виазис и др. [66] исследовали результаты ИБД у ВИЧ-инфицированных пациентов, у которых был диагноз IBD, и обнаружили, что у этих пациентов более высокий курс лечения с меньшей вероятностью рецидива IBD по сравнению с ВИЧ-отрицательными пациентами с IBD. Это объясняется снижением количества лимфоцитов CD4 у ВИЧ-инфицированных лиц, подавляющих активность болезни на CD. Если это так, низкий процент CD4 в нашей исследовательской когорте может влиять на отношения между маркерами ВИЧ-инфекции или уровнем ЛПС и серологическими антителами к IBD. Th17 подмножество CD4 + T-клеток играет важную роль в патогенезе IBD; ВИЧ преимущественно заражает и истощает эти клетки в GALT, что также может помочь объяснить лучший курс лечения, наблюдаемый у пациентов с диагнозом IBD, которые являются ВИЧ-положительными по сравнению с теми, кто ВИЧ-отрицателен. Большие проспективные исследования необходимы для определения клинического значения серологических маркеров IBD у ВИЧ-инфицированных пациентов и их связи с ВИЧ-инфекцией кишечника.

Для оценки диагностической точности серологических антител IBD и их способности различать CD, UC, воспалительных и невоспалительных не-IBD-субъектов болезни и здорового контроля, мы провели метаанализ серологических данных из 20 опубликованных исследований [25], [27] — [30], [33] — [35], [37], [42], [49], [52], [53], [55], [57], [58], [78 ] — [81]. Ранее сообщалось об обширном метаанализе для ASCA и pANCA-антител [43]. Однако, насколько нам известно, настоящее исследование является первым метаанализом для всех доступных серологических маркеров IBD. В соответствии с предыдущими сообщениями [25], [27], [29], [30], [34], [37], [79], [81] наш метаанализ показал, что распространенность ASCA IgA / IgG была 45% у субъектов CD по сравнению с 7,9% и 3,7% при не-IBD и здоровом контроле, соответственно, и pANCA преобладали у 42,4% пациентов с UC (таблица 5) [26], [27], [29], [ 32], [37], [44], [82]. Anti-OmpC и anti-CBir1 были распространены у 29,4% и 55,2% субъектов CD, соответственно, по сравнению с 17,6% и 25,5% при контроле за не-IBD-инфекцией и 10,7% и 6,3% при здоровом контроле. Отдельный метаанализ 10 опубликованных исследований, в которых использовались серийные маркеры IBD Serial Markers (таблица S1), продемонстрировал сходные результаты: ASCA, anti-OmpC и anti-CBir1 более распространены в CD (48,5%, 32,2% и 55,8% соответственно), pANCA более распространен в UC (67,9%) и ASCA, pANCA и anti-OmpC, преобладающих в 1,6% -6,3% от контроля не-IBD-заболеваний и 3,9% -9,9% от здорового контроля (таблица S1). Мы обнаружили ASCA, anti-OmpC и anti-CBir1 у 15% -31% больных СПИДом с высоким уровнем ЛПС по сравнению с 29,4% -55,2% на CD, 7,9% -25,5% при контроле за не-ИБД и 3,7% -0,7% при здоровом контроле. Таким образом, серологические маркеры IBD чаще выявлялись у пациентов со СПИДом, чем при контроле не-IBD-заболеваниях или здоровых субъектах, но реже, чем у пациентов с CD.

CD-болезнь Крона; UC — язвенный колит;

* — любое из присутствующих антител; Контроль за заболеваниями включает воспалительные и невоспалительные болезни, не связанные с ИБС (n = 633), включая 264 невосприимчивых к кишечной болезни кишечника (например, колит, гастроэнтерит, целиакию и т. Д.); 193 невоспалительные заболевания кишечника (например, боль в животе, диарея, непереносимость лактозы и т. Д.); 90 ревматологических расстройств и 86 других (например, запор, тошнота, ректальное кровотечение и т. Д.).

Метаанализ включает 19 исследований с пациентами с CD [25], [27], [28], [29], [30], [33], [34], [35], [37], [42], [49], [52], [53], [55], [57], [58], [78], [79], [81], 12 с пациентами UC [25], [27], [29 ], [30], [34], [37], [42], [52], [57], [58], [78], [79], [81], 10 с контрольными заболеваниями, не связанными с IBD [ 25], [29], [30], [37], [52], [57], [58], [78], [79], [80], [81] и 8 с здоровым контролем [25 ], [27], [29], [30], [34], [42], [57], [58], [81].

Серологические маркеры IBD сами по себе не рекомендуются для диагностики и мониторинга IBD, потому что они недостаточно надежны для рутинного использования [50], [83]. Более того, предсказание IBD с использованием технологии Smart Diagnostic Algorithm Technology не было опубликовано в рецензируемых журналах, и проверка проверки проводилась с использованием только здоровых элементов управления [83]. Насколько нам известно, нет никаких проспективных исследований серологических маркеров IBD при прогнозировании курса болезни в UC или CD. Таким образом, для определения их прогностического значения необходимы проспективные исследования. Тем не менее, наш метаанализ подчеркивает полезность серологических маркеров IBD при различении CD, UC, контроля без IBD и здорового контроля и их потенциального использования для дальнейших исследований заболевания кишечника при ВИЧ-инфекции.

Несколько цитокинов с провоспалительной активностью (IL-1, IL-6, IL-8, IL-12 и TNF-α) активируются в IBD и, вероятно, будут играть важную роль в клинических и иммунопатологических проявлениях болезни [56 ], [73]. Концентрации плазменных IL-10 повышаются у субъектов с активными CD и UC [84] или с UC [85]. Аналогичным образом, более высокие уровни IL-10 у пациентов со СПИДом по сравнению с теми, у кого нет подобной ИБД картины, были предложены тенденцией к значимости в настоящем исследовании. Более высокие уровни IL-6 [56], [73] и отрицательная корреляция между IL-6 и анти-CBir1 ранее сообщались в CD-дисках [56]. Напротив, мы обнаружили положительную корреляцию между IL-6 и анти-CBir1 у больных СПИДом. Эти данные свидетельствуют о сложных отношениях между ответами антител к антигену CBIR1 и индукции IL-6 и повышают вероятность того, что транслокация флагеллина из кишечника в кровоток или связанные с ним патогенные процессы могут способствовать иммунной активации при хронической ВИЧ-инфекции.

Ограничениями этого исследования являются его структура поперечного сечения и небольшой размер выборки, что, возможно, уменьшило способность обнаруживать значительные ассоциации между серологическими маркерами IBD и маркерами ВИЧ-инфекции. Другим ограничением являются узкие критерии отбора, используемые для определения когорты исследования, ограниченные субъектами СПИДа с показателями CD4 <300 клеток>

Таким образом, мы выявили по меньшей мере один серологический маркер IBD примерно у 65% больных СПИДом с высоким уровнем ЛПС и серологическую модель, подобную IBD, у 46%. Обнаружение этих маркеров, в частности ASCA, anti-OmpC и anti-CBir1, могло бы стать потенциальным неинвазивным подходом к мониторингу заболевания кишечника, связанного с ВИЧ. Дальнейшие исследования необходимы для понимания клинической значимости серологических маркеров IBD при ВИЧ-инфекции и их полезности в качестве инструмента для изучения заболеваний кишечника, связанных с ВИЧ, и контроля за терапевтическими ответами.

Показаны различия в уровнях серологических маркеров IBD (A-ASCA IgA, B- ASCA IgG, C — Anti-OmpC и D-Anti-CBir1) у пациентов с показателем IBD. Линии показывают средние уровни для каждой группы. Тест Манна Уитни использовался для оценки разницы в уровнях антител между двумя группами, * p <0,05 считался статистически значимым. (EPS)

Щелкните здесь для получения дополнительных данных.

Уровни IL-6 положительно коррелировали с уровнями анти-CBir1 (n = 20 больных СПИДом, корреляция Спирмена). (EPS)

Щелкните здесь для получения дополнительных данных.

Мета-анализ 10 исследований с использованием лабораторий Prometheus IBD Serology 7 (DOC)

Щелкните здесь для получения дополнительных данных.

Мы благодарим исследователей на сайтах NNTC и доктора Дэвида Стоуна (больница Шаттак) за предоставление образцов плазмы от пациентов со СПИДом и клинических данных.

Конкурирующие интересы: авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Финансирование: Эта работа была поддержана NIH DA26322 и MH083588. R.B. поддерживали NIH DK44319, DK51362, DK53056 и Гарвардский центр по пищеварению. Р.А. была поддержана New Investigator Awards от Fonds de la Recherche en Santé Québec (FRSQ) и INSERM. Основные средства были поддержаны Гарвардским центром исследований СПИДа и грантами DFCI / Harvard Center for Cancer Research. NNTC поддерживали MH59745, NS38841, MH59656, NS54591 и MH59724. Финансисты не играли никакой роли в разработке исследований, сборе и анализе данных, решении опубликовать или подготовить рукопись.

Источник: rupubmed.com

Важность клинической диагностики ВИЧ

В понимании многих людей ВИЧ-инфицированный человек выглядит болезненно, изнеможенно. Он кашляет, чихает, чешется, стонет, у него все болит… На самом деле это не так! Проблема в том, что после инфицирования ВИЧ и в последующий инкубационный период симптомы полностью отсутствуют. Затем наступает острая фаза, на протяжении которой присутствуют симптомы, напоминающие ОРВИ или грипп. Но и они вскоре проходят, и наступает, так называемый, латентный период – продолжительный промежуток времени, когда ВИЧ-инфекция себя ничем не выдает. С момента инфицирования и до стадии пред-СПИДа может пройти порядка 10 лет, в течение которых, ни сам пациент, ни его окружение, даже и не подозревают о болезни. А когда она уже на полную мощность заявляет о себе, контролировать ее очень трудно. Сложно противостоять осложнениям ВИЧ, поддерживать практически разрушенную иммунную систему человека.

Очень важно понимать, что, хотя и есть группы риска – гомосексуалисты, наркозависимые и девушки легкого поведения – в основной массе, пациенты с ВИЧ-инфекцией – это обычные люди. Они учатся, ходят на работу, посещают общественные места, знакомятся в интернете – в общем, живут как все. К сожалению, но от ВИЧ никто не застрахован. Незащищенный половой контакт в порыве страсти, заветное тату без соблюдения стерильности, маникюр за полцены у начинающего мастера, уличная драка – все эти и множество других житейских ситуаций могут обернуться инфицированием ВИЧ.

Не ошибается лишь тот, кто не живет! Мы не можем знать все наперед, не можем исправить уже совершенных ошибок, но мы можем предпринять простые шаги для исправления их последствий – обратиться в ближайший кожно-венерологический диспансер, в местную клинику или специализированный СПИД-центр для сдачи анализов и ранней диагностики ВИЧ.

Благоприятные сроки для диагностики ВИЧ

Факт возможного инфицирования и плохое самочувствие без видимых причин – два веских основания для обращения к специалистам. Но отрицательный результат тестирования на антитела не всегда означает, что человек не инфицирован, так как существует период “серонегативного окна” (время между заражением и появлением антител), который составляет около трех месяцев. Поэтому лучше повторить их спустя 3 месяца с момента возможного инфицирования. Если же ответ опять будет отрицательным, но ваша тревога не проходит, и вы уверены в заражении ВИЧ, тогда лабораторную диагностику необходимо повторить спустя 6 месяцев после факта заражения.

Что касается плохого самочувствия, то поводом провериться на ВИЧ может быть сочетание следующих симптомов:

  • увеличение лимфатических узлов на шее, в паху, в области подмышек;
  • лихорадка;
  • мышечные или головные боли;
  • молочница и грибковые поражения, в том числе кандидоз полости рта;
  • воспаление слизистой носа, рта или глотки;
  • ночная потливость;
  • ломота в суставах;
  • длительная диарея;
  • тошнота, рвота;
  • резкое снижение массы тела;
  • высыпания на коже.

Важно понимать, что с момента, когда проявляются первые признаки ВИЧ-инфекции и до момента, когда заболевание переходит в латентную стадию, проходит очень мало времени – около 3-6 недель с факта инфицирования. Нельзя упускать из вида этот промежуток времени! Поскольку последующие 8-10 лет вы будет жить, нормально себя чувствовать и даже не подозревать о том, что больны ВИЧ-инфекцией. Драгоценное время будет упущено.

Тесты на ВИЧ: сроки и достоверность

Современные методы диагностики ВИЧ

В настоящее время в диагностике ВИЧ используется двухуровневый подход – косвенные и прямые тесты. Косвенные тесты позволяют обнаружить в крови пациента специфические антитела к ВИЧ, а прямые тесты помогают выявить собственно сам ВИЧ и определить степень вирусной нагрузки на организм. В России стандартная диагностика ВИЧ включает следующие методы лабораторных исследований:

  • ИФА (иммуноферментный анализ).
  • Иммуноблот (иммунный блоттинг).

Также могут быть применены следующие методики:

  • Экспресс-тест ИХА (иммунохроматография).
  • ПЦР (полимеразная цепная реакция).

Диагностические принципы лабораторных исследований и степень их достоверности приведены в нижеследующей таблице.

Метод исследования

Диагностический принцип

Достоверность

Время после заражения

Экспресс-тест ИХА

Выявление антител к ВИЧ

93-99%

с 3 недели

Скрининговый тест ИФА

Выявление антител к ВИЧ и антигенов вируса

Иммуноблот

Антитела к нескольким белкам ВИЧ

99,9%

с 5 недели

ПЦР

Исследуется генетический материал вируса

80%

с 5 дня

98%

со 2 недели

При проведении исследований важно использовать сверхточное оборудование и верно интерпретировать результаты анализов. В противном случае точность диагностики снижается. При этом специалисты считают, что рациональнее всего проводить исследования в следующей последовательности.

  1. Сначала экспресс-диагностика, основанная на методе ИХА.
  2. В случае положительного результата – еще один анализ крови по методу ИФА.
  3. Положительный второй результат – проводится дообследование методом ИФА или иммуноблоттингом.
  4. В исключительных случаях для окончательной постановки диагноза можно применить более сложный и дорогостоящий метод ПЦР.

Экспресс-тесты методом ИХА или скрининг ИФА,  предполагающий серологическое иммуноферментное исследование крови, выполняются в течение 15-30 минут. Высокая скорость диагностики актуальна в неотложных случаях, при планировании срочных операций. Но для постановки окончательного диагноза необходимо использовать основной метод диагностики – иммунный блоттинг. Если результаты ИФА и иммунного блоттинга противоречат друг другу, то возможно проведение референс диагностики – анализ сразу двумя методами. К проведению ПЦР прибегают в исключительных случаях, т.к. это наиболее дорогостоящий метод исследования. Далее разберем каждый из методов диагностики более подробно.

Экспресс-тест ИХА

Иммунохроматографические тесты неплохо зарекомендовали себя в экспресс-диагностике ВИЧ. Визуально они выглядят как полоски, на поверхность которых наносят исследуемый биологический материал (кровь, слюна). Для получения результата потребуется всего 10-15 минут, по истечении которых на тесте проявится, или цветная и контрольная полоска – положительный результат, подтверждающий наличие антител к ВИЧ, или только контрольная полоска – отрицательный результат.

С недавнего времени американская компания OraSure Technologies наладила массовое производство экспресс-тестов для домашнего применения. Они отпускаются без рецепта, и при желании их может использовать каждый желающий. Однако необходимо учесть, что по точности диагностики ИХА уступает методу ИФА, а для постановки окончательного диагноза необходимо проведение иммуноблота.

Скрининговый тест ИФА

Принцип метода основан на способности искусственно созданных белков ВИЧ, улавливать вырабатывающиеся в организме человека специфические антитела. В результате взаимодействия, тест-система ИФА изменяет окрас индикатора. Полученные изменения цвета обрабатываются с помощью аппаратуры, которая выдает результат анализа. При этом необходимо учесть, что скрининговый тест предназначен для выявления не ВИЧ как такового, а антител к нему. А поскольку для их появления в организме, необходимо время, то целесообразнее всего проводить скрининг спустя 3-6 недель после факта возможного инфицирования. Для этого достаточно всего 5 мл крови из вены пациента, забор которой проводят натощак, т.е. спустя 7-8 часов после последнего приема пищи.

Помимо положительного или отрицательного результата, тест ИФА может дать ложноположительный или ложноотрицательный результат.

  • Ложноположительный – речь может идти об сходных по своей структуре антителах, которые вырабатываются в организме при аутоиммунных заболеваниях, множественных миеломах, алкогольном гепатите и других патологиях.
  • Ложноотрицательный – скорее всего, тестирование было проведено преждевременно или иммунная система слишком слаба и не вырабатывает антитела к ВИЧ.

При сомнительном результате тест проводится повторно.

Иммунный блоттинг

Иммуноблот – это основной метод диагностики ВИЧ, сочетающий иммуноферментный анализ (ИФА) с предварительным электрофоретическим переносом на нитроцеллюлозную полоску антигенов вируса. Для их выявления анализ проводят в три этапа:

  • подготовка нитроцеллюлозной полоски;
  • исследование пробы биологического материала пациента;
  • трактовка результата.

Таким образом, в ходе проводимого исследования, основные белки ВИЧ распределяются по поверхности в виде отдельных полос, которые проявляются при проведении иммуноферментной реакции и подтверждают наличие или отсутствие антител к антигенам ВИЧ. Полученные в ходе исследования иммунным блоттингом результаты считаются окончательными.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Главное отличие ПЦР от других методов диагностики – тест-система определяет ДНК вируса. С ее помощью можно выявить даже единичные вирусные частицы. Применение метода возможно уже на 5ый день после факта возможного инфицирования с точностью до 80%, что позволяет провести раннюю диагностику ВИЧ. Однако ПРЦ проводят только в исключительных случаях.

  • для постановки диагноза новорожденным, появившимся на свет от ВИЧ-инфицированных матерей;
  • при сомнительных результатах иммуноблота;
  • для оперативного исследования донорской крови;
  • для оценки уровня ВИЧ в крови инфицированного пациента.

Несмотря на высокую чувствительность метода ПЦР, он обладает меньшей диагностической чувствительностью к ВИЧ, что объясняется вариабельностью генома вируса. Поэтому для постановки окончательного диагноза данный метод не используется.

Новые и альтернативные методы диагностики ВИЧ

Недавно, сотрудниками Питтсбургского университета был разработан новый высокочувствительный тест для обнаружения скрытых вирусов – тест TZA. Для его проведения требуется меньше времени и крови пациента. Принцип действия TZA сводится к поиску гена, который активируется только при репликации вируса. Несмотря на то, что разработчики уверены в эффективности теста, большинство специалистов склоняется к тому, что TZA не сможет заменить существующие методы диагностики полностью, поскольку он характеризуется иным механизмом действия и не подходит абсолютно каждому ВИЧ-инфицированному пациенту.

Где и как можно пройти диагностику ВИЧ

Сегодня тест на ВИЧ-инфекцию не является проблемой. При желании пациента, кровь на анализ можно сдать анонимно и абсолютно бесплатно. Сделать это можно в медицинских организациях по месту жительства, в Свердловском областном центре профилактике и борьбы со СПИД (г. Екатеринбург, ул. Ясная, 46. Регистратура: (343) 383-30-18 Телефон доверия по проблеме ВИЧ/СПИД: (343) 310-00-31 (будни, с 9 до 20 часов).

Диагностика ВИЧ – дело сугубо добровольное. Однако есть четыре ситуации, для которых прохождение теста является обязательным:

  1. Донорство.
  2. Трудоустройство на работу, предполагающую непосредственный контакт с биоматериалом, который может содержать ВИЧ.
  3. Иностранные граждане.

Лица при призыве на военную службу, поступающие в военные учебные заведения.

Но и в этих случаях тестирование не может проводиться насильно, поскольку для любого медицинского вмешательства необходимо добровольное и осознанное согласие пациента. Именно осознанное, поскольку каждый из нас должен понимать важность своевременной диагностики ВИЧ.

Источник: profilaktica.ru


You May Also Like

About the Author: admind

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.