Лабораторная диагностика кандидоза


Кандидоз (кандидамикоз) — оппортунистическая инфекционная болезнь кожи, слизистых оболочек и внутренних органов, которую вызывают дрожжевидные грибы рода Candida семьи Cryptococcaceae класса дейтеромицеты. Основным возбудителем является Candida albicans, реже — С. tropicales, С. krusei, С. guillermondii, С. lusitaniae. От других грибов они отличаются отсутствием настоящего мицелия. Иногда образуют псевдомицелий — удлиненные клетки, которые объединяются в цепочки, которые могут иметь терминальные хламидоспоры.Кандидоз встречается повсеместно, чаще всего как осложнение после многих инфекционных заболеваний, при длительном нерациональном лечении антибиотиками и антисептиками, которые подавляют нормальную микрофлору организма, при первичных и вторичных иммунодефицитах. Выделяют четыре основные формы кандидозов:1. Локальные — поражение кожи, ногтей, ногтевых валиков, слизистых оболочек рта, глотки, влагалища, вульвы.2. Системные — поражение дыхательных путей, кишечника, мочеполовой и центральной нервной систем.3.


нерализованные — хронический гранулематозный кандидоз, септикопиемия.4. Вторичные (аллергические) кандидозы — на фоне сенсибилизации организма возникают новые очаги воспаления, в которых возбудитель отсутствует.Микробиологическая диагностика кандидозов включает микроскопию патологического материала, выделения чистых культур грибов, проведение серологических реакций и постановку аллергических проб. При локальных и системных формах заболевания материал для исследования берут из пораженных участков — чешуйки кожи, соскобы с ногтей, слизь, гной, мокрота, мочу, желчь, ликвор, стул, при генерализованных — кровь, пунктаты абсцессов, биопсийный материал, от трупов — кровь из сердца, кусочки паренхиматозных органов.

Микроскопическое исследование

Под обычным световым, фазово-контрастным или аноптрального микроскопом изучают нативные (неокрашенные) препараты или мазки. Плотный патологический материал (кожные чешуйки, соскобы с ногтей, некротизированные ткани и т.д.) вносят в каплю 10% раствора гидроксида калия или натрия на предметном стекле, осторожно подогревают над пламенем газовой горелки в течение 1 мин и накрывают покровным стеклом. Материал жидкой консистенции исследуют в смеси спирта с глицерином и водой в соотношении 2:1:2, или в растворе Люголя двойной концентрации в препаратах надавленные капли без подогрева. Микроскопия проводят сначала с помощью объектива 8х, а затем 40х.


и наличии в исследуемом материале кандид в нативных препаратах обнаруживают круглые или овальные дрожжевые клетки, почкующихся, и псевдомицелий.Грибы кандиды встречаются на коже, слизистых оболочках и у здоровых людей, но, как правило, в небольшом количестве. Поэтому для более достоверной диагностики кандидоза важное количественное определение кандид в исследуемом материале. Обнаружение большого их количества в патологических выделениях (особенно при значительных разведениях) указывает на возможность кандидоза.Лучшие результаты дает исследование окрашенных препаратов. Высушенный тонкий мазок на предметном стекле фиксируют метиловым спиртом или в смеси Никифорова и окрашивают метиленовым синим (1-3 мин), генциановый фиолетовым (2-3 мин), фуксином Пфейфера (1-2 мин). Еще лучше красить мазки сложными методами. При окраске по Граму кандиды имеют темно-фиолетовый цвет, за Ципем-Нильсеном — синий с розово-желтоватыми включениями липидов, по Романовскому-Гимзе — розово-желтый с фиолетовыми включениями волютина.Кандиды можно обнаружить и при гистологическом исследовании срезов из пораженных тканей, окрашенных по методу Грама-Вейгерта или Шабадаша. При ранних сроках поражения можно применить прямой метод флуоресценции при обработке мазков изотиоцианатом флуоресцеина, который дает яркое золотисто-зеленое свечение.Более надежно диагноз кандидоза устанавливают посредством выделения чистой культуры С. albicans.

Микологическое исследования

Любой патологический материал сеют количественным методом на плотную среду Сабуро или сусло-агар, а также в глюкозный МПБ.


стерильных сред перед посевом добавляют пенициллин и стрептомицин для подавления роста сопутствующей бактериальной флоры. Посевы выращивают при температуре ЗО ° С. При росте более 1000 типичных колоний в расчете на 1 г исследуемого материала делают вывод, что кандиды является этиологическим агентом заболевания.Изолированные колонии С. albicans на агаре Сабуро круглые беловато-кремовые, блестящие, гладкие, с ровными краями, напоминающие капли майонеза. Они глубоко врастают в среду. Для выявления псевдомицелия колонии отсеивают в один из жидких сред — глюкозный МПБ, картофельную воду или морковно-рисовый отвар. Сначала появляется муть или осадок, реже — пленка на поверхности среды. Псевдомицелий обнаруживают на 3-5 день или позже при микроскопическом исследовании надавленные капли, пользуясь объективом 8х.Дифференциально-диагностические признаки С. albicans имеют важное значение для идентификации, поскольку этот вид является основным возбудителем кандидоза. На терминальных нитях псевдомицелия С. albicans образуются хламидоспоры — двухконтурные круглые структуры диаметром 10-20 мкм, бластоспоры появляются в результате почкования, располагаются нерегулярно с обеих сторон псевдомицелия.При культивировании в сыворотке или яичном белке при 37 ° С через 2-4 ч бластоспоры образуют характерные «ростовые трубки» или RB — фактор. Те штаммы, которые за столь короткий срок не приобретают «ростовых трубок», как правило, не вирулентные.Для идентификации видов грибов рода Candida используют также их ферментативную активность. С. albicans разлагает глюкозу, мальтозу и галактозу до кислоты и газа, С. tropicales-разлагает те же углеводы и дополнительную сахарозу, а С. fcrusei-только лактозу.


Серологическая диагностика

Серологическая диагностика проводится в основном при висцеральных формах кандидозов. При этом используют реакции агглютинации, связывания комплемента, преципитации, непрямой гемагглютинации, встречного имуноелектрофорезу и метод ИФА с парными сыворотками с использованием общепринятых методик. Результаты считают положительными при нарастании титра соответствующих антител в 4 и более раз. Для постановки реакции агглютинации, преципитации и связывания комплемента лучше использовать антигены из культур, выделенных от данного больного (автоштамы). Для более надежной серологической диагностики кандидоза лучше использовать одну из названных реакций, а две-три.

Биологическая проба

Биологическая проба используется при необходимости определить патогенность и вирулентность С. albicans. Выделенный от больного культуру вводят белым мышам или кроликам. Патогенными признают те культуры, которые в дозе 1 млн клеток вызывают гибель мышей в течение пяти суток, а кроликов — через девять суток.

Кожные аллергические пробы

Кожные аллергические пробы проводят путем внутрикожного введения кандида-аллергена. В качестве аллергена можно использовать поливалентную вакцину, содержит 200 млн клеток в 1 мл. После нагревания вакцины при 80 ° С в течение 2-х ч. ее вводят в объеме 0,1 мл внутрикожно. Положительную реакцию (гиперемия, отек, папула) учитывают через 24-48 часов. Аллергическая проба при кандидозах малоспецифична, поскольку сенсибилизация к грибковым антигенам встречается очень часто и повсеместно.


Источник: vse-zabolevaniya.ru

Причины

Кандидоз (молочница) поражает не только наружные, но и внутренние органы. Причиной заболевания являются дрожжеподобные грибы, которые обитают в организме каждого человека.

  1. Спровоцировать интенсивное размножение грибка может множество факторов. Например, переохлаждение, болезнь, стресс, изменение гормонального фона (во время беременности или приеме гормональных препаратов).
  2. При приеме антибиотиков наряду с патогенными бактериями погибает и полезная микрофлора кишечника и влагалища, которая контролирует рост и развитие грибов Candida. Наличие хронического заболевания, снижающего активность иммунитета (ВИЧ, венерические заболевания, инфекции) очень часто вызывает кандидоз.
  3. Кандидозом могут сопровождаться эндокринные заболевания (диабет, ожирение, нарушение функций щитовидной железы).
  4. Наконец, причинами кандидоза могут стать жаркий климат или ношение неудобного тесного или синтетического белья.

Источником инфицирования кандидозом, как правило, является собственная флора организма (аутоинфекция), однако может произойти заражение извне. Вызывая болезнь, грибок не меняет своих свойств – свои свойства меняет организм (снижается местная защита). Прикрепляясь к клеткам эпителия, патогенный грибок начинает паразитировать в них, проникая вглубь тканей.

В борьбе организма с кандидозом часто возникает динамическое равновесие, когда грибок стремится проникнуть глубже в ткани, но не может, а организм пытается его отторгнуть и также не может. В таком случае процесс может длиться годами, смещение равновесия в ту или иную сторону приведет либо к выздоровлению, либо к обострению процесса.

Кандидозы встречаются в нескольких формах в зависимости некоторых особенностей.

  1. Носительство.Человек является носителем заболевания. Симптомы кандидоза отсутствуют, лечить нет нужды.
  2. Острая.Сопровождается зудом, высыпаниями, выделениями. Лечить необходимо комплексно и качественно. Чаще всего инфицированию подвержены дети младшего возраста.
  3. Хроническая.Характерно затихание и проявление симптомов, возможны рецидивы. Развивается в случае, если неправильно лечить антибиотиками длительное время, применять гормональные контрацептивы.

Эта болезнь имеет несколько разновидностей, поскольку не имеет точной локализации в организме:

  • Урогенитальный кандидоз
    • женский.
    • мужской.

  • Кандидозы ротовой полости
    • Молочница губ
    • Молочница языка
    • Стоматит, а также орофарингеальный кандидоз – молочница слизистой оболочки рта, миндалин, десен.
  • Кожные и ногтевые кандидозы
    • На складках кожи (подмышки, область между ягодицами, паховые складки).
    • Кандидоз открытых (или гладких) частей кожи. Встречается редко.
    • Кандидоз на ладонях.
    • Кандидоз на ногтевых пластинах.
    • Кандидоз стоп.
  • Кандидозы внутренних органов
    • ЖКТ (желудка, пищевода, кишечника, заднего прохода).
    • Легких и бронхов.
    • Сердца.
    • Мозговой оболочки.
    • Глаз и ушей.
  • Кандидозы новорожденных детей (например, псевдомембранозный)

Симптомы кандидоза

Заболевание распространено повсеместно. Возбудители кандидоза обнаружены в воздухе, почве, на овощах, фруктах, продуктах кондитерского производства. Дрожжеподобные грибы встречаются как сапрофиты на здоровой коже и слизистых оболочках.

Проявления кандидоза, а следовательно симптомы и признаки зависят от локализации очага заболевания.

Кандидоз слизистой оболочки рта (оральный кандидоз, детская молочница) чаще всего встречается у детей, как правило, они заражаются от матери через родовые пути. Симптомы:


  • слизистая щек, зева, язык и дёсны становятся красными,
  • появляется отечность,
  • затем на слизистой оболочке полости рта возникают очаги белого творожистого налета.

При кандидозе кожи и ее придатков чаще всего очаги располагаются в крупных складках:

  • пахово-бедренных,
  • межъягодичных,
  • подмышечных впадинах,
  • под молочными железами.

Может поражаться кожа в межпальцевых складках,  чаще у детей и взрослых, страдающих тяжелыми заболеваниями – на коже ладоней, стоп, гладкой коже туловища и конечностей. Очаги в крупных складках выглядят как мелкие 1-2 мм пузырьки, которые вскоре вскрываются с образованием эрозий. Эрозии увеличиваются в размерах, сливаются, образуя большие участки повреждения.

Очаги кандидоза имеют неправильную форму, темно-красную окраску, вокруг очага – полоска отслаивающегося эпидермиса. Вне складок очаги имеют вид красных пятен с шелушением в центре, изредка вокруг очага могут появляться мелкие пузырьки.

Кандидоз влагалища (кандидамикоз, молочница) — это инфекционное заболевание слизистой влагалища, которое нередко распространяется на шею матки и вульву. Практически каждая женщина сталкивалась с таким заболеванием, а некоторые признаки кандидоза беспокоят постоянно. Чаще всего встречается у женщин репродуктивного возраста, но может возникать у девочек


Кандидоз кишечника (дисбактериоз) часто сопровождает вагинальный кандидоз или развивается изолированно. Обычно кандидоз кишечника появляется после приема антибиотиков или перенесенных кишечных инфекций. Грибы рода Candida поселяются в тонком кишечнике. Симптомы характерные для этого вида кандидоза: в стуле больного, страдающего кандидозом кишечника, часто обнаруживаются белые творожистые хлопья.

Кандидоз пищевода – заболевание, которое среди всех имеющихся в области гастроэнтерологии очень трудно определить. Для недуга характерно несоответствие степени тяжести болезни, уровня поражения и состояния самого пациента.

Осложнение

При своевременном лечении кандидоз не наносит особого вреда здоровью. Но симптомы кандидоза могут доставить массу неприятных ощущений. Длительно существующий, он может приводить к поражению других органов, чаще всего мочеиспускательного канала, мочевого пузыря и почек. В особо тяжелых случаях прогрессирующее заболевание может поражать репродуктивные органы, что приводит к бесплодию, как у мужчин, так и у женщин. Но наибольшую опасность кандидоз представляет для беременных женщин, т.к. очень высок риск поражения плода.

Как диагностируют заболевание


Визуальные методы диагностики кандидоза. При осмотре выявляются воспаление участков кожи, ограниченное бордюром отслаивающегося, мацерированного эпидермиса, белесоватый налет на слизистых оболочках.

Лабораторная диагностика. Вопреки распространенному мнению, главным методом диагностики кандидоза до сих пор является микроскопия мазка с пораженных участков слизистой. ПЦР (ДНК — диагностика), популярная в последнее время, как правило, плохо подходит для диагностики кандидоза.

Лабораторная диагностика заболевания включает в себя:

  • микроскопию мазка выделений
  • культуральную диагностику (посев)
  • иммуно-ферментный анализ (ИФА)
  • полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Лечение кандидоза

Лечение кандидоза направлено на устранение факторов, способствующих возникновению кандидоза. При поражении кожи проводится местное лечение открытым способом с применением противогрибковых мазей.

Лечащий врач от этого недуга назначает системные и местные лекарственные препараты. Местные средства не всасываются в кровь – действуют только на слизистую оболочку, пораженную грибком Candida. Они останавливают размножение и рост грибков, снимают неприятные ощущения и восстанавливают  пораженные ткани.

Профилактика

Поскольку кандидоз представляет собой рецидивирующий инфекционный процесс, который встречается весьма часто, то существуют некоторые методы профилактики, приводящие к снижению частоты возникновения повторов заболевания, а также препятствуют первичному инфицированию.

Из общепринятых средств профилактики кандидоза следует отметить следующие:

  1. закаливание организма,
  2. употребление витаминов и микроэлементов весной и осенью,
  3. регулярные стандартные методы гигиены;
  4. особое значение следует отдать типу одежды и нижнего белья. Рекомендуется ношение хлопчатобумажного белья, дышащей и свободной повседневной одежды.

При своевременном лечении прогноз благоприятный, излечение как правило наступает в течение недели. При осложненных формах и поражениях внутренних органов лечение кандидоза затруднено.

Шапилова Н.В.

Источник: kvd4.ru

В связи с тем, что для заболевания кандидозом характерен полиморфизм клинических проявлений лабораторному исследованию подлежит разнообразный патологический материала. В зависимости от характера и локализации поражения, для лабораторного анализа берут:
• мокроту;
• соскобы с кожи или слизистых оболочек;
• ногтевые чешуйки;
• кровь, ликвор, мочу, желчь, фекалии;
• пунктаты из закрытых полостей, отделяемое свищей;
• биопсированный и секционный материал.

Вначале производят исследование нативного материала (за исключением крови); при этом ликвор, мочу и желчь подвергают (!) предварительному центрифугированию (1500 — 2000 об/мин, 10 — 15 мин). Препараты готовят в 10 — 20% растворе щелочи при слабом нагревании.

Обнаружение нитчатой фазы возбудителя (мицелия или псевдомицелия) является важным свидетельством наличия кандидоза. Количество дрожжевых клеток в каждом поле зрения служит ориентиром при подготовке серийных разведений для количественного посева на плотные питательные среды: единичные клетки в поле зрения при большом увеличении микроскопа (х400) свидетельствуют об их содержании порядка десятков тысяч в 1 мл исследуемого материала.

Разведения патологического материала, содержащего нормальную микрофлору (мокрота, фекалии, моча, желчь и т.д.), готовят в жидкой питательной среде (обычно жидкое сусло или жидкая среда Сабуро) и затем высевают определенное количество материала (0,1 — 0,2 мл) на аналогичные плотные среды. Для подавления роста контаминирующих бактерий в среды добавляют антибактериальные антибиотики (чаще всего применяют пенициллин и стрептомицин: по 50 — 100 ед/мл среды или 0,05% хлорамфеникола).

Если вместо соскобов использованы смывы, то тампоны предварительно встряхивают в течение нескольких минут в 5 — 7 мл жидкой питательной среды, а затем производят посев на плотные среды определенного объема соответствующего разведения исходной взвеси. Соскобы с кожи и ногтевых пластинок помещают на скошенные питательные среды. Посев крови и ликвора производят в 10-кратный объем жидкой среды Сабуро или МПБ с 2% глюкозы без добавления антибиотиков, так как кандидозная фунгемия иногда сочетается с бактериальным сепсисом. Наиболее высокую эффективность выделения грибов из крови удалось обеспечить при использовании комбинированной сердечно-мозговой среды. Посев крови делают 3-4-кратно, осуществляя забор из разных вен с интервалом в несколько дней при (1) отсутствии парентерального питания или (2) капельного введения лекарственных веществ. При наличии у больного фунгемии рост грибов появляется через 24-48 ч, максимальная инкубация осуществляется до 30 суток при периодических пересевах на плотную питательную среду.

Биопсированный и секционный материал используют для приготовления гистологических препаратов (окраска PAS-методом), а остатки материала высевают (методом отпечатков или после предварительного измельчения) на плотные и в жидкие питательные среды. Инкубацию предпочтительнее проводить при 25 — 30оС, хотя патогенные для человека виды грибов хорошо растут и при 37оС. Достаточных размеров колонии формируются через 48 ч культивирования, хотя точечный рост можно обнаружить уже на следующий день после первичного посева. При отсутствии роста на агаровых средах делают высев с жидких питательных сред на сектора для получения изолированных колоний.

При исследовании мочи наряду с культуральным методом рекомендуется дополнительное исследование, имеющее целью (!) выявление иммуноглобулинов человека на поверхности бластоспор. Для этого около 5 мл второй порции мочи центрифугируют в течение 5-10 мин при 1500 об/мин и из осадка готовят (1) нативные препараты и мазки, окрашенные по Граму, а также (2) препараты для иммунолюминесцентного исследования при котором фиксацию осуществляют метанолом, а после высушивания мазка наносят антисыворотку против глобулинов человека, меченную изотиоцианатом флюоресцеина.

В осадке мочи больных мочекаменной болезнью нередко (около 7% проб) присутствуют клетки золотистого стафилококка (В.Г. Кубась и соавт.), которые за счет наличия у них белка А неспецифически связывают Fc-фрагменты IgG, что может привести к получению ложноположительных результатов реакции иммунолюминесценции. При выявлении грамположительных кокков для блокировки белка А рекомендовано (В.Г. Кубась и соавт.) к осадку мочи добавлять равный объем кроличьего глобулина с концентрацией белка 1,0 мг/мл. После (1) инкубации смеси при 37оС в течение 30 мин и (2) 3-кратного промывания осадка фосфатным буферным раствором (3) готовят мазки и (4) фиксируют их метанолом. Предварительная обработка кроличьим глобулином взвесей золотистых стафилококков (100-500 млн/мл) подавляла их неспецифическую флюоресценцию.

Выявление светящихся дрожжевых клеток при параллельном обнаружении дрожжей в нативном и окрашенном по Граму препаратах свидетельствует о том, что они несут на своей поверхности специфические глобулины, то есть о наличии у пациента тканевых поражений. Положительный антиглобулиновый тест свидетельствует о кандидозном поражении мочевыводящих путей. Контролем для исключения аутофлюоресценции дрожжевых клеток является исследование неокрашенного препарата.

(!) Видовое определение выделенных культур является важным критерием диагностики и имеет комплексный характер, включающий (1) изучение внешнего вида колонии, (2) ферментативной активности и (3) ассимиляционной способности штамма, (4) типа филаментации, а также (5) характера роста в жидкой питательной среде (наличие поверхностной пленки, поднимающееся по стенке пробирки над поверхностью среды кольцо и т.д.). Большинство патогенных для человека видов грибов рода Candida может быть идентифицировано без постановки ассимиляционного теста.

Из-за резкого преобладания C. albicans у больных и миконосителей, у выросшей культуры прежде всего выявляют наличие характерного морфологического признака этого вида — хламидоспоры. С этой целью производят прерывистый штриховой посев на рисовый агар, часть посева покрывают фламбированным покровным стеклом. Посевы инкубируют при 37оС или при 22оС. Подавляющее большинство штаммов C. albicans образуют хламидоспоры через 12-24 ч, реже — через 48 ч. Выявление хламидоспор позволяет идентифицировать культуру как C. albicans и не проводить дальнейших исследований. Культуры, у которых хламидоспоры выявить не удалось, исследуют по комплексу признаков.

Ферментативную активность определяют на обычных средах «пестрого ряда» или в дрожжевом аутолизате, в которых конценирация углеводов должна составлять 2%. Инкубацию проводят при 25-28оС. Некоторые штаммы могут вызывать ферментацию в поздние сроки (10-20 дней), поэтому для ускорения процесса рекомендуют использовать агаризованные Среды (0,1-0,15% агар-агара); при этом срок наблюдения сокращается до 2 дней.

При постановке ассимиляционного теста в стерильную чашку Петри вносят 1-2 мл взвеси культуры, которую заливают 18-20 мл базовой среды с добавлением дрожжевого аутолизата, охлажденной до 43-45°. После застывания агара его подсушивают и на поверхность наносят стерильные диски фильтровальной бумаги, пропитанной 20% или насыщенным раствором изучаемого источника питания. Можно также на поверхность агара наносить небольшие количества нерастворенного источника питания. Чашки инкубируют в перевернутом виде при 25-28оС; в положительных случаях в течение 2-4 дней вокруг источника питания обнаруживается рост культуры гриба.

Для выявления типов роста посев осуществляется на картофельный агар с 1% глюкозы методом «врезания»: микологическую лопатку с биомассой культуры погружают на 1/3 толщины агара, причем посев делают в виде двух сходящихся, но не пересекающихся лучей. Чашки инкубируют в течение суток при 37оС, а затем при 25оС. Нитчатая форма образуется в толще агара по периферии посева в течение 3-7 дней. При задержке филаментации культуру засевают на среду Городковой, посевы инкубируют при 22оС в течение 10-15 дней, периодически исследуя для выявления аскоспор. Также наряду с микроскопическим исследованием нативных препаратов, мазки окрашивают по Цилю-Нильсену; при этом кислотоустойчивые споры воспринимают рубиново-красную окраску. Эффективное окрашивание спор истинных дрожжей достигается при использовании 2% водного раствора фуксина.

В последнее десятилетие разработан ряд автоматизированных систем для видовой идентификации грибов рода Candida, в основу которых положено определение ассимиляционной способности изучаемых культур. Каждая лунка содержит определенный источник питания, посевы инкубируются при 30оС в течение 24 ч. Помутнение среды свидетельствует об ассимиляции данного источника питания, регистрация результатов производится фотометрически. При помощи компьютера по нумерационно-кодовому принципу осуществляют видовое определение штамма.

Серологическая диагностика. Высокую диагностическую значимость имеет реакция непрямой иммунолюминесценции. У большинства здоровых лиц ее интенсивность составляет 1:10 — 1:20, диагностическим считается титр 1 и более. Для реакции агглютинации частиц латекса, сенсибилизированных соматическими антигенами, диагностическим считают титр 1:8; у больных с выраженной иммуносупрессией диагностическое значение имеет 4-кратное увеличение титра в процессе заболевания. Для поиска антигенов гриба используют частицы латекса, сенсибилизированные антителами, но во избежание ложноположительных результатов, в сыворотке должен отсутствовать ревматоидный фактор.

При использовании встречного иммуноэлектрофореза выявление 2 и более дуг преципитации имеет диагностическую ценность. У здоровых лиц, а также у больных поверхностным кандидозом дуги преципитации, как правило, отсутствуют. При перекрестном иммуноэлектрофорезе у больных висцеральным кандидозом выявляется в среднем 10 дуг преципитации (пределы колебаний — 5-20), при кандидозном эндокардите — около 8 (1-11), а в контрольной группе — 2 (0-5). Специфичность метода увеличивается при использовании промежуточного геля с конкавалином А, который связывает маннан, содержащийся в виде примеси в препаратах соматических антигенов.

Большую ценность, чем титрование антител, имеет определение в сыворотке циркулирующих антигенов гриба, особенно цитоплазматических. Определение антигенов осложняется формированием в сыворотке иммунных комплексов. Полисахаридные антигены высвобождаются из этих комплексов кипячением, для белковых антигенов методы выделения не разработаны. При диссеминированном кандидозе маннан выявляют у 50-70% больных при его отсутствии у здоровых лиц, что придает находке диагностическую значимость. Методом газо-жидкостной хроматографии в сыворотке определяют метаболиты гриба — маннозу и арабинитол. Определение сывороточного содержания арабинитола основывается на способности некоторых видов (C. albicans, C. tropicalis, C. pseudotropicalis, C. parapsilosis) синтезировать это вещество. При почечной недостаточности рекомендуется одновременное определение концентрации арабинитола и креатинина, так как скорость выделения этих веществ одинакова.

Диагностика системного кандидоза. Своевременный диагноз системного кандидоза представляет значительные трудности, поскольку клиническая симптоматика неспецифична. В диагностике кандидоза основная роль принадлежит лабораторным методам исследования: микроскопическим, культуральным, газохроматофическим и молекулярным.

Выявление кандидемии считается наиболее значимым диагностическим маркером гематогенного кандидоза и служит абсолютным показанием к проведению противогрибковой терапии. Следует иметь в виду, что системный кандидоз может не сопровождаться кандидемией. Наиболее важным признаком диссеминированного кандидоза является грибковый эндофтальмит (экссудативные изменения желто-белого цвета сосудистой оболочки глаза). Поэтому офтальмологическое обследование считается весьма значимым в комплексе диагностики и мониторинга больных, имеющих факторы риска диссеминированной кандидозной инфекции. Однако кандидозный эндофтальмит не является начальным признаком генерализации грибковой инфекции, даже у больных с кандидемией поражение сетчатой оболочки выявляют лишь в 9-15% случаев. Другие проявления диссеминированного кандидоза (в частности, поражения кожи и артрит) отмечаются крайне редко у больных в ОИТ. После операций, не затрагивающих почки, мочевой пузырь, а также в тех случаях, когда не было длительной катетеризации мочевого пузыря, кандидурия с выделением большого числа КОЕ является весьма подозрительным симптомом гематогенного поражения почек.

Серологические методы включают определение антител к Candida spp. с помощью различных методов: (1) агглютинации, (2) иммуноэлектрофореза и (3) иммунодилюции. К сожалению, интерпретация получаемых данных часто затруднительна, поскольку антитела обнаруживаются и у здоровых людей, и в случаях обычной колонизации. Более того, эти методы дают отрицательный результат при грибковой инфекции у больных с иммунодефицитными состояниями и в начальной стадии системного кандидоза. Большей информативностью обладают серологические методы определения антигенов Candida spp., однако они также обладают лишь умеренной чувствительностью в случаях системного кандидоза.

Перспективным методом диагностики является хроматографическое определение метаболитов грибов — D-арабинитола в различных биологических жидкостях и тканях инфицированных больных. Большинство патогенных Candida spp. (кроме С. crusei и C. glabrata) продуцируют значительное количество D-изомера арабинитола, и в сыворотке больных при инвазивном кандидозе определяется его повышенное содержание, а также повышение отношения D-арабинитол/креатинин. В проспективных клинических исследованиях подтверждена значимость серийных определений D-арабинитола для диагностики кандидоза у онкологических больных с нейтропенией. Однако инвазивный кандидоз во многих случаях протекает без кандидемии, что не может не отражаться на содержании D-арабинитола в крови и снижает диагностическую ценность метода.

Весьма информативным является метод молекулярной лабораторной диагностики — полимеразная цепная реакция (ПЦР), позволяющая определить специфические области ДНК C. albicans, а также других грибов, в частности Аspergillus spp. Чувствительность ПЦР достигает 100%, а специфичность — 98%. По данным H.Einsele и соавт. (1997), положительная ПЦР позволяет в среднем на 4 дня раньше, чем при обычном обследовании, установить диагноз диссеминированного кандидоза или легочного аспергиллеза. Высокая чувствительность метода позволила K.Ikegami и соавт. (1999) определить наличие ДНК грибов в крови у более 50% больных в критическом состоянии, у которых не было фунгемии, а у многих также и признаков системной воспалительной реакции. Однако, по мнению M.Ruhnke (1999), подтверждение диагностической роли молекулярных методов исследования нуждается в дальнейших доказательных клинических исследованиях.

Источник: doctorspb.ru

1.

Лабораторная
диагностика кандидоза

2. КЛАССИФИКАЦИЯ ГРИБОВ

Надцарство – Эукариоты
Царство — Грибы (Mycota или Fungi)
Отделы — Грибы-слизевики (Myxomycota)
Настоящие грибы (Eumycota)
Классы — низшие грибы
Chitridiomycetes
Hyphochitridiomycetes
Oomycetes
Zygomycetes
высшие грибы
Ascomycetes
Basidiomycetes
Deuteromycetes

3. 2 типа морфологии грибов

гифальный
дрожжевой

11. Классификация микозов

1 группа – системные
(глубокие) микозы
2 группа – подкожные микозы
3 группа – микозы кожи и ее
придатков
(дерматомикозы)
4 группа – поверхностные
микозы

12. Оппортунистические микозы

Мукороз
Аспергиллез
Пенициллиноз
Кандидоз

13. ФАКТОРЫ РИСКА ОППОРТУНИСТИЧЕСКИХ МИКОЗОВ

ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ СОСТОЯНИЯ
МЕСТНЫЕ НАРУШЕНИЯ
ИММУННЫЕ НАРУШЕНИЯ
ЯТРОГЕННЫЕ
ПРОФЕССИОНАЛЬНЫЕ

14.

Возбудители кандидоза
Класс
Род
Deuteromycetes
Candida
Виды
C.albicans
C.tropicalis
C.glabrata
C.parapsilosis
C.krusei

15. Характеристика грибов Candida

Вид
C.albicans
C.tropicalis
C.kefyr
C.krusei
Рост на
Рост на
твердых средах
жидких средах
Колонии
Осадок, иногда небольшое
сметанообразные (белые пристеночное кольцо
или кремовые),
выпуклые, круглые
Филаментация на
Наличие
картофельном агаре хламидоспор
Псевдомицелий
ветвистый, в толще
+
среды древовидный
Колонии двухзональные, Поверхностная пленка,
первые 2 суток
высокое пристеночное кольцо
сметанообразные, затем
мозговидные, края
сглаженные, изрезанные
Псевдомицелий
сильно развит, много
бластоспор и
псевдоконидий
_
Колонии плоские,
сероватые, влажные
Псевдомицелий
тонкий, бластоспор
мало
_
Колонии сухие, матовые, Поверхностная пленка,
серые, плоские, с мелкой нежное сползающее высокое
зернистостью в центре
пристеночное кольцо
C.guilliermondii Колонии низкие, белые,
блестящие
C.parapsilosis
Осадок, среда прозрачная
Колонии гладкие,
влажные,
сметанообразные
Осадок, среда прозрачная
Псевдомицелий
развитый
Псевдомицелий
тонкий, бластоспоры
мелкие
Низкое пристеночное кольцо, Псевдомицелий развит
осадок
слабо
_
_
_

18.

Дрожжеподобная и гифальная форма
C.albicans

19.

C.albicans: псевдомицелий
макроскопически в колониях

20.

C.albicans: псевдомицелий

21.

C.albicans: хламидоспоры

22.

C.albicans: ростовая трубка

23.

C.albicans: колонии на среде
Сабуро

24.

Колонии на хромогенных средах
Для выделения и дифференциации
Candida spp.

25. Ферментативные свойства некоторых видов Candida

Углеводы
лактоза сахароза мальтоза
К (КГ)
КГ
Виды
C.albicans
глюкоза
КГ
C.tropicalis
КГ

КГ
КГ
C.pseudotropicalis
КГ
КГ
КГ

C.krusei
КГ, К



C.parapsilosis
КГ, К



КГ

КГ

C.guilliermondii

26. Механизмы защиты

Неспецифические
-кожа, слизистые (неповрежденная,
шелушение, слущивание, вымывающее
действие, ферменты: лактоферрин
-нормальная микрофлора
-комплемент (альтернативный путь)
-NK

27. Специфические Гуморальные: -sIg A -сывороточные Ig G,М,А Клеточные: -фагоцитоз: ПЯЛ, макрофаги -СД8 Т лимфоциты -СД4 Т

лимфоциты 1 типа: увеличение
цитокинов :ИЛ-2, интерферон-гамма,
колониестимулирующий фактор
Аллергизация : ГЗТ

28.

Факторы патогенности
•Адгезия: фимбрии,
поверхностные
гликопротеины
•Инвазивность — способность
образовывать гифальную
форму (проникновение в
клетку, до ядер)

29.

Факторы патогенности
•Ферменты:
кератинолитические
протеолитические
фосфолипаза
•Меланин (защита от окисления и УФЛ)
•Капсула (C.neoformans)
•Иммуносупрессивное действие
(маннан клеточной стенки)
•Высокая адаптационная
способность
•Эндотоксин
•Лекарственная устойчивость

30. Клиническая классификация кандидоза

I. Поверхностный кандидоз
Кандидоз кожных складок
Кандидоз гладкой кожи
Кандидозная паронихия и онихия
Кандидоз полости рта в форме
стоматита, заеды, хейлита
Кандидозный вульвовагинит
Кандидозный баланит и
баланопостит

31.

ФАКТОРЫ РИСКА РАЗВИТИЯ
КАНДИДОЗНОГО ВУЛЬВОВАГИНИТА
ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ:
беременность
менструация
ЭНДОКРИННЫЕ:
сахарный диабет
гипотиреоз
ИММУНОДЕФИЦИТ:
патология, связанная с
иммунодефицитом
КАНДИДОЗНЫЙ ВУЛЬВОВАГИНИТ
МЕХАНИЧЕСКИЕ:
синтетическое белье
первый половой
контакт
травматические
повреждения тканей
влагалища
ВМС (длительное
ношение
ЯТРОГЕННЫЕ:
антибиотики
кортикостероиды
иммуносупрессоры
химиотерапия онкологических заболеваний
лучевая терапия
оральные контрацептивы
ПРОЧИЕ:
аллергические
заболевания
гиповитаминоз
хронические
заболевания гениталий
хронические
заболевания ЖКТ

34.

Кандидозные заеды при применении антибиотиков

38.

Кандидозный баланопостит
Кандидозный вульвовагинит

39.

II. Хронический генерализованный
(гранулематозный) кандидоз
III. Висцеральный кандидоз различных
органов
а) пищеварительный тракт
б) органы дыхания
в) мочеполовая система
в) кандидозная септикопиемия
г) кандидозный хрониосепсис
е) внутриутробный (врожденный)
генерализованный кандидоз
новорожденных.

41.

Методы лабораторной диагностики
Микроскопический
Микологический
Серологический
Кожно-аллергическая проба

42.

Определение чувствительности к
флуконазолу

43. Противогрибковые препараты

Фунгицидные:
-подавление синтеза ДНК: флуцитозин
-повреждение цитомембраны – полиены:
амфотерицин В, нистатин
Фунгистатические:
азолы — подавление синтеза стерола:
имидазол, флюконазол, клотримазол

46. Лабораторная диагностика кандидоза

День
исследо
— вания
Исследуемый
материал
Что сделать
Результат
Рост колоний
С.albicans,
C.krusei на
хромогенной
среде.
Изучить морфологию колоний. Зарисовать.
1 день
Налет, соскоб со
слизистой
полости
рта, влагалища,
ногтевых
пластинок
1) Приготовить мазок-препарат, окрасить метиленовым синим
(Демонстрация).
Изучить морфологию, зарисовать.
2)Провести посев на среду Сабуро.
3 день
Рост колоний на
среде Сабуро
1) Изучить морфологию колоний.
1)_________________________
2) Приготовить мазок-препарат,
окрасить метиленовым синим.
Изучить морфологию, зарисовать.
2)
3) Провести пересев на скошенный питательный агар с глюкозой.
__________________________
__________________________
_______________ ___________
__________________________
бластоспоры
псевдомицелий

47.

5 день
Чистая культура на
скошенном
питательном агаре с
глюкозой
1.Описать характер роста.
2.Оценить чистоту выделенной культуры
(приготовить мазок-препарат, окрасить
метиленовым синим).
3.Провести посев в пробирку с сывороткой,
t° 37°C, 2 часа.
4.Провести посев на «голодный» рисовый агар
под стекло.
5.Провести посев на кровяной агар.
6. Провести посев на среды Гисса с глюкозой,
мальтозой, сахарозой.
7.Провести посев на питательный агар с
глюкозой для определения чувствительности
выделенной чистой культуры к
противогрибковым препаратам
дискодиффузионным методом и Е-тестом
5 день
через
2 часа
Рост культуры в
пробирке с
сывороткой
Приготовить мазок-препарат, окрасить
метиленовым синим, микроскопировать,
изучить ростовые трубки.
(Демонстрация).
7 день
1) Рост колоний на
«голодном» рисовом
агаре под стеклом
1) Промикроскопировать (х100-400)
для обнаружения хламидоспор (зарисовать)
2) Рост
колоний на кровяном
агаре
2) Изучить морфологию колоний
в стереомикроскопе (почкующиеся колонии
и образование псевдомицелия), зарисовать.
ростовая
трубка
1)
хламидоспоры
2)
псевдомицелий

48.

3) Рост культуры на средах Гисса
3) Учесть биохимические свойства.
3) Глюкоза
4) Посев на чувствительность к
антигрибковым препаратам
4) Определить чувствительность к
нистатину, амфотерицину В, клотрималозу
4)
Мальтоза
Сахароза
Е-тест
Заключение по работе:
__________________________________
__________________________________
__________________________________
__________________________________
__________________________________

49.

В зависимости от состояния вагинального микроценоза выделяют
3 формы кандидозной инфекции влагалища:
1. Бессимптомное кандидоносительство –
отсутствуют клинические проявления заболевания,
Candida выявляются в низком титре (менее 104 КОЕ/мл),
доминируют лактобациллы в умеренно большом количестве.
2. Истинный кандидоз –
выраженная картина вагинального кандидоза,
Candida в титре более 104 КОЕ/мл,
высокий титр лактобацилл (более 106 КОЕ/мл),
отсутствие диагностически значимых титров других условнопатогенных микроорганизмов.
3. Сочетание вагинального кандидоза и бактериального
вагиноза –
Candida в высоком титре,
облигатные анаэробные бактерии и гарднереллы в титре
более 109 КОЕ/мл,
резкое снижение концентрации или отсутствие лактобацилл.

Источник: en.ppt-online.org


You May Also Like

About the Author: admind

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.