Комплекс серологических реакций что это


Иммунохимический метод исследования в диагностике инфекционных болезней, области применения, основные реакции, принципы проведения, регистрация результатов

Иммунохимический анализ представляет собой высоко-эффективный метод выявления различных молекул, основанный на взаимодействии антиген-антитело. Он реализован в нескольких вариантах – иммуноферментном, радиоиммунном методах, реакции иммунофлюоресценции и др.

Иммуноферментный метод (иммуноферментный анализ, ИФА) — определение Аг или Ат с помощью Ат или Аг, ковалентно соединенных с ферментом (чаще пероксидазой хрена, реже — -глюкуронидазой, щелочной и кислой фосфатаза-ми). Образующийся иммунный комплекс выявляют с помощью фотометрического измерения оптической плотности окрашен-ных продуктов, которые образуются в результате ферментативно-го расщепления субстрата ферментом. Иммуноферментные реакции применяют для диагностики инфекционных болезней (СПИДа, вирусных гепатитов, хламидиоза, токсоплазмоза и др.), определения содержания гормонов, и др. Для метода характерна высокая специфичность и чувствительность; высокий уровень автоматизации создается благодаря наличию специальных анализаторов и стандартных тест-систем. Различают прямой способ, когда ферментом метят специфические Ig (Ат), и непрямой, при котором иммунный комплекс выявляют мечеными антииммуноглобулинами.


В настоящее время выпускаются тест-системы для определения антител к разным микроорганизмам. Имеются иммунофер-ментные тест-системы для выявления антител разных классов, анализ наличия которых позволяет эффективно определять фазу и стадию инфекционного заболевания, а также отличать анамнести-ческое наличие антител к возбудителю инфекции и поствакци-нальные реакции от инфекционного заболевания.

Иммуноферментные тест-системы для выявления антител и антигенов могут быть как качественными, так и количественными. Тест-системы для количественного определения иммунологических маркёров инфекционного заболевания помогают осуществлять мониторинг эффективности терапии и течения заболевания. Этот аспект особенно важен при исследовании динамики хронических инфекционных процессов.

Количественное определение иммунологических маркёров инфекционного заболевания реализуется в выражении количества антигенов или антител титром или концентрацией (обычно выражается в МЕ/мл или иных условных единицах). В последнем случае необходим стандартный образец, содержащий антигены или антитела (в зависимости от специализации тест-системы) в известном количестве, и используемый для изготовления калибро-вочного графика


 

Серологический метод исследования в диагностике инфекционных болезней, области применения, основные реакции, принципы проведения, регистрация результатов.

Серологический метод представляет собой совокупность реакций, основанных на взаимодействии антиген-антитело (см.) и направленных на выявление в сыворотке крови и других жидкостях организма антител к антигенам возбудителей инфекционных болезней, либо собственно микробных антигенов. Серологический метод характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью.

Учет серологических реакций осуществляют визуально, иногда с помощью лупы. Суть учета серологической реакции сводится к определению феномена связывания Аг и Ат по образованию комплекса Аг-Ат. Визуально образование комплекса Аг-Ат сопровождается двумя основным феноменами — агглютина-цией и преципитацией. Различия между ними определяются особенностями антигенов и антител, специфичных к ним

Основные серологические реакции

Реакция агглютинации (РА) представляет собой один из способов выявления антигена/антител по принципу нахождения известного по неизвестному. В случае нерастворимости антигена (его корпускулярности) при добавлении к нему специфичных антител происходит формирование комплекса «антиген-антитело» в виде белкового агломерата


Основные области применения РА связаны с необходимостью индентификации микробных культур, антигенов клеток крови (А,В,0), а также с определением наличия и титра антител или антигенов в сыворотке крови в практике инфекционных болезней.

Компоненты РА: 1) диагностический компонент — антиген в виде суспензии в случае поиска антител, т.е. диагностикум, или раствор антител при необходимости идентификации антигена, т.е. диагностическая сыворотка. В случае РА чаще диагностикум называют агглютиногеном, а диагностическую сыворотку — агглютинином;

2) исследуемый материал — микробная культура в виде суспензии или выросшей на скошенном агаре, клетки крови (эритроциты при определении антигенов по системе А,В,0), сыворотка крови пациента при диагностике инфекционно-го заболевания или сыворотка крови лабораторного животного при постановке биологического/иммунологического эксперимента;

3) раствор электролита в качестве среды для разведения ингредиентов реакции и в качестве среды для постановки реакции. Обычно используют 0,15 М (0,85%) раствор хлорида натрия

Регистрация результатов РА проводится по системе 4+ в процессе визуального осмотра.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА).. Реакция пассивной (непрямой) агглютинации проводится для регистрации взаимодействия антиген-антитело в том случае, когда антиген водорастворим и при его связывании со специфическими антителами не происходит образования крупных видимых глазом агломератов


Чаще всего для постановки РПА (РНА) применяют эритроциты барана или частицы латекса диаметром 3-5 мк

Основные области применения РПА : определение эффек-тивности поствакцинального иммунитета (определение уровня специфических антител после вакцинации), диагностика инфекционных болезней (определение титра антител или присутствия в биологических средах пациента антигенов микроорганизма, являющегося причиной заболевания), диагностика аутоиммунных заболеваний (например, определение ревматоидного фактора).

Схема постановки и учета РПА аналогичны РА.

Реакция связывания комплемента (РСК)., РСК применяется преимущественно для диагностики инфекционных заболеваний, позволяя обнаруживать специфические искомому антигену антитела и регистрировать их титр.

РСК относится к сложным многокомпонентным серологи-ческим реакциям. При постановке РСК in vitro создаются 2 системы: 1 — диагностическая, 2 — индикаторная.

1 — диагностическая система включает антиген (диагности-кум), исследуемую сыворотку крови пациента, содержащую искомые антитела и комплемент. Все три ингредиента смешива-ются в определенных пропорциях и инкубируются. Во время инкубации происходит образование комплекса антиген-антитело-комплемент в том случае, если в исследуемой сыворотке крови пациента присутствуют антитела к антигену диагностикума. При отсутствии антител комплемент остается свободным и иммунные комплексы антиген-антитело-комплемент не образуются. Внешне образование иммунных комплексов не проявляется никакими феномена вследствие особенностей взаимодействия антиген-антитело. Для индикации образования иммунных комплексов, т.е. для регистрации результатов РСК после инкубации в диагностическую систему добавляют индикационную систему.


2 — индикаторная система представляет собой суспензию эритроцитов барана, сенсибилизированных антителами к ним же (гемолитическая система, приготавливаемая аналогично гемоли-тической системе для определения активности классического пути системы комплемента, см. лабораторную работу 6). Объединение двух систем и инкубация их при определенном режиме с последу-ющим центрифугированием позволяет зарегистрировать результа-ты РСК по феномену задержки гемолиза.

Учет РСК проводится по системе ++++:

— РСК — сопровождается полным гемолизом + РСК — сомнительный результат, ++++ РСК соответствует 100%-му связыванию антигена

Источник: 0755.ru

Антигенное строение бледной трепонемы

Наиболее изучены следующие антигены:

протеиновые антигены бледной трепонемы; имеют в своем составе фракцию, общую для патогенных и непатогенных трепонем, кроме того, имеется фракция, специфичная только для патогенных трепонем, антитела против них появляются в организме в конце инкубационного периода  или в течение первой недели после появления твердого шанкра;


антигены полисахаридной природы; малоиммуногенны, т.к. антитела против них не достигают значительных титров, поэтому роль этих антител  в серодиагностике сифилиса незначительна;

липидные антигены бледной трепонемы;  составляют около 30% сухой массы клетки;  помимо липидов бледной трепонемы в организме больного появляется большое количество веществ липидной природы в результате разрушения  клеток тканей, в основном, липидов митохондриальных мембран; по-видимому, они имеют такое же строение, как и липидные антигены бледной трепонемы и обладают свойствами аутоантигенов; антитела в организме больного пояляются примерно на 5 — 6й неделе после заражения.

 

Следовательно, сифилитические антитела могут быть неспецифическими (реагины) и специфическими (противотрепонемными). Реагины направлены против липидных антигенов бледной трепонемы и против аутоантигенов, возникающих вследствие деструкции клеток организма.  Следует иметь в виду, что реагины обнаруживаются также в нормальных тканях, и их количество повышается при различных физиологических и патологических состояниях. Эти реагины могут быть причиной так называемых биологических ложноположительных серологических реакций на сифилис.

Специфические антитрепонемные антитела, относящиеся к IgM и IgG, направлены против бледной трепонемы и, так же как и антигены трепонемы, могут быть группоспецифичными и видоспецифичными.


Для определения антител в сыворотке крови больного используют различные серологические реакции, отличающиеся друг от друга чувствительностью, специфичностью, сложностью постановки и стоимостью. Учитывая, что все серологические реакции на сифилис в определенных условиях могут быть ложноположительными, их следует ставить в комплексе и, в случае необходимости, в динамике.

Серологические реакции, в зависимости от выявляемых ими антител, подразделяются на группы:

липидные (реагиновые) реакции неспецифичные, нетрепонемные:

микрореакции на стекле с липидными антигенами — экспресс-метод диагностики (микрореакции преципитации — МРП, VDRL, CMF, RPR и др.); реакция связывания комплемента (РСК) с липидными антигенами — реакция Вассермана; осадочные реакции (реакция преципитации Кана, цитохолевая реакция Закса — Витебского и др.);

групповые трепонемные реакции групповые и видоспецифичные:

зависят от антигенов, входящих в состав набора: РСК с протеиновым антигеном Рейтера; реакция иммунофлюоресценции (РИФ); реакция иммунного прилипания (РИП); реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ); РИФ Абс. и ее варианты (IgM FTA ABS, 19S IgM FTA ABS, и др.); реакция непрямой гемагглютинации бледных трепонем (РПГА); иммуноблот IgM, IgG.

 

Различные серологические реакции используются для различных практических целей.


и массовых обследованиях населения и при необходимости экстренного выявления сифилиса используются отборочные реакции (VDRL, RPR, МРП и др.) Для диагностики (подтверждения) сифилиса у кардиологических, психоневрологических, офтальмологических пациентов, а также беременных женщин применяют определение суммарных антител IgM, IgG в любой иммунологической реакции (на сегодняшний день — ИФА). С целью контроля за эффективностью терапии рекомендуют VDRL в количественном исполнении или определение IgM  в иммунологической реакции (ИФА). В качестве реакции экспертизы в случаях расхождения трепонемных реакций применяют иммуноблот IgM, IgG. В иммуноблоте используется 5 разделенных антигенов: р15, р17, р22, р45 и р47. Из них специфичными являются 4 белка, р22 — неспецифичен. Поэтому наличие полосы р22 имеет принципиальное значение и в ряде случаев объясняет наличие ложноположительного результата. Наличие даже одной специфичной полосы IgM  расценивается как положительный результат, наличие одной специфичной полосы IgG — как сомнительный результат, рекомендуется исследование в динамике и иммуноблот IgM.

Прямые трепонемные тесты

темнопольная микроскопия: бледная трепонема плохо окрашивается традиционными красителями, поэтому используется темнопольный микроскоп. Материал для исследования при первичном сифилисе — это материал из шанкра, при вторичном — из эрозивных папул.


ПЦР: — при первичном сифилисе можно исследовать материал из шанкра, при вторичном — из эрозивных папул. При раннем вторичном сифилисе в момент первых высыпаний ДНК можно найти в венозной крови. При обычном мазке из влагалища, шейки матки, уретры — бледная спирохета не определяется. Этот метод всегда рекомендован при отрицательных данных темнопольной микроскопии, приеме системных и местных антибактериальных и антисептических препаратов, наличии микст-инфекции (в особенности герпетической).

Какая динамика серологических исследований при сифилисе?

Антилипидные (неспецифические) антитела образуются через 7-14 дней после образования шанкра или через 4-5 недель после инфицирования. Специфические противотрепонемные антитела IgM обнаруживаются в конце второй недели от момента инфицирования. IgG к трепонемным антигенам появляются приблизительно через 4 недели после контакта. Таким образом, к моменту появления клинических симптомов сифилиса (образование твердого шанкра)  в сыворотке крови пациентов можно выявить как специфические IgM,  так и специфические IgG (суммарные антитела) . Параметры иммунного ответа могут изменяться в результате проводимого лечения. Адекватное лечение раннего сифилиса приводит к быстрому снижению титров неспецифических антител и специфических IgM, при этом специфические IgG обычно сохраняются в сыворотке крови в течение длительного периода времени, а иногда и всю жизнь.

 


  РИБТ пол
  противотрепонемные lgG пол. (ИФА, иммуноблот)
  противотрепонемные lgМ пол. (ИФА, иммуноблот)
  реагины (lgМ + lgG) пол. MOP, RPR, VDRL
  лимфаденит полиаденит
инк. период шанкр первичная розеола
нед 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

 

Ложноположительные серологические реакции на сифилис

В случаях ложноположительных серологических реакций в сыворотке крови обследуемых людей имеются только реагины, но отсутствуют специфичные антигены и антитела.

Различают следущие группы состояний:

инфекционные заболевания, возбудители которых имеют антигенное сходство с бледной трепонемой (возвратный тиф, фрамбезия, беджель, пинта, лептоспироз, воспалительные процессы, обусловленные трепонемами, сапрофитирующими в полости рта и на половых органах);

-физиологические и патологические состояния, приводящие к изменению обмена веществ, особенно липидного (беременность, подагра, сыпной тиф, малярия, пневмония, лепра, эндокардит, диффузные болезни соединительной ткани, инфаркт миокарда, сотрясение мозга, искусственная иммунизация, онкологические заболевания, отравление свинцом, фосфором, хлороформом, прием сацилата натрия, дигиталиса и пр.);

технические погрешности при постановке реакций.

Различают острые и хронические ложноположительные реакции. Острые ложноположительные реакции не стойки и их спонтанная негативация происходит в течение 4 — 6 месяцев. Хронические реакции сохраняются положительными более 6 месяцев.

Причинами острых биологически ложноположительных реакций являются беременность (особенно в последние недели ее и в первые 10 дней после родов), воспаление легких, в частности микоплазменной этиологии, корь, энтеровирусная инфекция, инфекционный мононуклеоз, вакцинация, наркомания, алкоголизм. Реже они наблюдаются при активном туберкулезе, скарлатине, вирусной пневмонии, бруцеллезе, риккетсиозах, лептоспирозе, кори, венерической лимфогранулеме, малярии, белковом голодании.

У больных, прекративших принимать наркотики, ложноположительные серологические реакции на сифилис сохраняются до 14 месяцев. Иногда причинами неспецифических серологических реакций бывают обширные травмы, сотрясение мозга, переломы, инфаркт миокарда, а также технические погрешности при постановке реакций.

Хронические ложноположительные стандартные серологические реакции могут наблюдаться у больных лепрой, системной красной волчанкой, тиреоидитом Хашимото, ревматизмом, узелковым периартериитом, циррозом печени, саркоидозом, генерализованной склеродермией, криоглобулиновой пурпурой, злокачественными опухолями, малярией, туберкулезом, бруцеллезом, лептоспирозом, инфекционным мононуклеозом, сахарным диабетом, болезнями крови, гипертонической болезнью, хроническим алкоголизмом и наркоманией. С возрастом количесво ложноположительных результатов увеличивается. У женщин они наблюдаются в 4,5 раза чаще, чем у мужчин. Иногда причины ложноположительных реакций остаются неясными (идиопатические реакции) или они наблюдаются спонтанно в некоторых семьях.

Неспецифические серологические реакции составляют в среднем 0,03 — 2,5 %. Чаще бывают слабоположительными, а если положительными, то с низким титром сифилитических реагинов. При некоторых заболеваниях (лимфомах, хроническом лимфолейкозе, ревматоидном артрите,  раке печени) титр их, однако, может быть высоким. При повторном исследовании неспецифические реакции становятся отрицательными или выраженность их снижается, в то время как титр сывороток больных сифилисом остается таким же или нарастает.

При неспецифических результатах наблюдаются расхождения нескольких реакций. Иногда отмечается несовпадение результатов реакций при постановке ее с разными антигенами: c одним антигеном получают положительные результаты, с другим — отрицательные. В случае резкого расхождения исследования надо повторить с новой порцией крови, но не раньше, чем через неделю. Наиболее достоверным критерием истинно сифилитических показаний классических серологических реакций является результат, полученный при исследовании крови с помощью иммуноблота IgM, IgG.

Особенность диагностики сифилиса в «Евромеде»

Неспецифичные реагины определяются RPR тестом с кардиолипиновым антигеном с добавкой угольных частиц. Производитель: HUMAN, Германия.

Серологическая диагностика сифилиса проводится методом иммунохемилюминесценции, при этом определяются суммарные антитела IgM и IgG к специфичным трепонемным антигенам р15, р17, р47 — это такой суммарный мини иммуноблот! Чувствительность и специфичность тест системы более 99%. Производитель ABBOT , Германия.

 

 

 

 

 

 

 

 

Источник: euromed.pro

Что такое серологическое исследование крови?

Серологическое исследование (СИ) основано на способности антигенов и антител связываться друг с другом. СИ позволяет с точностью выявить наличие у пациента определённого вируса либо бактерии, группу крови и резус, реактивность организма к антибиотикам, аутоиммунные заболевания, гормональные нарушения, индивидуальную специфичность белков, определить эффективность терапии.

Система иммунитета борется с проникающими в организм болезнетворными микробами (антигенами) при помощи антител, при этом создавая к каждому из вирусов, паразитов либо бактерий свой определённый тип защиты.

Способность иммунитета вырабатывать особые вещества, нейтрализующие вредоносные частицы, была известна учёным давно. Но увидеть реакцию антиген-антитело в лабораторных условиях удалось только в конце XIX века. Было обнаружено, что в результате образования связки, комплексы выпадают в осадок, образуя хлопья либо помутнение. Такие реакции получили названия агглютинации и преципитации. В XX веке серология — наука о свойствах сыворотки, стремительно развивалась, обнаруживались новые методы диагностирования на основе реакций антиген-антитело. На сегодняшний день существует множество способов выявления иммунных комплексов, а СИ являются незаменимым звеном в диагностике, лечении, создании новых медицинских препаратов и вакцин.

Показания к проведению анализа.

Серологические исследования сопровождают современного человека на протяжении всей жизни. Первые анализы на выявление определённых антител проводятся, когда малыш находится ещё в утробе. Беременная женщина сдаёт кровь на различные СИ для определения возможного резус-конфликта либо инфекций, способных навредить вынашиваемому плоду. Когда ребёнок появляется на свет, его ожидают серологические исследования, позволяющие диагностировать врождённые заболевания. Впоследствии анализы сдаются по следующим причинам:

  • вирусные, бактериальные, паразитарные инфекции;
  • выявление активности, стадии развития болезни;
  • гормональные патологии;
  • бесплодие;
  • аутоиммунные заболевания;
  • нарушение обмена веществ;
  • аллергии;
  • онкологические заболевания;
  • планирование беременности, период вынашивания, патологии беременных;
  • выявление ревматоидного фактора;
  • определение группы крови и резус-фактора;
  • эффективность терапии при различных болезнях;
  • эффективность вакцинации;
  • предоперационный и постоперационный период при необходимости оценки уровня некоторых антител;
  • изучение иммунного состояния организма.

Подготовка к исследованию.

Так как серологические исследования охватывают широкий спектр анализов, в каждом конкретном случае может понадобиться определённая подготовка, но существуют общие правила сдачи серологического теста:

  • За сутки до исследования следует ограничить в рационе жирное и жареное, исключить алкоголь.
  • Последний приём пищи должен завершиться за 10 — 12 часов до анализа.
  • В день сдачи крови не следует употреблять кофе, чай либо иные напитки. Можно в небольшом количестве пить чистую воду.
  • Лекарственные средства перед анализом исключаются. Если приём отменить невозможно, необходимо предоставить врачу полный перечень препаратов, в том числе витаминов, пероральных контрацептивов.
  • Все другие исследования либо медицинские манипуляции проводятся после СИ.
  • Курение рекомендуется прекратить за 12 часов до взятия образца крови.
  • В предыдущий день следует избегать физических и эмоциональных нагрузок, а перед исследованием желательно 15 минут посидеть в полном покое.
  • СИ назначаются на утреннее время и сдаются натощак.

Методы проведения серологического исследования.

Все методики определения комплексов антиген-антитело (Аг-Ат) основываются на использовании известного Аг либо Ат в поиске неизвестного. Если необходимо обнаружить Аг, необходимы диагностические иммунные сыворотки с содержанием специфических Ат. Если целью СИ является выявление Ат, используются диагностикумы — взвеси, содержащие определённые Аг.

Серологические анализы могут отражать качественный либо количественный результат. При качественном исследовании итог может быть отрицательный или положительный, то есть искомый элемент либо обнаружен, либо нет. Количественный итог выражается в виде числового значения либо знаками «+» (обычно от одного до четырёх).

Методы серологических исследований:

  • Агглютинация. Связывание Ат с Аг с последующим формированием хлопьев либо осадка. Применяются прямые, непрямые, развёрнутые, ориентировочные реакции, позволяющие выявить антитела в сыворотке.
  • Гемагглютинация. Используются эритроциты с адсорбированными на них Аг либо Ат, которые склеиваются с соответствующими Ат и Аг. Образуемые комплексы выпадают в виде фестонного осадка.
  • Преципитация. Образование комплекса Аг-Ат с последующим осаждением в виде помутнения, именуемого преципитатом.
  • Коагглютинация. Выявление Аг при помощи Ат, адсорбированных на белке клеток стафилококка.
  • Торможение гемагглютинации. Ат иммунной сыворотки подавляют вирусные Аг, в итоге вирусы теряют способность склеиваться с эритроцитами.
  • Непрямая реакция Кумбса. Определяются Ат к поверхностным Аг эритроцитов.
  • Кольцепреципитация. Проводится на основе иммунной сыворотки с наслоением растворимого Аг.
  • Двойная радиальная иммунодиффузия. Реакция основана на диффундировании компонентов антисыворотки и Аг в лунках агара либо агарозы.
  • Реакция связывания комплемента. Связь Аг и Ат сопровождается адсорбцией комплемента, в качестве индикатора используются эритроциты барана и Ат к ним в составе гемолитической сыворотки.
  • Нейтрализация. Основана на нейтрализации вирусного агента антителами.
  • Реакции, основанные на маркировании Ат и Аг флуоресцентным либо ферментным составом — иммунофлюорисцентный (РИФ) и иммуноферментный (ИФА) методы.

Иммунофлюорисцентный метод.

Данный метод основан на использовании Ат, меченных флуоресцентным веществом. Чаще всего в качестве метки используется флуоресцеинизотиоционат, обладающий зелёным свечением в лучах ультрафиолета. Результат анализа оценивается по степени яркости свечения. Может быть использован ручной метод определения при помощи люминесцентного микроскопа, оптического микроскопа с люминесцентной насадкой, а также автоматический способ с применением микрочипового цитомера, проточного цитомера либо роботизированного флуоресцентного микроскопа.

РИФ проводится прямым и непрямым методом. Прямой способ означает непосредственное связывание сорбированного Аг с меченым Ат. Непрямой метод подразумевает использование немаркированных Ат для связки с Аг, а затем добавление меченых Ат, что позволяет избежать неспецифических реакций.

Иммуноферментный анализ.

ИФА основан на выявлении комплексов Аг-Ат при помощи маркирования одного из компонентов. В качестве метки используются различные ферменты, которые в результате ферментативной реакции образуют окрашивание. Существуют разнообразные методы ИФА, их можно классифицировать как гомогенные и гетерогенные методы.

Гомогенные означают, что все этапы реакции происходят в растворе.

Гетерогенные методы включают разделение на фазы с использованием твёрдого носителя.

Гомогенно-гетерогенные способы основываются на том, что комплексы Аг-Ат формируются в растворе, а затем для разделения используется твёрдая фаза.

Существует множество вариаций методов ИФА, некоторые из них представлены ниже.

  1. Сэндвич-метод. К иммобилизованным Ат добавляется раствор с Аг, после образования комплексов носитель отмывают от лишних компонентов и добавляют маркированные Ат. В результате, Аг оказываются зажатыми иммобилизованными и мечеными Ат, откуда и произошло название метода.
  2. Неконкурентный непрямой ИФА. К иммобилизованным Аг присоединяют исследуемую сыворотку с Ат. Когда образуются комплексы, лишние Ат смывают и добавляют маркированные Ат, способные связаться с прикреплёнными к поверхностям лунок иммунными комплексами.
  3. Конкурентный прямой ИФА. К иммобилизованным Аг вносят исследуемую сыворотку и конъюгат, содержащий маркированные Ат. Формируются комплексы Аг-Ат нескольких видов: с мечеными Ат и с немаркированными Ат, которые вступают между собой в конкуренцию за связь с Аг.

Какие инфекции помогает выявить серологическое исследование.

Если у пациента присутствует определённая симптоматика либо иные исследования указывают на заболевание, назначается серологический анализ.

Серологические исследования используют для диагностики следующих инфекций:

  • вирус гепатита А, В, С, D, Е;
  • сифилис;
  • ВИЧ;
  • герпес;
  • цитомегаловирус;
  • краснуха;
  • корь;
  • паротит;
  • Эпштейн-Барр;
  • хеликобактер;
  • хламидии;
  • микоплазмы;
  • токсоплазмы;
  • лямблии;
  • гельминты;
  • уреаплазмы;
  • парвовирус;
  • вирус ветряной оспы;
  • вирус клещевого энцефалита;
  • вирус Денге;
  • коклюш;
  • боррелии;
  • легионеллы.

Преимущества серологического метода исследования в диагностике инфекций.

  1. Высокая чувствительность и специфичность.
  2. Широкий спектр определяемых инфекций.
  3. Ранняя диагностика инфицирования.
  4. Возможность мониторинга развития заболевания.
  5. Быстрота и удобство в исполнении.
  6. Возможность использования минимального объёма исследуемого материала.
  7. Безопасность исследования.

Источник: gidanaliz.ru

Диагностика сифилиса основывается на клинических и лабораторных данных. Среди последних чрезвычайно ценны серологические исследования, которые проводят не только для подтверждения диагноза сифилиса, но и для наблюдения за его динамикой под влиянием проводимой терапии.

Серология сифилиса сегодня представляет собой отдельную область знаний. Созданы различные реакции, получившие в разных странах государственное признание. Важно, чтобы полученные результаты были правильно истолкованы, чего можно достигнуть лишь при знании основ серологии.

В нашей стране для серологической диагностики сифилиса в соответствии с методическими рекомендациями Министерства здравоохранения применяют:

— микрореакцию преципитации (МР) с кардиолипиновым антигеном — отборочный тест при обследовании населения на сифилис;

— реагиновый плазменный тест (RPR) также, будучи не трепонемным, используется в качестве скринингового теста;

— комплекс серологических реакций (КСР), в который входят реакция связывания комплемента (РСК) с трепонемным и кардиолипиновым антигенами и МР;

— реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), в которой в качестве антигена используют патогенные бледные трепонемы штамма Никольса;

— реакция иммунофлюоресценции (РИФ) (в модификациях:РИФ-абс, РИФ-ц и РИФ с капиллярной кровью из пальца); в качестве антигена в РИФ используется патогенная бледная трепонема штамма Никольса;

— реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) с антигеном из культуральных или патогенных бледных трепонем;

— иммуноферментный анализ (ИФА) с антигеном из культуральных или патогенных бледных трепонем.

Все указанные реакции имеют разную чувствительность и специфичность и рекомендованы к применению в зависимости от поставленной задачи.

При массовых профилактических обследованиях населения на сифилис применяют МР с плазмой крови или инактивированной сывороткой крови обследуемых. Результаты реакции оценивают-

ся качественно как 4+, 3+, 2+ и отрицательные. Преимущество экспресс-метода заключается в быстроте получения ответа (через 30-40 мин), небольшом объеме необходимой для анализа крови (2-3 капли), которую можно брать у пациентов из пальца.

С помощью этого экспресс-метода обследуют лиц, подлежащих периодическим медицинским осмотрам на венерические болезни, больных соматических стационаров, лиц, помещенных в спецприемники. Если экспресс-метод применяется изолированно, то является лишь отборочным тестом. На основании его положительного результата диагноз сифилиса не ставят, а обследуемых направляют к дерматовенерологу для дальнейшего клинического обследования и исследования их крови с помощью любого из других диагностических тестов (КСР, РИБТ, РПГА, ИФА или РИФ). Экспресс-метод не применяют у беременных, доноров в связи с тем, что он часто дает ложноположительные результаты. Средние медицинские работники, прошедшие специальную подготовку, производят взятие крови из пальца и постановку МР. Учитывать ее результаты обязаны врачи-лаборанты.

РСК с трепонемным и кардиолипиновым антигенами применяются для подтверждения диагноза сифилиса при наличии активных проявлений болезни, для обследования лиц, бывших в половом контакте с больным сифилисом, выявления латентного (скрытого) сифилиса, эффективности проводимой терапии, при обследовании больных психиатрических и неврологических стационаров, доноров и беременных, включая лиц, направляемых на искусственное прерывание беременности.

Кровь для исследования берут в количестве 5-7 мл из локтевой вены стерильной иглой при соблюдении правил асептики. У грудных детей кровь можно получить из височной вены или из надрезов на пятке. Кровь берут строго натощак (спустя 5-6 ч после приема пищи) и оставляют ее в чистых сухих пробирках на 2-3 ч при комнатной температуре для свертывания. Постановку КСР и специфических реакций производят в серологических лабораториях кожно-венерологических учреждений, а в сельской местности — в лабораториях сельских районных больниц.

Для пересылки крови для исследования в отдаленные лаборатории очень удобен метод сухой капли. Для этого на следующий день после забора крови сыворотку отделяют от сгустка. Градуированной пипеткой набирают 1 мл сыворотки и выливают ее в виде двух отдельных кружков на полоску плотной бумаги (вощаной или целлофана) размером приблизительно 6×8 см. На свободном крае бумаги надписывают фамилию, имя и отчество больного, дату забора крови и порядковый номер. Сыворотку на бумаге, защищенную от прямых лучей солнца и пыли, оставляют

на 24 ч при комнатной температуре для засыхания. После этого полоски бумаги с высушенной сывороткой свертывают и отсылают в лабораторию.

РСК в КСР с кардиолипиновым антигеном не очень чувствительна и становится положительной через 2-4 нед после возникновения твердого шанкра, причем титр реагинов постепенно нарастает и достигает максимума (1:160-1:320 и выше) при вторичном свежем сифилисе. Затем титр реагинов постепенно падает и при вторичном рецидивном сифилисе обычно не превышает 1:80-1:20. У больных с третичным сифилисом указанные реакции дают положительный результат только в 70% случаев.

Следует подчеркнуть, что КСР не является строго специфичным для сифилиса и в ряде случаев может давать ложноположительные (неспецифические) результаты. Такие ложноположительные реакции наблюдаются у больных лепрой, малярией, иногда с аутоиммунным заболеванием, новообразованиями, пневмонией, туберкулезом, заболеваниями печени, при приеме лекарственных препаратов (сульфаниламиды, глюкозиды, валериана и др.), а также во время беременности, при менструациях и т.д. При взятии крови для исследования на КСР необходимо предупреждать обследуемого, чтобы он за 2-3 дня до этого не употреблял алкоголь, жирную пищу, не принимал лекарственные препараты. Не рекомендуется исследовать кровь в течение 1-й недели после вакцинации, травм, хирургических вмешательств, при лихорадочных состояниях, в течение первых 2 нед после родов, у новорожденных в первые 10 дней жизни, поскольку физико-химические изменения в сыворотке крови при этих состояниях могут быть сходны с теми, которые наблюдаются у больных сифилисом.

Ложноположительные результаты могут получаться также в связи с техническими ошибками (неполный гемолиз, нестерильное взятие крови, недостаточная квалификация лаборантов).

Для отдифференцирования ложноположительных результатов КСР от истинных, для диагностики скрытых и поздних форм сифилиса, при подозрении на сифилитическую инфекцию, для установления ретроспективного диагноза заболевания рекомендуется применять специфические серологические реакции (РИБТ, РПГА, ИФА или РИФ)

Для проведения специфических серологических реакций кровь в количестве 5-10 мл берут также из локтевой вены натощак. Кровь вливают в сухую пробирку для исследования на РИФ и в стерильную пробирку для исследования на РИБТ. Постановка специфических серологических реакций на сифилис производится в специализированных лабораториях кожно-венерологических учреждений.

РИФ основана на непрямом методе определения флюоресцирующих антител. Антигеном в этой реакции служит взвесь убитых культуральных бледных трепонем, фиксированная к предметным стеклам, на которые наносят исследуемую и антивидовую флюоресцирующую сыворотки. Результаты РИФ определяют под люминесцентным микроскопом путем оценки свечения трепонем в препарате. При положительном результате трепонемы имеют желтовато-зеленое свечение, степень которого обозначают плюсами от 1 до 4; при отрицательных результатах трепонемы не светятся.

Другая специфическая реакция на сифилис — РИБТ — основана на феномене обездвиживания бледных трепонем антигенами сыворотки крови больного в присутствии комплемента. В качестве антигена для РИБТ используют взвесь живых бледных трепонем, полученных от зараженных сифилисом кроликов. Подсчет утративших подвижность (иммобилизированных) трепонем ведут под микроскопом. Результаты реакции оценивают в процентах: от 0 до 20% — отрицательная, от 21 до 30% — сомнительная, от 31 до 50% — слабоположительная, от 51 до 100% — положительная. РИБТ становится положительной в конце первичного периода сифилиса и остается таковой в течение всех периодов этого заболевания, а иногда и после полноценного противосифилитического лечения. При третичном сифилисе, специфических поражениях внутренних органов, нервной системы, при врожденном сифилисе, когда КСР часто отрицателен, РИБТ дает положительные результаты в 98-100% случаев. Диагноз скрытого сифилиса обязательно следует подтвердить положительной РИБТ.

РИБТ также может давать ложноположительные результаты, если в исследуемой сыворотке содержатся трепонемоцидные вещества (антибиотики — пенициллин, тетрациклин), вызывающие неспецифическую (токсическую) иммобилизацию бледных трепонем. Поэтому нельзя исследовать кровь на эту реакцию раньше, чем через 2 нед после окончания приема антибиотиков.

Серологические исследования можно использовать и для определения поражения сифилисом нервной системы, исследуя цереброспинальную (спинно-мозговую) жидкость больного. Ее исследуют также на наличие белка, ферментных элементов, которые свидетельствуют о патологии и помогают диагностировать ту или иную форму нейросифилиса. Цереброспинальную жидкость получают при люмбальной пункции. Проведенная асептически, она не представляет никакой опасности и может быть осуществлена врачом даже в амбулаторных условиях. Серологические исследования цереброспинальной жидкости показаны во всех случаях сифилиса

ЦНС.

Источник: studopedia.ru


You May Also Like

About the Author: admind

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.