Пцр рнк вич



Количественное определение РНК ВИЧ в плазме (вирусная нагрузка)

Методы

  • ПЦР на РНК ВИЧ (Amplicor HIV-1 Monitor Test 1.5, фирма-изготовитель Roche; 800-526-1247)
  • Метод разветвленной ДНК (Versant HIV-1 RNA 3.0 Assay, фирма- изготовитель Bayer; 800-434-2447)
  • Изотермальная реакция амплификации последовательностей нуклеиновых кислот (NASBA) (NucliSens HIV-1 QT, фирма- изготовитель bioMerieux, 800-682-2666)
Воспроизводимость результатов.

Как показано в таблице 2.4, у каждой тест-системы свой порог и диапазон чувствительности (J Clin Microbiol 1996; 34:3016; J Med Virol 1996; 50:293; J Clin Microbiol 1996; 34:1058; J Clin Microbiol 1998; 36:3392). Два стандартных отклонения (95% доверительный интервал) для результатов тестов составляют 0,3–0,5 log10 (т. е. результаты могут отличаться в 2–3 раза) (J Infect Dis 1997; 175:247; AIDS 1999; 13:2269). Это значит, что 95% доверительный интервал для значения 10 000 копий/мл составляет от 3 100 до 32 000 копий/мл. Значения вирусной нагрузки, полученные при использовании тест-системы Amplicor 1.5 (Roche) и методом рДНК (Versant 3.0), близки, за исключением нижнего участка линейного диапазона (


Подтипы ВИЧ.

При определении вирусной нагрузки не-В-подтипов ВИЧ наблюдается значительно больший разброс показателей. Метод разветвленной ДНК (Versant 3.0) несколько превосходил остальные методики в отношении определения вирусной нагрузки ВИЧ подтипов A–D, F, G, CRF01_AE и CRF01_AG (межподтиповых рекомбинантных форм) и O; при использовании этого метода 83% результатов различались не более чем на 0,5 log10. При использовании Amplicor Monitor 1.5 этот показатель был 74%, а для NucliSens — 61% (J Clin Microbiol 2005; 43:3860). Результаты других исследований подтверждают эти данные (J Med Virol 2006; 78:883; J Acquir Immune Defic Syndr 2002; 29:330).

Таблица 2.4. Тесты на ВИЧ-1




Метод Чувст. Дополнительные сведения
Стандартный протокол серологического тестирования 99,7% Доступное и недорогое. Чувствительность >99,7%, специфичность >99,9% (MMWR 1990; 38:380; N Engl J Med 1988; 319:961; JAMA 1991; 266:2861).
Экспресс-тест
См. стр. 12–13 и таблицу 2.2
99,6% Результат готов через 20 минут. Преимущества «простых» тестов по классификации CLIA (Ora-Quick и Uni-Gold Recombigen) состоят в том, что для тестирования не требуется лабораторного оборудования, получение результата занимает не более 20 минут и для интерпретации результата не требуется специальной подготовки. Отрицательный результат тестирования не требует подтверждения; положительный результат следует подтвердить методом вестерн блота. В таблице 2.2 перечислены экспресс-тесты, одобренные FDA для применения в США (www.cdc.gov/hiv/rapid-testing). Существуют и другие экспресс-тесты, но они не лицензированы FDA (Int J STD AIDS 2006; 17:357; Vox Sang 1997; 72:11; J Clin Microbiol 2004; 42:3850).
Анализ слюны
(тест-система OraSure)
99,6% Приспособление для сбора IgG из слюны для исследования при помощи ИФА и вестерн блота. Преимущество: нет необходимости в венепункции. Чувствительность и специфичность сопоставимы с чувствительностью и специфичностью стандартного протокола серологического тестирования (JAMA 1997; 227:254).
Анализ мочи
(Calypte HIV-1 Test)
>99% Исследуется только методом ИФА, поэтому положительные резуль- таты должны подтверждаться при помощи стандартного протокола серологического тестирования. Проводится врачом. Стоимость невелика — около 4 долларов за тест.
Выделение вируса в культуре МКПК 95–100% МКПК пациента в течение 28 дней инкубируют со стимулирован- ными фитогемагглютинином донорскими МКПК в присутствии ИЛ-2. Метод дорогой и трудоемкий. Может быть качественным и количественным. Основное применение качественного метода — выделение вируса для дальнейшего изучения (например, секвенирования). Исследования, предшествовавшие появлению количественной ПЦР на РНК ВИЧ, показали, что результаты количественного анализа культуры коррелируют со стадией заболевания: средний титр ВИЧ у пациентов со СПИДом составлял 2000/106 клеток (N Engl J Med 1989; 321:1621).
ПЦР на провирусную ДНК >99% Качественная ПЦР на ДНК ВИЧ используется для обнаружения интегрированной в клетку провирусной ДНК, в том числе в периферических лимфоцитах CD4 (резервуарах ВИЧ) при обследовании пациентов, отвечающих на ВААРТ. Порог чувствительности метода составляет около 5 копий на 106 клеток (J Virol Methods 2005; 124:157). Считается недостаточно точным для установления окончательного диагноза ВИЧ-инфекции; его результаты требуют подтверждения. Метод не утвержден FDA (Ann Intern Med 1996; 124:803), хотя в отдельных случаях его используют при спорных или неопределенных результатах серологических тестов.
ПЦР на РНК ВИЧ 95–98% Ложноположительные результаты в 2–9% случаев, обычно показывают низкую вирусную нагрузку (10 000 копий/мл приближается к 100%.
Антиген р24 30–90% Благодаря небольшой стоимости иногда используется в качестве альтернативы тесту на РНК ВИЧ для диагностики острой ВИЧ- инфекции. Специфичность 100%, но чувствительность около 90% — меньше, чем у количественных тестов на РНК ВИЧ (Ann Intern Med 2001; 134:25). Он также применяется в качестве экономичного способа определения вирусной нагрузки в условиях ограниченных ресурсов (J Clin Micro 2005; 43:506).
Половые различия.

Метаанализ 12 публикаций выявил наличие умеренных различий уровня вирусной нагрузки у мужчин и женщин: оказалось, что вирусная нагрузка у женщин в среднем на 0,23 log10 /мл (? в 2 раза) ниже, чем у мужчин (J Acquir Immune Defic Syndr 2002; 31:11). Однако эти различия исчезают при количестве лимфоцитов CD4 -1 и поэтому практически не влияют на решения относительно лечения (J Acquir Immune Defic Syndr 2000; 24:218; J Infect Dis 1999; 180:666; Clin Infect Dis 2002; 35:313; Lancet 1998; 352:1510; N Engl J Med 2001; 344:720).


Показания.

Количественный метод определения РНК ВИЧ используется для диагностики острой ВИЧ-инфекции, прогноза вероятности передачи вируса, прогноза темпа прогрессирования ВИЧ-инфекции, выявления показаний к началу антиретровирусной терапии, а также для наблюдения за эффективностью лечения (Ann Intern Med 1995; 122:573; N Engl J Med 1996; 334:426; J Infect Dis 1997; 175:247; J Infect Dis 2002; 185:905).

  • Острая ВИЧ-инфекция. Уровень РНК ВИЧ в плазме обычно определяют с целью диагностики острого ретровирусного синдрома до завершения сероконверсии (N Engl J Med 2005; 352:1873). В большинстве случаев определяется высокая концентрация вируса (105–106 копий/мл). Отметим, что у 2–9% людей, не инфицированных ВИЧ, исследование дает ложноположительные результаты, практически всегда показывая низкую концентрацию РНК ВИЧ (
    В штате Северная Каролина применялся следующий протокол выявления больных острой ВИЧ-инфекцией: из образцов крови с отрицательными или неопределенными результатами стандартного серологического тестирования брали по 200 мкл и формировали «малые» смеси из каждых 10 образцов. Затем брали по 200 мкл из девяти малых смесей и формировали «большие» смеси. При положительном результате исследования «большой» смеси методом ОТ-ПЦР сначала исследовали все «малые» смеси, которые входили в эту «большую» смесь, а потом исследовали все индивидуальные образцы крови, входившие в «малые» смеси с положительным результатом ОТ-ПЦР на РНК ВИЧ (JAMA 2002; 288:216).

    е положительные результаты подтверждались дополнительными исследованиями. В Северной Каролине применение этого протокола занимало 14 дней; стоимость исследования одного образца составляла 2,01 долл. Этот протокол использовался для прослеживания контактов по ВИЧ-инфекции и, возможно, способствовал профилактике передачи ВИЧ, поскольку острая ВИЧ- инфекция характеризуется высоким риском передачи ВИЧ (J Infect Dis 2005; 191:1403). В ходе применения этого протокола в Северной Каролине в течение года было обследовано 109 250 человек, из которых 606 были серопозитивны, а у 23 была обнаружена острая ВИЧ- инфекция.
  • Прогноз. Вирусная нагрузка коррелирует со скоростью снижения количества лимфоцитов CD4 (J Infect Dis 2002; 185:908), однако эта зависимость не такая сильная, как считалось ранее (JAMA 2006; 296:1523). Зависимость течения заболевания от вирусной нагрузки наиболее всесторонне изучалась в ходе исследования сохраненных образцов сывороток крови испытуемых, участвовавших в Многоцентровом когортном исследовании СПИДа (MACS). Была продемонстрирована стойкая взаимосвязь между «равновесной точкой» вирусной нагрузки и скоростью клинического прогрессирования ВИЧ- инфекции, при этом последняя не зависела от исходного количества лимфоцитов CD4 (Ann Intern Med 1995; 122:573; Science 1996; 272:1167; J Infect Dis 1996; 174:696; J Infect Dis 1996; 174:704; AIDS 1999; 13:1305; N Engl J Med 2001; 349:720; AIDS 2002; 16:2455; Lancet 2003; 362:679; J Acquir Immun Defic Syndr 2005; 38:289). В эпоху ВААРТ эта зависимость потеряла актуальность, сейчас исход заболевания определяется эффективностью проводимой терапии независимо от величины исходной вирусной нагрузки (AIDS 2006; 20:1197; Clin Infect Dis 2006; 42:136; J Infect Dis 2004; 190:280).

  • Риск развития оппортунистических инфекций. Оказалось, что у пациентов с количеством лимфоцитов CD4 -1 показатель вирусной нагрузки позволяет прогнозировать риск оппортунистических инфекций независимо от количества лимфоцитов CD4 (JAMA 1996; 276:105; AIDS 1999; 13:341; AIDS 1999; 13:1035; J Acquir Immune Defic Syndr 2001; 27:44). ACTG 722 было единственным проспективным исследованием, в котором изучалась эта связь. Было показано, что если у пациентов с количеством лимфоцитов CD4 -1 не удается снизить вирусную нагрузку на ?1 log10/мл, риск оппортунистических инфекций возрастает в 15 раз (J Acquir Immune Defic Syndr 2002; 30:154). Ретроспективный анализ историй болезни более чем 12 000 пациентов показал, что количество лимфоцитов CD4 — лучший прогностический показатель риска развития состояний и заболеваний, включенных в диагностические критерии СПИДа (Lancet 2002; 360:119), но именно вирусная нагрузка позволяет предсказать скорость снижения количества лимфоцитов CD4 (J Infect Dis 2002; 185:908).

  • Вероятность передачи ВИЧ. Вероятность передачи ВИЧ при практически любом виде контакта находится в прямой зависимости от уровня вирусной нагрузки (N Engl J Med 2000; 342:921; J Acquir Immune Defic Syndr 1996; 12:427; J Acquir Immune Defic Syndr 1998; 17:42; J Acquir Immune Defic Syndr 1999; 21:120; J Infect Dis 2002; 185:428; Lancet 2001; 357:1149; AIDS 2001; 15:621; Clin Infect Dis 2002; 34:391; J Infect Dis 2005; 191:1403; AIDS 2006; 20:895).
  • Наблюдение за эффективностью терапии. После начала терапии наблюдается быстрое снижение уровня РНК ВИЧ в течение 1–4 не- дель (альфа-спад), отражающее действие лекарственных препаратов на ВИЧ — как на свободные вирионы ВИЧ в плазме, так и на ВИЧ в первично инфицированных лимфоцитах CD4. За этим следует второе снижение вирусной нагрузки (бета-спад), оно более длительное (месяцы) и менее выраженное (см. количественные показатели ниже, в разделе «Частота лабораторных обследований при наблюдении за эф- фективностью терапии»). Бета-спад отражает эффективность противовирусного действия препаратов на зараженные ВИЧ макрофаги и ВИЧ, высвобождающийся из других резервуаров, особенно дендритных клеток лимфатических фолликулов, которые захватывают ВИЧ. Максимальный противовирусный эффект ожидается через 4–6 месяцев. Считается, что вирусная нагрузка — самый важный «барометр» эффективности терапии, хотя лучшим прогностическим показателем клинического прогрессирования ВИЧ-инфекции служит количество лимфоцитов CD4 (N Engl J Med 1996; 335:1091; Ann Intern Med 1996; 124:984; J Infect Dis 2002; 185:178).

    ходе исследований нуклеотидных последовательностей клонов ВИЧ было установлено, что при уровне вирусной нагрузки менее 50 копий/мл не происходит формирования резистентных штаммов вируса — это наиболее важный аргумент в пользу необходимости поддержания вирусной нагрузки на этом уровне в течение как можно более длительного времени (J Infect Dis 2004; 189:1452; J Infect Dis 2004; 189:1444). С практической точки зрения на этом уровне не происходит репликации вируса и вероятность возникновения резистентности очень мала.
  • Неожиданно низкая вирусная нагрузка. У очень небольшого числа пациентов в течение длительного времени вирусная нагрузка сохраняется на низком уровне, а количество лимфоцитов CD4 остается стабильно высоким; таких пациентов называют «длительными непрогрессорами». Еще более редко встречаются «элитные супрессоры», у которых вирусная нагрузка стабильно держится ниже 50 копий/мл без антиретровирусной терапии (J Exp Med 2006; 203:1357). Стандартные методы определения вирусной нагрузки дают наиболее точные результаты для ВИЧ подтипа В, однако также одобрены FDA для количественного определения РНК ВИЧ подтипов A–G. В ходе исследования, в котором изучались возможности применения различных тест-систем для определения вирусной нагрузки в случае инфицирования не-В- подтипами ВИЧ, было установлено, что частота случаев необнаружения ВИЧ или расхождения результатов более чем на 1 log10 копий/мл для Amplicor Monitor 1.5 составила 3%, для Versant 3.0 — 9%, и для NucliSens — 15% (J Clin Microbiol 2005; 43:3860). Тест-системы для определения вирусной нагрузки для ВИЧ-2 (концентрации РНК ВИЧ-2) нет.

  • Резервуары ВИЧ в организме. ВИЧ способен сохраняться в некоторых тканях и клетках организма человека, в которых концентрация антиретровирусных препаратов может сильно отличаться от концентрации в плазме крови. Такие резервуары служат «хранилищем» для резистентных штаммов ВИЧ, откуда при соответствующих условиях они могут распространяться по всему организму. Основной резервуар — это латентные («спящие») клетки иммунной системы, несущие рецептор CD4; также ВИЧ сохраняется в ЦНС и половых путях (AIDS 2002; 16:39; J Clin Microbiol 2000; 38:1414).
Рекомендации

Приведены из клинических стандартов Американского отделения Международного общества борьбы со СПИДом (IAS-USA) (JAMA 2006; 296:827) и Министерства здравоохранения и социальных служб США (DHHS) (www.aidsinfo.nih.gov/guidelines).

  • Гарантия качества. Вирусную нагрузку рекомендуется измерять на фоне стабильного клинического состояния, не ранее чем через 4 недели после вакцинации или перенесенной инфекции, всегда одним и тем же методом в одной и той же лаборатории.
  • Частота лабораторных обследований при наблюдении за эффективностью терапии. После двукратного измерения исходного уровня вирусной нагрузки контрольные измерения следует проводить регулярно, каждые 3–4 месяца (Clin Infect Dis 2001; 33:1060). В начале лечения и после его коррекции вирусную нагрузку измеряют через 1–4 недели (альфа-спад), затем через 12–16 недель и 16–24 недели. Об эффективности лечения свидетельствует снижение вирусной нагрузки на 0,75–1,0 log10 копий/мл от исходной через 1 неделю (Lancet 2001; 358:1760; J Acquir Immune Defic Syndr 2002; 30:167), снижение на 1,5–2 log10 копий/мл (до Интерпретация результатов. Значимыми считаются изменения уровня РНК ВИЧ на ?50% (на 0,3 log10 копий/мл).
  • На основании уровня вирусной нагрузки в крови нельзя судить о степени повреждения функции иммунной системы, способности популяции лимфоцитов CD4 к восстановлению, чувствительности вируса к антиретровирусным препаратам, вирулентных свойствах вируса, его способности к репликации и к образованию синцития из инфицированных клеток, а также о вирусной нагрузке в других тканях (например, в лимфатических узлах, в ЦНС, в ЖКТ, в выделениях из половых путей).
  • Факторы, повышающие вирусную нагрузку:
    • смена доминирующего штамма ВИЧ, когда вирус, не способный образовывать синцитий (использующий в качестве корецептора хемокиновый рецептор CCR5), вытесняется вирусом, способным образовывать синцитий (использующим в качестве корецептора хемокиновый рецептор CXCR4);
    • прогрессирование ВИЧ-инфекции;
    • неудача антиретровирусного лечения из-за недостаточной противовирусной активности препаратов, недостаточных концентраций препаратов в организме, несоблюдения режима лечения и резистентности вируса;
    • суперинфекция ВИЧ (J Infect Dis 2005; 192:438);
    • острые инфекционные заболевания: на фоне активной формы туберкулеза вирусная нагрузка повышается в 5–160 раз (J Immunol 1996; 157:1271); на фоне пневмококковой пневмонии вирусная нагрузка повышается в 3–5 раз;
    • прививки, в том числе введение противогриппозной вакцины и вакцины Pneumovax (против Streptococcus pneumoniae) (Blood 1995; 86:1082; N Engl J Med 1996; 335:817; N Engl J Med 1996; 334:1222). В этом случае повышение вирусной нагрузки небольшое и сохраняется от 2 до 4 недель.
  • Относительные преимущества различных тест-систем. У тестсистемы Versant 3.0 хорошая воспроизводимость результатов для вирусных нагрузок в диапазоне 75–500 000 копий/мл. Линейный диапазон для суперчувствительной тест-системы Amplicor составляет 50– 100 000 копий/мл. Эту тест-систему не следует использовать при обследовании пациентов, у которых ожидается более высокая вирусная нагрузка (J Clin Microbiol 2000; 38:2837). У метода NucliSens более широкий динамический диапазон (176–3 500 000 копий/мл), и его можно использовать для измерения количества вируса как в крови, так и в других биологических жидкостях и тканях, например, в семенной жидкости, спинномозговой жидкости, грудном молоке, слюне и вагинальных выделениях (J Clin Microbiol 2000; 38:1414).

Таблица 2.5. Сравнительная характеристика лицензированных FDA тест-систем, основанных на разных методах измерения вирусной нагрузки

  Roche Bayer bioMerieux
Контактный телефон 800-526-1247 800-434-2447 800-682-2666
Торговое название Amplicor HIV Monitor 1.5 Versant HIV-1 RNA 3.0 NucliSens HIV-1 QT
Техника ОТ-ПЦР рДНК NASBA
Сравнение результатов Результаты, получаемые методом ОТ-ПЦР, сопоставимы с результатами, получаемыми методом рДНК (Versant) с использованием тест-систем 2.0 и 3.0 Результаты, получаемые методом рДНК, сопоставимы с результатами, получаемыми методом ОТ-ПЦР (Amplicor) Результаты, по-видимому, сопоставимы с результатами, получаемыми методами ОТ-ПЦР и рДНК, но пока не получено достаточно данных
Преимущества и недостатки Меньше ложноположительных результатов у ВИЧ-отрицательных пациентов по сравнению с методом рДНК Выполнение исследования занимает меньше времени у лаборанта. Хороший динамический диапазон, но выше порог определения вирусной нагрузки Может применяться для обнаружения вируса в тканях и биологических жидкостях, например, выделениях половых путей. Самый большой динамический диапазон.
Динамический диапазон Стандартный (Amplicor 1.5): 400–750 000 копий/мл
Суперчувствительный (Ultra-Direct 1.5): 50–100 000 копий/мл
рДНК 3.0: 75–500 000 копий/мл* NucliSens HIV-1 QT: 176–3 500 000 копий/мл; динамический диапазон зависит от объема
Подтип вируса Тест-система 1.5: от A до G от A до G от A до G
Необходимый объем материала для исследования Amplicor: 0,2 мл Суперчувствительный: 0,5 мл 1 мл От 10 мкл до 2 мл
Пробирки ЭДТА (пробирка с сиреневой крышкой) ЭДТА (пробирка с сиреневой крышкой) ЭДТА, гепарин, цельная кровь, любая биологическая жидкость, МКПК, семенная жидкость, ткани и т. д.
Требования Отделить плазму не позже чем через 6 часов после забора крови, перед транспортировкой заморозить при температуре –20°С или –70°С. Отделить плазму не позже чем через 4 часа после забора крови, перед транспортировкой заморозить при температуре –20°С или –70°С. Отделить сыворотку или плазму не позже чем через 4 часа после забора крови, перед транспортировкой заморозить при температуре –20°С или –70°С.

* Нижнее пороговое значение вирусной нагрузки, установленное FDA, составляет 75 копий/мл. За пределами США нижнее пороговое значение вирусной нагрузки составляет 50 копий/мл.

Источник: www.eurasiahealth.org

Источник: acet-russia.ru

Количественное определение РНК ВИЧ в плазме (вирусная нагрузка)

Методы

  • ПЦР на РНК ВИЧ (Amplicor HIV-1 Monitor Test 1.5, фирма-изготовитель Roche; 800-526-1247)
  • Метод разветвленной ДНК (Versant HIV-1 RNA 3.0 Assay, фирма- изготовитель Bayer; 800-434-2447)
  • Изотермальная реакция амплификации последовательностей нуклеиновых кислот (NASBA) (NucliSens HIV-1 QT, фирма- изготовитель bioMerieux, 800-682-2666)
Воспроизводимость результатов.

Как показано в таблице 2.4, у каждой тест-системы свой порог и диапазон чувствительности (J Clin Microbiol 1996; 34:3016; J Med Virol 1996; 50:293; J Clin Microbiol 1996; 34:1058; J Clin Microbiol 1998; 36:3392). Два стандартных отклонения (95% доверительный интервал) для результатов тестов составляют 0,3–0,5 log10 (т. е. результаты могут отличаться в 2–3 раза) (J Infect Dis 1997; 175:247; AIDS 1999; 13:2269). Это значит, что 95% доверительный интервал для значения 10 000 копий/мл составляет от 3 100 до 32 000 копий/мл. Значения вирусной нагрузки, полученные при использовании тест-системы Amplicor 1.5 (Roche) и методом рДНК (Versant 3.0), близки, за исключением нижнего участка линейного диапазона (

Подтипы ВИЧ.

При определении вирусной нагрузки не-В-подтипов ВИЧ наблюдается значительно больший разброс показателей. Метод разветвленной ДНК (Versant 3.0) несколько превосходил остальные методики в отношении определения вирусной нагрузки ВИЧ подтипов A–D, F, G, CRF01_AE и CRF01_AG (межподтиповых рекомбинантных форм) и O; при использовании этого метода 83% результатов различались не более чем на 0,5 log10. При использовании Amplicor Monitor 1.5 этот показатель был 74%, а для NucliSens — 61% (J Clin Microbiol 2005; 43:3860). Результаты других исследований подтверждают эти данные (J Med Virol 2006; 78:883; J Acquir Immune Defic Syndr 2002; 29:330).

Таблица 2.4. Тесты на ВИЧ-1

Метод Чувст. Дополнительные сведения
Стандартный протокол серологического тестирования 99,7% Доступное и недорогое. Чувствительность >99,7%, специфичность >99,9% (MMWR 1990; 38:380; N Engl J Med 1988; 319:961; JAMA 1991; 266:2861).
Экспресс-тест
См. стр. 12–13 и таблицу 2.2
99,6% Результат готов через 20 минут. Преимущества «простых» тестов по классификации CLIA (Ora-Quick и Uni-Gold Recombigen) состоят в том, что для тестирования не требуется лабораторного оборудования, получение результата занимает не более 20 минут и для интерпретации результата не требуется специальной подготовки. Отрицательный результат тестирования не требует подтверждения; положительный результат следует подтвердить методом вестерн блота. В таблице 2.2 перечислены экспресс-тесты, одобренные FDA для применения в США (www.cdc.gov/hiv/rapid-testing). Существуют и другие экспресс-тесты, но они не лицензированы FDA (Int J STD AIDS 2006; 17:357; Vox Sang 1997; 72:11; J Clin Microbiol 2004; 42:3850).
Анализ слюны
(тест-система OraSure)
99,6% Приспособление для сбора IgG из слюны для исследования при помощи ИФА и вестерн блота. Преимущество: нет необходимости в венепункции. Чувствительность и специфичность сопоставимы с чувствительностью и специфичностью стандартного протокола серологического тестирования (JAMA 1997; 227:254).
Анализ мочи
(Calypte HIV-1 Test)
>99% Исследуется только методом ИФА, поэтому положительные резуль- таты должны подтверждаться при помощи стандартного протокола серологического тестирования. Проводится врачом. Стоимость невелика — около 4 долларов за тест.
Выделение вируса в культуре МКПК 95–100% МКПК пациента в течение 28 дней инкубируют со стимулирован- ными фитогемагглютинином донорскими МКПК в присутствии ИЛ-2. Метод дорогой и трудоемкий. Может быть качественным и количественным. Основное применение качественного метода — выделение вируса для дальнейшего изучения (например, секвенирования). Исследования, предшествовавшие появлению количественной ПЦР на РНК ВИЧ, показали, что результаты количественного анализа культуры коррелируют со стадией заболевания: средний титр ВИЧ у пациентов со СПИДом составлял 2000/106 клеток (N Engl J Med 1989; 321:1621).
ПЦР на провирусную ДНК >99% Качественная ПЦР на ДНК ВИЧ используется для обнаружения интегрированной в клетку провирусной ДНК, в том числе в периферических лимфоцитах CD4 (резервуарах ВИЧ) при обследовании пациентов, отвечающих на ВААРТ. Порог чувствительности метода составляет около 5 копий на 106 клеток (J Virol Methods 2005; 124:157). Считается недостаточно точным для установления окончательного диагноза ВИЧ-инфекции; его результаты требуют подтверждения. Метод не утвержден FDA (Ann Intern Med 1996; 124:803), хотя в отдельных случаях его используют при спорных или неопределенных результатах серологических тестов.
ПЦР на РНК ВИЧ 95–98% Ложноположительные результаты в 2–9% случаев, обычно показывают низкую вирусную нагрузку (10 000 копий/мл приближается к 100%.
Антиген р24 30–90% Благодаря небольшой стоимости иногда используется в качестве альтернативы тесту на РНК ВИЧ для диагностики острой ВИЧ- инфекции. Специфичность 100%, но чувствительность около 90% — меньше, чем у количественных тестов на РНК ВИЧ (Ann Intern Med 2001; 134:25). Он также применяется в качестве экономичного способа определения вирусной нагрузки в условиях ограниченных ресурсов (J Clin Micro 2005; 43:506).
Половые различия.

Метаанализ 12 публикаций выявил наличие умеренных различий уровня вирусной нагрузки у мужчин и женщин: оказалось, что вирусная нагрузка у женщин в среднем на 0,23 log10 /мл (? в 2 раза) ниже, чем у мужчин (J Acquir Immune Defic Syndr 2002; 31:11). Однако эти различия исчезают при количестве лимфоцитов CD4 -1 и поэтому практически не влияют на решения относительно лечения (J Acquir Immune Defic Syndr 2000; 24:218; J Infect Dis 1999; 180:666; Clin Infect Dis 2002; 35:313; Lancet 1998; 352:1510; N Engl J Med 2001; 344:720).

Показания.

Количественный метод определения РНК ВИЧ используется для диагностики острой ВИЧ-инфекции, прогноза вероятности передачи вируса, прогноза темпа прогрессирования ВИЧ-инфекции, выявления показаний к началу антиретровирусной терапии, а также для наблюдения за эффективностью лечения (Ann Intern Med 1995; 122:573; N Engl J Med 1996; 334:426; J Infect Dis 1997; 175:247; J Infect Dis 2002; 185:905).

  • Острая ВИЧ-инфекция. Уровень РНК ВИЧ в плазме обычно определяют с целью диагностики острого ретровирусного синдрома до завершения сероконверсии (N Engl J Med 2005; 352:1873). В большинстве случаев определяется высокая концентрация вируса (105–106 копий/мл). Отметим, что у 2–9% людей, не инфицированных ВИЧ, исследование дает ложноположительные результаты, практически всегда показывая низкую концентрацию РНК ВИЧ (
    В штате Северная Каролина применялся следующий протокол выявления больных острой ВИЧ-инфекцией: из образцов крови с отрицательными или неопределенными результатами стандартного серологического тестирования брали по 200 мкл и формировали «малые» смеси из каждых 10 образцов. Затем брали по 200 мкл из девяти малых смесей и формировали «большие» смеси. При положительном результате исследования «большой» смеси методом ОТ-ПЦР сначала исследовали все «малые» смеси, которые входили в эту «большую» смесь, а потом исследовали все индивидуальные образцы крови, входившие в «малые» смеси с положительным результатом ОТ-ПЦР на РНК ВИЧ (JAMA 2002; 288:216). Все положительные результаты подтверждались дополнительными исследованиями. В Северной Каролине применение этого протокола занимало 14 дней; стоимость исследования одного образца составляла 2,01 долл. Этот протокол использовался для прослеживания контактов по ВИЧ-инфекции и, возможно, способствовал профилактике передачи ВИЧ, поскольку острая ВИЧ- инфекция характеризуется высоким риском передачи ВИЧ (J Infect Dis 2005; 191:1403). В ходе применения этого протокола в Северной Каролине в течение года было обследовано 109 250 человек, из которых 606 были серопозитивны, а у 23 была обнаружена острая ВИЧ- инфекция.
  • Прогноз. Вирусная нагрузка коррелирует со скоростью снижения количества лимфоцитов CD4 (J Infect Dis 2002; 185:908), однако эта зависимость не такая сильная, как считалось ранее (JAMA 2006; 296:1523). Зависимость течения заболевания от вирусной нагрузки наиболее всесторонне изучалась в ходе исследования сохраненных образцов сывороток крови испытуемых, участвовавших в Многоцентровом когортном исследовании СПИДа (MACS). Была продемонстрирована стойкая взаимосвязь между «равновесной точкой» вирусной нагрузки и скоростью клинического прогрессирования ВИЧ- инфекции, при этом последняя не зависела от исходного количества лимфоцитов CD4 (Ann Intern Med 1995; 122:573; Science 1996; 272:1167; J Infect Dis 1996; 174:696; J Infect Dis 1996; 174:704; AIDS 1999; 13:1305; N Engl J Med 2001; 349:720; AIDS 2002; 16:2455; Lancet 2003; 362:679; J Acquir Immun Defic Syndr 2005; 38:289). В эпоху ВААРТ эта зависимость потеряла актуальность, сейчас исход заболевания определяется эффективностью проводимой терапии независимо от величины исходной вирусной нагрузки (AIDS 2006; 20:1197; Clin Infect Dis 2006; 42:136; J Infect Dis 2004; 190:280).
  • Риск развития оппортунистических инфекций. Оказалось, что у пациентов с количеством лимфоцитов CD4 -1 показатель вирусной нагрузки позволяет прогнозировать риск оппортунистических инфекций независимо от количества лимфоцитов CD4 (JAMA 1996; 276:105; AIDS 1999; 13:341; AIDS 1999; 13:1035; J Acquir Immune Defic Syndr 2001; 27:44). ACTG 722 было единственным проспективным исследованием, в котором изучалась эта связь. Было показано, что если у пациентов с количеством лимфоцитов CD4 -1 не удается снизить вирусную нагрузку на ?1 log10/мл, риск оппортунистических инфекций возрастает в 15 раз (J Acquir Immune Defic Syndr 2002; 30:154). Ретроспективный анализ историй болезни более чем 12 000 пациентов показал, что количество лимфоцитов CD4 — лучший прогностический показатель риска развития состояний и заболеваний, включенных в диагностические критерии СПИДа (Lancet 2002; 360:119), но именно вирусная нагрузка позволяет предсказать скорость снижения количества лимфоцитов CD4 (J Infect Dis 2002; 185:908).
  • Вероятность передачи ВИЧ. Вероятность передачи ВИЧ при практически любом виде контакта находится в прямой зависимости от уровня вирусной нагрузки (N Engl J Med 2000; 342:921; J Acquir Immune Defic Syndr 1996; 12:427; J Acquir Immune Defic Syndr 1998; 17:42; J Acquir Immune Defic Syndr 1999; 21:120; J Infect Dis 2002; 185:428; Lancet 2001; 357:1149; AIDS 2001; 15:621; Clin Infect Dis 2002; 34:391; J Infect Dis 2005; 191:1403; AIDS 2006; 20:895).
  • Наблюдение за эффективностью терапии. После начала терапии наблюдается быстрое снижение уровня РНК ВИЧ в течение 1–4 не- дель (альфа-спад), отражающее действие лекарственных препаратов на ВИЧ — как на свободные вирионы ВИЧ в плазме, так и на ВИЧ в первично инфицированных лимфоцитах CD4. За этим следует второе снижение вирусной нагрузки (бета-спад), оно более длительное (месяцы) и менее выраженное (см. количественные показатели ниже, в разделе «Частота лабораторных обследований при наблюдении за эф- фективностью терапии»). Бета-спад отражает эффективность противовирусного действия препаратов на зараженные ВИЧ макрофаги и ВИЧ, высвобождающийся из других резервуаров, особенно дендритных клеток лимфатических фолликулов, которые захватывают ВИЧ. Максимальный противовирусный эффект ожидается через 4–6 месяцев. Считается, что вирусная нагрузка — самый важный «барометр» эффективности терапии, хотя лучшим прогностическим показателем клинического прогрессирования ВИЧ-инфекции служит количество лимфоцитов CD4 (N Engl J Med 1996; 335:1091; Ann Intern Med 1996; 124:984; J Infect Dis 2002; 185:178). В ходе исследований нуклеотидных последовательностей клонов ВИЧ было установлено, что при уровне вирусной нагрузки менее 50 копий/мл не происходит формирования резистентных штаммов вируса — это наиболее важный аргумент в пользу необходимости поддержания вирусной нагрузки на этом уровне в течение как можно более длительного времени (J Infect Dis 2004; 189:1452; J Infect Dis 2004; 189:1444). С практической точки зрения на этом уровне не происходит репликации вируса и вероятность возникновения резистентности очень мала.
  • Неожиданно низкая вирусная нагрузка. У очень небольшого числа пациентов в течение длительного времени вирусная нагрузка сохраняется на низком уровне, а количество лимфоцитов CD4 остается стабильно высоким; таких пациентов называют «длительными непрогрессорами». Еще более редко встречаются «элитные супрессоры», у которых вирусная нагрузка стабильно держится ниже 50 копий/мл без антиретровирусной терапии (J Exp Med 2006; 203:1357). Стандартные методы определения вирусной нагрузки дают наиболее точные результаты для ВИЧ подтипа В, однако также одобрены FDA для количественного определения РНК ВИЧ подтипов A–G. В ходе исследования, в котором изучались возможности применения различных тест-систем для определения вирусной нагрузки в случае инфицирования не-В- подтипами ВИЧ, было установлено, что частота случаев необнаружения ВИЧ или расхождения результатов более чем на 1 log10 копий/мл для Amplicor Monitor 1.5 составила 3%, для Versant 3.0 — 9%, и для NucliSens — 15% (J Clin Microbiol 2005; 43:3860). Тест-системы для определения вирусной нагрузки для ВИЧ-2 (концентрации РНК ВИЧ-2) нет.
  • Резервуары ВИЧ в организме. ВИЧ способен сохраняться в некоторых тканях и клетках организма человека, в которых концентрация антиретровирусных препаратов может сильно отличаться от концентрации в плазме крови. Такие резервуары служат «хранилищем» для резистентных штаммов ВИЧ, откуда при соответствующих условиях они могут распространяться по всему организму. Основной резервуар — это латентные («спящие») клетки иммунной системы, несущие рецептор CD4; также ВИЧ сохраняется в ЦНС и половых путях (AIDS 2002; 16:39; J Clin Microbiol 2000; 38:1414).
Рекомендации

Приведены из клинических стандартов Американского отделения Международного общества борьбы со СПИДом (IAS-USA) (JAMA 2006; 296:827) и Министерства здравоохранения и социальных служб США (DHHS) (www.aidsinfo.nih.gov/guidelines).

  • Гарантия качества. Вирусную нагрузку рекомендуется измерять на фоне стабильного клинического состояния, не ранее чем через 4 недели после вакцинации или перенесенной инфекции, всегда одним и тем же методом в одной и той же лаборатории.
  • Частота лабораторных обследований при наблюдении за эффективностью терапии. После двукратного измерения исходного уровня вирусной нагрузки контрольные измерения следует проводить регулярно, каждые 3–4 месяца (Clin Infect Dis 2001; 33:1060). В начале лечения и после его коррекции вирусную нагрузку измеряют через 1–4 недели (альфа-спад), затем через 12–16 недель и 16–24 недели. Об эффективности лечения свидетельствует снижение вирусной нагрузки на 0,75–1,0 log10 копий/мл от исходной через 1 неделю (Lancet 2001; 358:1760; J Acquir Immune Defic Syndr 2002; 30:167), снижение на 1,5–2 log10 копий/мл (до Интерпретация результатов. Значимыми считаются изменения уровня РНК ВИЧ на ?50% (на 0,3 log10 копий/мл).
  • На основании уровня вирусной нагрузки в крови нельзя судить о степени повреждения функции иммунной системы, способности популяции лимфоцитов CD4 к восстановлению, чувствительности вируса к антиретровирусным препаратам, вирулентных свойствах вируса, его способности к репликации и к образованию синцития из инфицированных клеток, а также о вирусной нагрузке в других тканях (например, в лимфатических узлах, в ЦНС, в ЖКТ, в выделениях из половых путей).
  • Факторы, повышающие вирусную нагрузку:
    • смена доминирующего штамма ВИЧ, когда вирус, не способный образовывать синцитий (использующий в качестве корецептора хемокиновый рецептор CCR5), вытесняется вирусом, способным образовывать синцитий (использующим в качестве корецептора хемокиновый рецептор CXCR4);
    • прогрессирование ВИЧ-инфекции;
    • неудача антиретровирусного лечения из-за недостаточной противовирусной активности препаратов, недостаточных концентраций препаратов в организме, несоблюдения режима лечения и резистентности вируса;
    • суперинфекция ВИЧ (J Infect Dis 2005; 192:438);
    • острые инфекционные заболевания: на фоне активной формы туберкулеза вирусная нагрузка повышается в 5–160 раз (J Immunol 1996; 157:1271); на фоне пневмококковой пневмонии вирусная нагрузка повышается в 3–5 раз;
    • прививки, в том числе введение противогриппозной вакцины и вакцины Pneumovax (против Streptococcus pneumoniae) (Blood 1995; 86:1082; N Engl J Med 1996; 335:817; N Engl J Med 1996; 334:1222). В этом случае повышение вирусной нагрузки небольшое и сохраняется от 2 до 4 недель.
  • Относительные преимущества различных тест-систем. У тестсистемы Versant 3.0 хорошая воспроизводимость результатов для вирусных нагрузок в диапазоне 75–500 000 копий/мл. Линейный диапазон для суперчувствительной тест-системы Amplicor составляет 50– 100 000 копий/мл. Эту тест-систему не следует использовать при обследовании пациентов, у которых ожидается более высокая вирусная нагрузка (J Clin Microbiol 2000; 38:2837). У метода NucliSens более широкий динамический диапазон (176–3 500 000 копий/мл), и его можно использовать для измерения количества вируса как в крови, так и в других биологических жидкостях и тканях, например, в семенной жидкости, спинномозговой жидкости, грудном молоке, слюне и вагинальных выделениях (J Clin Microbiol 2000; 38:1414).

Таблица 2.5. Сравнительная характеристика лицензированных FDA тест-систем, основанных на разных методах измерения вирусной нагрузки

  Roche Bayer bioMerieux
Контактный телефон 800-526-1247 800-434-2447 800-682-2666
Торговое название Amplicor HIV Monitor 1.5 Versant HIV-1 RNA 3.0 NucliSens HIV-1 QT
Техника ОТ-ПЦР рДНК NASBA
Сравнение результатов Результаты, получаемые методом ОТ-ПЦР, сопоставимы с результатами, получаемыми методом рДНК (Versant) с использованием тест-систем 2.0 и 3.0 Результаты, получаемые методом рДНК, сопоставимы с результатами, получаемыми методом ОТ-ПЦР (Amplicor) Результаты, по-видимому, сопоставимы с результатами, получаемыми методами ОТ-ПЦР и рДНК, но пока не получено достаточно данных
Преимущества и недостатки Меньше ложноположительных результатов у ВИЧ-отрицательных пациентов по сравнению с методом рДНК Выполнение исследования занимает меньше времени у лаборанта. Хороший динамический диапазон, но выше порог определения вирусной нагрузки Может применяться для обнаружения вируса в тканях и биологических жидкостях, например, выделениях половых путей. Самый большой динамический диапазон.
Динамический диапазон Стандартный (Amplicor 1.5): 400–750 000 копий/мл
Суперчувствительный (Ultra-Direct 1.5): 50–100 000 копий/мл
рДНК 3.0: 75–500 000 копий/мл* NucliSens HIV-1 QT: 176–3 500 000 копий/мл; динамический диапазон зависит от объема
Подтип вируса Тест-система 1.5: от A до G от A до G от A до G
Необходимый объем материала для исследования Amplicor: 0,2 мл Суперчувствительный: 0,5 мл 1 мл От 10 мкл до 2 мл
Пробирки ЭДТА (пробирка с сиреневой крышкой) ЭДТА (пробирка с сиреневой крышкой) ЭДТА, гепарин, цельная кровь, любая биологическая жидкость, МКПК, семенная жидкость, ткани и т. д.
Требования Отделить плазму не позже чем через 6 часов после забора крови, перед транспортировкой заморозить при температуре –20°С или –70°С. Отделить плазму не позже чем через 4 часа после забора крови, перед транспортировкой заморозить при температуре –20°С или –70°С. Отделить сыворотку или плазму не позже чем через 4 часа после забора крови, перед транспортировкой заморозить при температуре –20°С или –70°С.

* Нижнее пороговое значение вирусной нагрузки, установленное FDA, составляет 75 копий/мл. За пределами США нижнее пороговое значение вирусной нагрузки составляет 50 копий/мл.

Источник: www.eurasiahealth.org

Источник: acet-russia.ru

Вирус иммунодефицита человека. Чума 20-го века.

По статистике, предоставленной Всемирной организацией здоровья совместно с организацией ООН ЮНЭЙДС, за последние сорок лет более 25 миллионов пациентов скончались от заболеваний ВИЧ и СПИД. Не зря эпидемиологи окрестили ВИЧ чумой 20-го века, так как урон, нанесенный этой инфекцией человечеству, имеет колоссальные масштабы. Наиболее сильно заражению подверглись страны африканского континента. Заражение сильно бьет по экономике и без того нестабильных государств, народ нищенствует.

resim-254

При появившейся симптоматике чрезвычайно важна оперативная диагностика заражения организма ВИЧ-инфекцией, потому как вовремя пройденный курс терапии способен спасти или хотя бы увеличить срок жизни пациента. В нынешнее время технологический прогресс шагнул далеко: изобретены новейшие способы диагностики вируса ВИЧ и СПИДа, лечение доступно для любого человека планеты, достоверность анализов характеризуется малой долей погрешности, а терапия большим процентов эффективности.

Диагностика инфекции ВИЧ

resim-255

В нашей стране выявление присутствия в организме пациента ВИЧ-инфекции представляет собой комплекс анализов:

  • Иммуноферментный анализ
  • Иммунный блоттинг
  • Полимеразная цепная реакция
  • Экспресс-тесты

Иммунофермнтный анализ.

Скрининг (тест ИФА) является первоначальной стадией определения заражения в организме. Он базируется на образованных в искусственных условиях белковых соединениях вируса, которые идентифицируют продуцируещиея иммунными клетками антитела как реакцию на заражение. Происходит химическая реакция между реактивами, вследствие чего индикаторный элемент меняет цвет. Значит, результат теста положительный. Информацию по такому способу можно получить через пару недель с момента инфицирования. Таковой способ выявляет не присутствие инфекции у пациента, а определяет вырабатывающиеся к этой инфекции антитела. Бывает, продуцирование антител стартует через 10-15 дней с момента инфицирования, но в подавляющем большинстве случаев позднее – через 1-1,5 месяца.

Информация по такому анализу обрабатывается от двух до десяти дней.

Достоверность диангоза на ВИЧ подкрепляется анализом ИБ. Исключительно положительный тест ИБ на вирус может служить веской причиной для утверждения инфицирования.

Суть анализа:

В лаборатории берут пробу венозной крови на анализ. Пробу дополнительно подготавливают, белковые соединения, которые в ней присутствуют, электризуются в испытательной камере, далее их распределяют в гелевой субстанции соответственно молекулярной массе. Бумажную полосу с напылением реактива несколько раз помещают в подготовленную пробу. При наличии в пробе антител к вирусу происходит химическая реакция и на тестовой полосе становятся видны черточки. Когда появляются 2 или 3 черточки p24, gp41, и gp120 или gp160, результат теста положительный.

При получении положительного результата по анализу ИБ с погрешностью в один процент можно сделать заключение о наличии инфекции ВИЧ в организме.

Экспресс-тесты на ВИЧ и СПИД

Новейшими технологиями для определения вируса иммунодефицита в организме являются экспресс-методы. Информацию по такому анализу можно получить через несколько минут после проведения. Наиболее высокая достоверность у иммунохромаграфических тестов – специальных тест-полос, на поверхности которых напыляется слой реагента. Антитела, содержащиеся в испытуемом материале, контактирует с реагентом, изменяя окраску индикатора. Через несколько минут проявляются две полоски, что указывает на наличие инфекции. Наличие единственной полосы означает отсутствие инфекции.

Такой тест можно использовать как дополнительный, информация по такому тесту обязательно подтверждается другими исследованиями.

Сколько стоит экспресс-тест на ВИЧ?

Экспресс-тест на ВИЧ в среднем обойдется в 200-1000 рублей.

Полимеразная цепная реакция

ПЦР – анализ крови, позволяющий с малым процентом погрешности определить присутствие заражения инфекцией в организме. Практическая суть данного способа тестирования в анализе молекул дезоксирибонуклеиновой и рибонуклеиновой кислоты.

Нередко встречается, что разные инфекции с разной этиологией протекают со схожей симптоматикой. Анализ ПЦР диагностирует инфекцию, причину ее образования, классифицирует степень заражения пациента и количественный состав вредоносных микроорганизмов. С помощью ПЦР специалист способен выявить даже крошечную толику молекул вируса, содержащуюся в организме, а при идеальных условиях одинарные злокачественные бактерии и штаммы вируса. Такая информативность обеспечивает специалисту возможность правильного выбора курса терапии.

Подробно о сути анализа

Анализ основывается га многочисленном повторении отдельно выбранного отрезка цепи ДНК с добавлением ферментов в лабораторной среде. В ходе процесса копируется тот отрезок, который подходит по нужным параметрам и обязательно, чтобы этот отрезок был частью испытуемой пробы. Маленькие отрезки ДНК копируются в специально созданной среде с добавлением химических веществ, ускоряющих процесс.

Компоненты реакции

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

  • Матрица дезоксирибонуклеиновой кислоты с присутствием отрезка ДНК, готовящегося к амплификации
  • Пара праймеров – по одному для каждого из отрезков цепи
  • Специальное химически активное вещество полимераза, которое ускоряет процесс полимеризации ДНК.
  • Дезоксирибонуклеозидтрифосфаты
  • Заряженные частицы магния двухвалентного
  • Буферный раствор, который создает нужные условия для протекания процесса, а именно кислотность, концентрацию соли и заряженных частиц магния в растворе.

Обычно для защиты образца от перегрева в пробу с реагентами помещают вазелин, так как этот продукт содержит жиры и имеет высокую температуру кипения.

Анализ ПЦР диагностирует РНК инфекции. Характерная особенность такого анализа – большая достоверность, он помогает выявить заражение вирусом ВИЧ через полторы недели с момента инфицирования. Иногда бывает, что анализ дал ложные сведения, потому как его сильная чувствительность вызывает реакцию на антитела к другим вирусам в организме.

Сколько стоит сдать ПЦР-исследование?

Такой способ диагностики не дешевый. Он предполагает наличие новейшей медицинской аппаратуры и определенных знаний в этой области. Поэтому ПЦР-диагностика не используется для групповых анализов.

Анализ на ПЦР можно сдать в специализированных клиниках нашей страны в среднем за 3500 рублей.

ПЦР-диагностика. Причины для проведения

ПЦР назначают для:

  • Диагностики ВИЧ у ребенка, если мать была подвержена заражению инфекцией – вирус мог передаться через плаценту внутриутробно.
  • Определения вируса, когда иммуноферментный анализ дал размытые сведения
  • Отслеживания количественного уровня вируса в организме
  • Тестирования доноров

Результат анализа ПЦР не является достаточным основанием для постановки диагноза. Для этого нужно комплексное обследование наряду с прохождением других тестов. ПЦР скорее используется как вспомогательный метод, позволяющий разобраться в сложных случаях.

Сколько стоит сдать анализ на ВИЧ?

Помощь по диагностике вируса иммунодефицита можно получить абсолютно бесплатно в государственных медучреждениях. В частных клиниках диагностика ВИЧ обойдется от 3 до 5 тысяч рублей.

Источник: testanaliz.ru


You May Also Like

About the Author: admind

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте, как обрабатываются ваши данные комментариев.