Скрининг вич


Все инфекционные заболевания нуждаются в своевременной точной диагностике. ВИЧ и СПИД — не исключение. Поставленный вовремя диагноз позволяет принять необходимые терапевтические меры и продлить пациенту жизнь. Как же определить наличие или отсутствие заболевания с максимальной точностью?

Диагностика ВИЧ-инфекции и СПИДа

Сегодня, наверное, каждый человек слышал о ВИЧ и СПИДе и знает, что эти заболевания очень опасны, что передаются они в основном во время незащищенного барьерным способом полового акта. А между тем, первые случаи инфицирования были зафиксированы не так давно — в 1978 году (у нескольких мужчин-гомосексуалов из США и Швеции). Сам вирус был открыт в 1983 году.

Вирус иммунодефицита человека, как и любой другой вирус, самостоятельно размножаться не может, для этого ему необходима живая клетка, в которую он «встраивает» свою генетическую информацию. После того как это происходит, зараженный человек становится носителем вируса, но долгое время никаких признаков инфицирования может не обнаруживаться.


В первую очередь ВИЧ атакует и разрушает лимфоциты (Т-лимфоциты, или хелперы). Они отвечают за иммунный ответ организма, распознавание и уничтожение инфицированных клеток. В результате заболевший теряет способность противостоять инфекциям.

У здорового человека количество Т-лейкоцитов составляет 1200–3000 клеток/мкл. После ВИЧ-инфицирования число клеток снижается. При этом заболевший продолжает чувствовать себя нормально. Данный период болезни может длиться на протяжении многих лет. Но наступает момент, кода количество клеток-хелперов достигает критической отметки. Это может проявиться следующими проблемами:

  • кандидоз полости рта и ЖКТ;
  • опоясывающий лишай (герпес);
  • неделями не спадающая высокая температура;
  • ночная потливость;
  • диарея;
  • частые ОРЗ и ОРВИ и др.

Если число Т-лимфоцитов снижается до 200 клеток/мкл, то диагностируют СПИД. Организм больного в таком состоянии не может сопротивляться даже простейшим микроорганизмам — от дрожжей до вирусов. У здорового человека к ним развивается резистентность, тогда как страдающего СПИДом они могут довести до летального исхода. Чаще всего возбудителями смертельных заболеваний становятся токсоплазма, криптоспоридии, цитомегаловирус. Кроме того, снижение лимфоцитов провоцирует образование злокачественных опухолей.


При отсутствии должного лечения пациенты с ВИЧ-инфекцией не переступают порог выживаемости в 10 лет. Грамотно и своевременно назначенная терапия затормаживает развитие болезни, в разы увеличивая продолжительности жизни больного. ВИЧ-положительный человек в таком случае может дожить до преклонных лет.

Основной метод диагностики инфекции — анализ крови. С момента заражения до появления антител в крови проходит 1–3 месяца.

Методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции

Разные виды лабораторных анализов венозной крови, взятой натощак, позволяют обнаружить наличие или отсутствие ВИЧ-инфекции в крови. Рассмотрим виды этих исследований.

Качественный анализ

  • Скрининговое исследование иммуноферментными (ИФА) методами представляет собой выявление антител к антигенам ВИЧ-типов: ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Уже со второй недели после инфицирования могут появиться антитела, хотя они способны обнаружиться и позже — через несколько месяцев. В последующее время количество антител растет и сохраняется в крови пациента. При наличии антител в большинстве случаев клинические признаки ВИЧ не проявляются 2–10 лет.
    Отметим, что данный тест не всегда точен, возможен ложноположительный результат. В любом случае при положительном результате назначается повторный анализ через 2-3 недели.
  • Верификационное исследование методом иммуноблота проводится, если описанный выше анализ дважды дал положительный результат. Данное исследование сочетает анализ ИФА и метод электрофореза, который позволяет разделить по молекулярному весу входящие в состав вируса антигены. Данное исследование имеет максимальную точность.

Количественный анализ

  • Полимеразная цепная реакция (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени дает возможность определить концентрацию вирусной РНК в плазме крови. Тест проводят в целях ранней диагностики возможного инфицирования после случая повышенного риска (на 7–10 день после предположительного инфицирования).
    Также данный анализ назначается для оценки эффективности применяемой терапии, для решения вопроса о начале антиретровирусной терапии, о проведении кесарева сечения у инфицированных беременных за 4 недели до родов.
    Такое исследование крови проводят новорожденным детям инфицированных матерей. Полученный дважды положительный ответ говорит о заражении ребенка.

Показания к назначению

Поводом пройти исследование на ВИЧ-инфекцию может стать множество причин. Тест необходим перед оперативным вмешательством, в случае планирования беременности, риск приобретения данной инфекции несут случайные половые контакты. Отдельная категория граждан (врачи, педагоги, работники пищевых производств, продавцы пищевой продукции и др.) обязана проходить тест в рамках оформления медицинской книжки, являющейся обязательным условием допуска к работе.

Что касается тревожных симптомов, то обычно врачи назначают анализ на ВИЧ при следующих состояниях:


  • Резкая потеря веса.
  • Диарея, длящаяся более трех недель.
  • Лихорадка неясного происхождения.
  • Увеличение лимфатических узлов в разных областях.
  • Лейкопения и лимфопения.
  • Тяжелые инфекционные заболевания: пневмония, кандидоз внутренних органов, туберкулез, манифестный токсоплазмоз, частые случаи обострения герпесвирусной инфекции и другие.

Специальной подготовки перед сдачей венозной крови не требуется. Единственное — это воздержание от приема пищи в течение 8–10 часов. Также накануне рекомендуется избегать физических и эмоциональных нагрузок, отказаться от употребления алкоголя.

Проведение анализа на ВИЧ

Вся процедура забора венозной крови занимает не более пяти минут. После взятия материала место укола дезинфицируют и заклеивают специальным пластырем. Так как анализ берется натощак, во избежание головокружения после забора крови следует выпить сладкий чай или съесть кусочек шоколада.

В государственных поликлиниках, чтобы получить направление на анализ, придется сначала посетить участкового терапевта. В частных же медицинских центрах нужно просто заполнить заявку на анализ. Для этого в клинике попросят предъявить паспорт или какой-либо другой документ, удостоверяющий личность (миграционная карта, водительские права, военный билет и т. д.). Документ позволит идентифицировать результаты анализа. Впрочем, тест на ВИЧ можно сделать и анонимно. В этом случае заявке и образцу крови, который отправляется на анализ в лабораторию, присваивается номер, известный лишь пациенту и медицинскому персоналу. Однако результаты анонимных исследований не могут быть представлены для госпитализации, в женские консультации и не могут быть зарегистрированы в ОРУИБ (Отдел регистрации и учета инфекционных болезней).


Расшифровка результатов исследования

Следует помнить, что интерпретировать результаты исследования и поставить точный диагноз способен только врач. Полученный результат ни в коем случае не может быть поводом для самолечения, к тому же одни и те же результаты у разных пациентов могут говорить о противоположной клинической картине.

Качественный анализ на ВИЧ

  • Скрининговый — если антител в крови нет, то в ответе пишут: «Отрицательно». Если же антитела к ВИЧ обнаружены, проводится повторное исследование. В случае если и оно дало положительный результат, пробу исследуют методом иммуноблота.
  • Верификационный — если на тест-полоске обнаружены потемнения в местах локализации белков gp160, gp120, gp41, то ставят диагноз «ВИЧ». Другим вирусам соответствует свой набор белков.
    При этом важно учитывать, что метод иммуноблота позволяет точно установить наличие вируса лишь тогда, когда набор антител в крови является полным, а именно, если одновременно обнаружены белки: gp160, gp120, gp41 — то это однозначно трактуется как ВИЧ-инфекция. Но если хотя бы одного из перечисленных белков нет, например, отсутствует gp41, но есть gp160, gp120, то тест расценивается как сомнительный и требует повторного проведения.

Количественный анализ на ВИЧ

Показывает объем выявленной РНК вируса иммунодефицита человека, выраженный в C/ml (копии/мл). Интерпретировать результаты следует следующим образом:

  1. РНК не выявлена, либо значение ниже предела чувствительности метода (20 копий/мл).
  2. Меньше 20 копий/мл — РНК выявлена в концентрации на пределе чувствительности метода, характеристика с удовлетворительной точностью невозможна.
  3. От 20 до 10 6 копий/мл — полученное значение находится в пределах линейного диапазона, результат достоверен.
  4. Больше 10 6 копий/мл — РНК выявлена в указанной концентрации, выходящей за верхний предел линейного диапазона.

Сроки и стоимость анализа

Анализы на ВИЧ можно сдать в частных клиниках. В этом случае стоимость скринингового исследования иммуноферментными методами в среднем составит от 400 до 800 рублей. Срок выполнения исследования — один рабочий день, хотя возможна и срочная диагностика, в таком случае ответ будет получен через 2 часа.

Верификационное исследование методом иммуноблота обойдется в 3000–5000 рублей. Результаты станут известны через 3–7 рабочих дней.


Полимеразная цепная реакция с детекцией в режиме реального времени представляет собой более сложный анализ, поэтому его стоимость намного выше — она составляет 10 000–12 000 рублей. Результаты исследования готовятся в среднем 10–14 рабочих дней.

Согласно законодательству все иммунные анализы в государственных медицинских учреждениях проводятся бесплатно. В обязательном порядке проверку на ВИЧ-инфекцию проходят беременные женщины, пациенты, готовящиеся к оперативному вмешательству и госпитализации. В остальных случаях направление на данное исследование назначается по усмотрению врача.

Пройти анализ на ВИЧ-инфекцию сегодня не составляет сложности. Сама процедура практически безболезненна и занимает считанные минуты. Современное оборудование и методики проведения теста позволяют получить максимально точные результаты.

Скрининг вич

Источник: www.kp.ru

Что такое анализ на антитела к ВИЧ 1/2 (скрининг)

Скрининговый анализ на антитела к ВИЧ 1,2 – система тестов, которые позволяют выявить лиц, инфицированных вирусом иммунодефицита. Помимо этих, существуют и так называемые подтверждающие (вспомогательные)тесты, задача которых заключается в том, чтобы выявить лиц не инфицированных вирусом, но с положительной реакцией на вирус при скрининге.


Суть скринингового исследования ВИЧ-инфекции заключается в определении антител к вирусу иммунодефицита. Его отличительная особенность в повышенной чувствительности – более, чем 99,5%. Специфика тестирования состоит в том, что скрининг может дать ложноположительный результат, если в организме пациента содержатся аутоантитела.

Идентичный результат может быть выявлен и в случае болезни печени у пациента, противогриппозной вакцинации или же наличия какого-либо острого вирусного заболевания. Исходя из этого, для получения точных результатов, наряду со скринингом, обычно принято делать и упомянутый выше, подтверждающий тест.

Показания для анализа

В медицинской практике существует достаточно обширный спектр показаний для прохождения скринингового обследования. Пациент может обратиться в лабораторию в случае:

  • возникновения подозрения на инфицирование (если имелся близкий контакт с носителем ВИЧ-инфекции);
  • при потерях веса, лихорадке;
  • пневмонии, которая не поддается обычной терапии;
  • заболеваниях хронического характера, возникших по непонятным причинам;
  • в процессе подготовки к хирургической операции;
  • переливания крови;
  • планировании беременности и семьи;
  • При воспаленных лимфоузлах;
  • Случайных половых связях.

Лица, попадающие в особую группу риска: наркоманы и люди, ведущие беспорядочную половую жизнь.

Как проводится скрининг на на антитела к ВИЧ 1/2

Проведение процедуры подразумевает соблюдение ряда необходимых правил:


  • пациент должен сдавать кровь исключительно натощак (пить воду разрешено);
  • с момента последнего приема пищи должно пройти не менее восьми часов;
  • врач должен быть уведомлен о том, какие лекарства принимает пациент и знать дозировку (если нет возможности даже кратковременной их отмены);
  • если пациент в состоянии повременить с применением лекарственных средств, ему рекомендовано это сделать за 10-15 дней до дня манипуляции;
  • за день до начала тестирования пациенту желательно отказаться от приема жареных или жирных продуктов, также ему запрещено употреблять алкогольные напитки, курить, ограничить тяжелые физические нагрузки.

Необходимо отметить, что лабораторные исследования на наличие инфекции у детей, которые были рождены от матерей-носителей вируса иммунодефицита, имеют свою специфику.

Поскольку в первые месяцы жизни ребенка, в его крови могут присутствовать материнские антитела к ВИЧ, то по результатам анализа невозможно получить объективную картину о состоянии здоровья новорожденного и даже отрицательный результат отнюдь не означает, что вирус не смог проникнуть через плацентарный барьер. Для получения точных данных тестирования следует проводить в период 36 месяцев после рождения ребенка.

Источник: medextour.com


Порядок назначения обязательного медицинского обследования на ВИЧ-инфекцию определяется Кодексом о здоровье народа и системе здравоохранения от 18.09.09г. № 193-IV PK, который является основополагающим документом, регламентирующим вопросы диагностики, профилактики и обследования на ВИЧ (статьи 112,114,115), Правилами обследования по клиническим и эпидемиологическим показаниям, Клиническими протоколами и иными нормативными правовыми актами, определяющими порядок проведения обязательных медицинских осмотров.

Направление для тестирования на ВИЧ осуществляется специалистами ПМСП, МО общего профиля, специализированными службами по клиническим и эпидемиологическим показаниям.

Госпитальному эпидемиологу в своей практике нужно знать эпидемиологические, лабораторные и клинические критерии при ВИЧ-инфекции.

 

Эпидемиологические Лабораторные* Клинические
принадлежность пациента к группе высокого риска заражения ВИЧ;   положительный результат исследования первой сыворотки крови в скрининговом и подтверждающем тесте на антитела к ВИЧ (ИФА); диагнозы и симптомы, чаще всего встречающиеся при ВИЧ инфицировании, так называемые оппортунистические инфекции
половой контакт с представителями ЛЖВ и групп высокого риска заражения ВИЧ;   последующее подтверждение второй (комиссионно забранной) сыворотки крови в экспертных тест-системах (ИФА); СПИД ассоциируемые инфекции и инфекции, относящиеся к поведенческим инфекциям в плане заражения ВИЧ/СПИД (парентеральные гепатиты)
ребенок, рожденный от ВИЧ-инфицированной матери;   последующее подтверждение второй (комиссионно забранной) сыворотки крови в экспертных тест-системах (ИФА); наличие лихорадки, сопровождающейся увеличением лимфоузлов, болями в горле, сыпью, головной болью, диареей или сочетания некоторых перечисленных симптомов–острая ВИЧ-инфекция
переливание донорской крови или трансплантация органов, тканей, клеток;   дальнейшее подтверждение второй (третьей) сыворотки в иммунноблоте (далее — ИБ). Интерпретация ИБ проводится согласно прилагаемой инструкции к тесту завода производителя.  
пребывание в учреждениях пенитенциарной системы;   выявление РНК – вируса в крови заболевшего методом ПЦР.    

* В экстренных случаях и для тестирования уязвимых групп населения используются экспресс тесты на выявление ВИЧ-инфекции. В случае получения положительного результата на ВИЧ-инфекцию в экспресс-тесте, проводятся дальнейшие исследования в ИФА для подтверждения/исключения ВИЧ-инфекции. Исследуемым материалом при экспресс- диагностике ВИЧ-инфекции являются кровь, сыворотка крови или слюна.



Основными целями обследования на ВИЧ-инфекцию являются:

— установление диагноза, обеспечение безопасности гемотрансфузий, трансплантаций и клеточных технологий;

— профилактика вертикального и других возможных путей передачи;

— проведение эпидемиологического мониторинга.

В соответствие с действующими Правилами обследованию лиц по эпидемиологическим показаниям на наличие ВИЧ-инфекции подлежат:

1) половые партнеры ВИЧ-инфицированных и больных СПИДом; 2) партнеры по совместному употреблению инъекционных наркотиков; 3) уязвимые группы населения (далее — УГН) — лица, употребляющие инъекционные наркотики, в том числе при постановке на учет в наркологической службе и через каждые 6 месяцев (ЛУИН); — мужчины, имеющие секс с мужчинами (МСМ); — секс-работники (СР); 4) лица, находящиеся под арестом и осужденные обследуются на ВИЧ-инфекцию при поступлении в следственные изоляторы, исправительные учреждения, через 6 месяцев после поступления, перед освобождением и по желанию в период пребывания в учреждении; 5)лица, имеющие беспорядочные половые связи; 6) дети, родившиеся от ВИЧ-инфицированных матерей; 7) лица, пострадавшие в результате аварийной ситуации при исполнении служебных обязанностей (при медицинских манипуляциях) и лица, подвергшиеся риску инфицирования (при половом контакте и других обстоятельствах) проходят медицинское обследование на наличие ВИЧ-инфекции в момент обращения и дальнейшее обследование через 1 и 3 месяца; 8) медицинский персонал, имеющий контакт с кровью, другими биологическими жидкостями, биоматериалами, обследуются при поступлении на работу и далее 1 раз в год; 9) лица, призываемые на воинскую службу, поступающие на службу по контракту; 10) беременные женщины: — при постановке на учет и в сроке 28 — 30 недель (2-х кратное обследование); — перед прерыванием беременности; — поступившие в родовспомогательные учреждения без результатов2-хкратного обследования на ВИЧ-инфекцию или обследованные однократно – более 3 недель до поступления на роды; 11)спецконтингент при поступлении в ИВС (изолятор временного содержания), приемник-распределитель, спецприемникдляадминистративно-арестованных, центры социальной адаптации и реабилитационные центры.

Обследованию по клиническим и эпидемиологическим показаниям на наличие ВИЧ-инфекции экспресс – тестом, зарегистрированным в РК, с последующим обследованием в твердофазном иммуноферментном анализе (далее – ИФА), подлежат:

1) беременные женщины: — поступившие на роды с неизвестным ВИЧ-статусом; — обследованные на ВИЧ-инфекцию однократно более 3 недель до поступления на роды; — поступившие на роды без обменной карты; 2) пострадавшие в аварийных ситуациях (для определения ВИЧ статуса и предполагаемого источника инфекции, оценки степени риска и назначения постконтактной антиретровирусной профилактики); 3) уязвимые группы населения (лица, употребляющие инъекционные наркотики, секс-работники, мужчины, имеющие секс с мужчинами) при наличии положительного результата экспресс-теста.

Выдача заключения о наличии или отсутствии ВИЧ-инфекции только по результатам простого/быстрого теста не допускается. Результаты простых/быстрых тестов используются только для своевременного принятия решений в экстренных ситуациях.

 

Обследованию по клиническимпоказаниямна наличие ВИЧ-инфекции подлежат лица (взрослые и дети), у которых выявлены следующие заболевания, синдромы и симптомы:

Источник: studopedia.su

Решающее значение в постановке диагноза ВИЧ-инфекции играет лабораторная диагностика, которая заключается в обнаружении АТ к ВИЧ в крови методом ИФА с последующим подтверждением положительных результатов методом ИБ. Такой метод диагностики ВИЧ-инфекции позволяет выявлять ВИЧ-инфицированных лиц с эффективностью 99%.

Показания к применению различных лабораторных исследований и особенности интерпретации результатов

В настоящее время для скринингового этапа диагностики ВИЧ-инфекции используются наборы реагентов третьего и четвертого поколений, основанные на методе ИФА. Отличительной особенностью тестов четвертого поколения является возможность одновременного выявления АГ (p24) и суммарных АТ, в то время как тесты третьего поколения позволяют определять только АТ. По возможности, предпочтение должно отдаваться тестам четвертого поколения, ввиду их более высокой диагностической чувствительности и возможности выявления инфекции у лиц в период серологического окна.

Отрицательный результат при выявлении АТ к ВИЧ методом ИФА не всегда свидетельствует об отсутствии заражения. Серьезную проблему представляют те случаи, когда тест проведен в период серологического окна, т.е. в первые недели после заражения, когда еще не выработались в достаточном количестве АТ к ВИЧ. У отдельных лиц период серологического окна может затянуться на несколько месяцев, поэтому при наличии данных, свидетельствующих о контакте с инфицированными ВИЧ, обычно проводят повторные исследования через 2–3 месяца. Ложноотрицательные результаты выявления АТ к ВИЧ при использовании ИФА могут быть получены в терминальной стадии болезни, характеризующейся тяжелым поражением иммунной системы с глубоким нарушением процесса образования АТ.

Положительный результат выявления АТ методом ИФА указывает на вероятность заражения ВИЧ-инфекцией, но иногда этот результат может быть ложноположительным, например, при наличии у человека опухолей, аллергических заболеваний, во время беременности, при аутоиммунных заболеваниях, существенных изменениях показателей биохимического исследования крови, ряде хронических заболеваний. В таких случаях требуются дополнительные исследования в экспертной лаборатории.

В случае получения положительного результата выявления АТ к ВИЧ методом ИФА требуется его подтверждение. На первом этапе подтверждения анализ повторяют в той же тест-системе в двух лунках — это позволяет исключить технические ошибки. Если результат подтвердился, определение АТ методом ИФА в сыворотке пациента повторяют, используя два референтных набора реагентов. Если хотя бы в одном из таких исследований получен положительный результат, предпринимают третью стадию подтверждения: исследование методом ИБ, который позволяет выявить АТ к отдельным белкам-антигенам ВИЧ.

Результаты, полученные методом ИБ, интерпретируются как положительные, сомнительные и отрицательные. Отрицательными (негативными) считают результаты, если в исследуемой сыворотке не обнаружены АТ ни к одному из АГ ВИЧ или имеется слабая реакция с белком р17. Наиболее веским основанием для положительной реакции является обнаружение АТ к белкам оболочки ВИЧ (гликопротеидам gp41, gp120, gp160). Результат считается положительным в случае обнаружения АТ к каким-либо двум гликопротеидам ВИЧ. При наличии реакции только с одним из белков оболочки, в сочетании с реакцией с другими белками или без нее, результат считается сомнительным, в этом случае рекомендуется провести исследования для обнаружения АГ р24 или ДНК/РНК ВИЧ. Если выявлен АГ р24 или ДНК/РНК ВИЧ, повторное обследование с использованием ИБ проводится через 2 недели после получения первого неопределенного результата и в дальнейшем через каждые 2 недели до получения положительного результата в подтверждающем тесте. Если через 6 месяцев после первого обследования вновь будут получены неопределенные результаты, а у пациента не будут выявлены факторы риска заражения и клинические симптомы ВИЧ-инфекции, результат расценивается как ложноположительный.

Нередко по прошествии 1–3–6 месяцев с момента получения сомнительного результата в сыворотке крови появляются одно за другим АТ ко всем АГ ВИЧ. В этом случае сомнительный результат – свидетельство начальной стадии ВИЧ-инфекции. В ряде случаев сомнительные результаты ИБ наблюдаются у неинфицированных лиц, в организме которых есть АТ, схожие с истинными АТ к ВИЧ.

Одним из косвенных признаков ВИЧ-инфекции является избирательное уменьшение CD4+ Т-клеток хелперов в связи с тем, что ВИЧ обладает тропностью к клеточному рецептору CD4. Однако эти изменения могут отсутствовать на определенных стадиях ВИЧ-инфекции, иметь индивидуальные колебания у разных пациентов, а также встречаться при других заболеваниях. Так, у взрослых пациентов, находящихся в латентной стадии заболевания, количество CD4+ лимфоцитов обычно превышает 0,5 . 109/л, что соответствует значениям у здоровых людей.

Источник: www.cmd-online.ru

Тесты на антитела к ВИЧ можно подразделить на скрининговые и подтверждающие, или вспомогательные.

Первые предназначены для выявления всех лиц, инфицированных ВИЧ, вторые- для выявления лиц, не инфицированных ВИЧ, но давших положительную реакцию при скрининговом тестировании. Поэтому скрининговые тесты обладают высокой чувствительностью, т. е. почти не дают ложноотрицательных результатов, а подтверждающие тесты обладают высокой специфичностью, т. е. почти не дают ложноположительных результатов. В сочетании эти тесты дают точные и надежные результаты, которые позволяют обнаружить зараженные препараты крови и поставить диагноз ВИЧ-инфекции. Однако существуют биологические факторы, снижающие точность этих тестов; возможны и лабораторные ошибки. Поэтому в каждой лаборатории, проводящей тесты на антитела к ВИЧ, должна быть разработана безупречная программа контроля качества этих тестов. Не надо забывать и о том, что надежность лабораторных исследований никогда не бывает стопроцентной и что их результаты всегда должны расцениваться как дополнение к клиническому диагнозу.

Период окна и выявление ВИЧ-инфекции на ранних сроках заражения:

Антитела к ВИЧ начинают вырабатываться вскоре после заражения, но время их появления зависит от многих факторов, в частности, от состояния иммунной системы пациента и свойств вируса. Важно отметить, что антитела могут присутствовать в крови уже на ранних сроках после заражения, но концентрация их бывает ниже предела чувствительности некоторых методов (период окна). Первые тест-системы выявляли антитела почти у всех ВИЧ-инфицированных через 6–12 недель после заражения. Новейшие тест-системы, в том числе ловушечный ИФА третьего поколения, обнаруживают антитела спустя 3–4 недели после заражения. Срок между заражением и диагнозом ВИЧ-инфекции можно сократить на несколько дней, применяя методы выявления антигенов ВИЧ, и еще на несколько дней, применяя методы выявления РНК ВИЧ. Если использовать все описанные методы, диагноз ВИЧ-инфекции у большинства больных можно установить уже через 2–3 недели после заражения. Имеющиеся в продаже тест-системы для скрининга на антитела к ВИЧ обладают очень высокой и примерно одинаковой чувствительностью, достаточной для выявления большинства ВИЧ-инфицированных (так называемой эпидемиологической чувствительностью). Однако разные тест-системы различаются по аналитической чувствительности, т. е. по способности выявлять низкие уровни антител, которые имеют место до завершения сероконверсии.

Есть тест-системы, предназначенные для выявления IgM-антител к ВИЧ, однако они не нашли широкого применения в ранней диагностике ВИЧ-инфекции, поскольку IgM-антитела не всегда вырабатываются на ранних сроках после заражения. Некоторые тест-системы третьего поколения одновременно выявляют IgM- и IgG-антитела к ВИЧ и обладают более высокой аналитической чувствительностью.

Смотрите также:Раскрытие ВИЧ-статуса без сожалений, Искривление перегородки носа, Аневризма сосудов: скрытая угроза здоровью, Пренатальный скрининг; хромосомные аномалии, Скрытое косоглазие (Strabismus latenta, Heterophoria), Скрытый риск: женщины и заболевания сердца, Скрытый сифилис (Syphilis latens), Протокол полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени (ОТ-ПЦР РВ, Realtime RT-PCR) CDC для выявления и исследования вируса гриппа А(H1N1), Скрежетание зубами (бруксизм), Осторожно: скрытые аллергены

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции

… диагностика любого инфекционного заболевания основана на сопоставлении эпидемиологических, клинических и лабораторных данных, и преувеличение значения одной из групп этих данных может привести к диагностическим ошибкам.

Клинические показания для обследования пациента на ВИЧ-инфекцию:
•лихорадка более 1 месяца;
•диарея более 1 месяца;
•необъяснимая потеря массы тела на 10% и более;
•затяжные, рецидивирующие или не поддающиеся стандартной терапии пневмонии;
•постоянный кашель более 1 месяца;
•затяжные рецидивирующие вирусные, бактериальные, паразитарные болезни;
•сепсис;
•увеличение лимфоузлов двух и более групп свыше 1 месяца;
•подострый энцефалит;
•слабоумие у ранее здоровых людей;
•наличие СПИД-индикаторных болезней.

Диагностика ВИЧ-инфекции включает в себя два этапа:
I этап — установление собственно факта зараженности ВИЧ-инфекцией;
II этап — определение стадии заболевания.

УСТАНОВЛЕНИЕ ФАКТА ЗАРАЖЕННОСТИ ВИЧ-ИНФЕКЦИЕЙ

Установление собственно факта зараженности ВИЧ-инфекцией (то есть выявление ВИЧ-инфицированных) в свою очередь также включает в себя два этапа:
I этап иммуноферментный анализ (ИФА): метод ИФА является скрининговым (отборочным) — отбор предположительно инфицированных лиц, то есть его целью является выявление подозрительных лиц и отсеивние здоровых лиц; антитела к ВИЧ выявляют с помощью других антител к искомым антителам (антитела против других антител).

Эти «вспомогательные» антитела метят ферментом. Все скрининговые тесты обязаны быть высокочувствительными, чтобы не пропустить больного. Из-за этого их специфичность не очень высокая, то есть ИФА может дать положительный ответ («вероятно болен») у неинфицированных людей (например, у больных аутоиммунными заболеваниями: ревматизм, системная красная волчанка и др.). Частота ложноположительных результатов при использовании различных тест-систем колеблется от 0,02 до 0,5%. Если у человека ИФА дало положительный результат, то для подтверждения факта инфицирования ВИЧ необходимо обследоваться дальше.

При проведении ИФА в 3 — 5% случаев возможны ложноотрицательные результаты — если инфицирование произошло относительно недавно и уровень антител еще очень низкий, или в терминальной стадии болезни, характеризующейся тяжелым поражением иммунной системы с глубоким нарушением процесса антителообразования. Поэтому при наличии данных, свидетельствующих о контакте с инфицированными ВИЧ обычно проводят повторные исследования через 2 — 3 месяца.
II этапиммуноблоттинг (в модификации Western Blot, вестерн-блот): является более сложным методом и служит для подтверждения факта инфицирования.

Этот метод выявляет не комплексные антитела к ВИЧ, а антитела к отдельным его структурным белкам (p24, gp120, gp41 и др.).

Результаты иммуноблоттинга считаются положительными, если выявляются антитела хотя бы к трем белкам, один из которых кодируется генами env , другой — генами gag , третий — генами pol . Если обнаруживаются антитела к одному или двум белкам, результат считается сомнительным и требует подтверждения.

В большинстве лабораторий диагноз ВИЧ-инфекции ставится, если одновременно выявляются антитела к белкам р24 , р31 , gp4l и gpl20/gp160. Суть метода: вирус разрушают на компоненты (антигены), которые состоят из ионизированных аминокислотных остатков, а потому все компоненты имеют отличающийся друг от друга заря; затем с помощью электрофореза (электрического тока) антигены распределяются на поверхности полоски — если в исследуемой сыворотке есть антитела к ВИЧ, то они будут взаимодействовать со всеми группами антигенов, а это можно выявить.

Следует помнить, что антитела к ВИЧ появляются у 90-95% инфицированных в течение 3-х месяцев после заражения, у 5-9% инфицированных антитела к ВИЧ появляются через 6 месяцев и у 0,5-1 % инфицированных антитела к ВИЧ появляются в более поздние сроки.

В стадии СПИДа количество антител может снижаться, вплоть до полного исчезновения.

В иммунологии существует такое понятие, как «серологическое окно» — период от инфицирования до появления такого количества антител, которое можно выявить.

Для ВИЧ этот период обычно продолжается от 2 до 12 недель, в редких случаях дольше. В период «серологического окна» по анализам человек здоров, но на самом деле является зараженным ВИЧ. Установлено, что ДНК ВИЧ может находиться в геноме человека не менее трех лет без признаков активности и антитела к ВИЧ (маркеры ВИЧ-инфицирования) не появляются.

В данный период («серологическое окно») выявить ВИЧ-инфицированного и даже через 1-2 недели после заражения возможно с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Это чрезвычайно чувствительный метод — теоретически можно выявить 1 ДНК на 10 мл среды. Суть метода заключается в следующем: с помощью полимеразной цепной реакции получают много копий нуклеиновой кислоты (вирус является нуклеиновой кислотой -ДНК или РНК — в белковой оболочке), которые потом выявляют с помощью меченых ферментов или изотопов, а также по характерному строению. ПЦР является дорогостоящим методом диагностики, поэтому при скрининге и в плановом порядке не используется.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТАДИИ ЗАБОЛЕВАНИЯ

В основе развития СПИДа лежит, в первую очередь, разрушение Т-лимфоцитов-хелперов, маркируемых моноклональными антителами — кластерами дифференцировки – как CD4.

В связи с этим проведение диагностики и наблюдение за прогрессированием заболевания невозможно без контроля субпопуляции Т-хелперов, который наиболее удобно осуществлять с помощью лазерного клеточного сортировщика.

При слабо выраженной ВИЧ-инфекции количество Т-лимфоцитов — чрезвычайно вариабельный показатель. В целом, снижение числа клеток CD4 (абсолютное и относительное) обнаруживается у лиц, ВИЧ-инфицирование которых произошло не менее года назад.

С другой стороны, на ранних стадиях инфекции нередко оказывается резко повышенным число Т-супрессоры (CD8) как в периферической крови, так и в увеличенных лимфоузлах.

При выраженном СПИДе абсолютное большинство больных имеет сниженное общее число Т-лимфоцитов (менее 1000 в 1 мкл крови, в том числе лимфоцитов CD4 — менее чем 22 в 1 мкл, тогда как абсолютное значение содержания CD8 остаётся в пределах нормы).

Соответственно, резко снижается соотношение CD4/ CD8. Ответ Т-лимфоцитов in vitro на стандартные антигены и митогены снижается в строгом соответствии с относительно сниженным числом CD4.

Для поздних стадии СПИДа характерны общая лимфопения, нейтропения, тромбоцитопения (соответственно, снижение числа лимфоцитов, нейтрофилов и тромбоцитов), анемия.

Эти изменения могут быть следствием центрального угнетения кроветворения за счёт поражения кроветворных органов вирусом, а также — аутоиммунного разрушения клеточных субпопуляции на периферии. Кроме того, для СПИДа характерно умеренное увеличение количества гамма-глобулинов с доминирующим увеличением содержания IgG.

Больные с выраженными симптомами СПИДа нередко имеют повышенный уровень IgA. На некоторых стадиях заболевания существенно повышается уровень таких маркёров СПИДа, как 1-микроглобулин, кислотостабильный -интерферон, 1-тимозин. То же происходит с секрецией свободного неоптерина — метаболита макрофагов.

Пока не представляется возможным оценить относительную значимость каждого из перечисленных тестов, число которых постоянно возрастает. Поэтому их следует рассматривать во взаимодействии с маркёрами ВИЧ-инфекции как иммуновирусологического, так и цитологического характера.

Для клинического анализа крови характерны лейкопения, лимфопения (соответственно, снижение числа лейкоцитов и лимфоцитов).

1 стадия — «стадия инкубации» — антитела к ВИЧ еще не выявляются; диагноз ВИЧ-инфекции на данной стадии ставится на основании эпидемиологических данных и лабораторно должен подтверждаться обнаружением в сыворотке крови пациента вируса иммунодефицита человека, его антигенов, нуклеиновых кислот ВИЧ;
2 стадия — «стадия первичных проявлений» — в данном периоде уже имеется выработка антител:;
2А стадия — «бессимптомная» — ВИЧ-инфекция проявляется только выработкой антител;
2Б стадия — «острая ВИЧ-инфекция без вторичных заболеваний» — в крови больных могут обнаруживаться широкоплазменные лимфоциты — «мононуклеары» и часто отмечается транзиторное снижение уровня СD4-лимфоцитов (острая клиническая инфекция отмечается у 50-90% инфицированных лиц в первые 3 месяца после заражения; начало периода острой инфекции, как правило, опережает сероконверсию, т.е.

появление антител к ВИЧ);
2В стадия — «острая ВИЧ-инфекция с вторичными заболеваниями» — на фоне снижения уровня СD4-лимфоцитов и развившегося вследствие этого иммунодефицита появляются вторичные заболевания различной этиологии (ангина, бактериальная и пневмоцистная пневмония, кандидозы, герпетическия инфекция и др.);
3 стадия — «латентная» — в ответ на прогрессирование иммунодефицита происходит модификация иммунного ответа в виде избыточного воспроизводства СD4-клеток с последующим постепенным снижением уровня СD4-лимфоцитов, в среднем со скоростью 0,05-0,07×109/л в год; в крови обнаруживаются антитела к ВИЧ;
4 стадия — «стадия вторичных заболеваний» — истощение лимфоцитов популяции CD4, концентрация антител к вирусу значительно снижается (в зависимости от тяжести вторичных заболеваний выделяют стадии 4А, 4Б, 4В);
5 стадия — «терминальная стадия» — типично снижение количества СD4-клеток ниже 0,05×109/л; концентрация антител к вирусу значительно снижается или антитела могут не определяться.

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции

При диагностике ВИЧ-инфекции используется 4 группы методов:

1. Определение наличия вируса, его антигенов или копий РНК в мате­риалах от больного или ВИЧ-инфицированного

Серологическая диагностика, основанная на выявлении специфических антител к поверхностным (gp 120 и gp 41) и внутренним (р 18 и р 24) белкам ВИЧ.

3. Выявление патогномоничнъгх (специфических) для ВИЧ-инфекции изменений в иммунной системе.

Лабораторная диагностика оппортунистических инфекций (СПИД-ассоциированных заболеваний).

1. Вирусологическая диагностика. Материалом для выделения ВИЧ являются Т-лимфоциты крови, лейкоциты костного мозга, лимфатические узлы, ткани мозга, слюна, сперма, спинномозговая жидкость, плазма крови.

Полу­ченным материалом заражают перевиваемую культуру Т-лимфоцитов (Н9). Индикацию ВИЧ в культуре клеток проводят по ЦПД (образование симпла-стов), а также методами иммунофлюоресценции, электронной микроскопии, по выраженной активности обратной транскриптазы.

Современные методы ис­следования позволяют обнаружить один инфицированный лимфоцит на 1000 клеток.

Выявление вирусных антигенов в инфицированных Т-лимфоцитах осу­ществляют с помощью моноклональнъгх антител

В последние годы решающее значение для определения прогноза и тя­жести ВИЧ-инфекции имеет определение количества копий РНК ВИЧ в плазме крови методом полимеразной цепной реакции (ТТЦР) — так называемая вирусная нагрузка.

Если у пациентов, не получающих терапии, вирусная нагрузка находится ниже предела определения (это менее 5000 копий РНК ВИЧ в I мл плазмы), это свидетельствует об отсутствии прогрессирования или о медленном прогресси-ровании. Степень заразности при этом минимальная. Высокая вирусная нагруз­ка (более 10000 копий РНК в 1 мл плазмы) у пациентов с числом СО4-лимфоцитов менее 300 в 1 мкл всегда свидетельствует о прогрессировании болезни.

2.

Серологическая диагностика. В настоящее время получила наиболь­шее распространение.

Материал для исследовать: 5 мл. гепаринизированной крови, которую до доставки в лабораторию можно хранить 6-8 часов в охлажденном, но не в замороженном состоянии.

С целью серологической диагностики СПИДа используют прежде всего методы иммуноферментного анализа со стандартными иммуноферментными системами (ИФА).

Это скрининговый метод. Принцип работы основан на клас­сическом принципе прямого ИФА. Иммуносорбентом являются полистироло­вые планшеты с иммобилизированным инактивированным вирусспецифиче-ским антигеном, полученным из ВИЧ, либо синтетическим путем.

Затем вносят испытуемую сыворотку в разведении. Проводят инкубацию в лунках с антиге­ном. После связывания АГ с AT следует трехкратное отмывание несвязавшихся белков, а после этого в лунки вносят коньюгат антител к иммуноглобулинам человека с ферментной меткой.

Образование специфического комплекса АГ+АТ выявляют внесением субстрата для фермента (раствор ортофенилендиамина и перекиси водорода).

В результате окраска среды меняется пропорционально ко­личеству антител. Результаты исследования учитывают на спектрофотометре.

Сыворотки крови, имеющие вирусспецифические антитела по данным ИФА, в дальнейшем необходимо исследовать методом иммунного блотинга.

Иммунный блотипг является подтверждающим тестом, так как позволяет выявить антитела к различным белкам ВИЧ.

Он основан на предварительном фракционировании по молекулярной массе (разделении) белков ВИЧ электро­форезом в полиакриламидном геле с последующим перенесением антигенов на мембрану из нитроцеллюлозы. Затем на мембрану наносится испытуемая сыво­ротка. При этом специфические антитела образуют комплекс с конкретным АГ (gp.120, gp.41, p.24, p.18). Заключительный этап исследования — выявление ан­тител к различным белкам ВИЧ.

Для этого в систему добавляют антитела про­тив белков человека, меченые ферментом или радиоизотопной меткой.

Таким образом, в сыворотке пациента выявляют (либо не выявляют) вирусспецифиче­ские антитела ко всем или большинству антигенов ВИЧ.

3. Исследования иммунного статуса. Направлены на выявление:

1) уменьшения соотношения CD4/CD8 клеток (в N 2 и >, при СПИДе — 0,5 и <);

2) снижения содержания CD4 клеток (<200 клеток/мл.);

3) наличия одного из лабораторных признаков, включающих анемию, лейкопе­нию, тромбошггопению, лимфопению;

4) повышения концентрации Ig А и Ig G в сыворотке крови;

5) снижения реакции бластгрансформации лимфоцитов на митогены;

6) отсутствие кожной реакции ГТЗ на несколько антигенов;

7) повышение уровня циркулирующих иммунных комплексов.

Предыдущая1234567891011Следующая

Дата добавления: 2015-01-19; просмотров: 414;

ПОСМОТРЕТЬ ЕЩЕ:

Антитела к ВИЧ 1/2 – составляющие плазмы крови, белковой природы, которые препятствуют размножению ВИЧ-инфекции и полностью нейтрализуют их негативное влияние.

Что такое анализ на антитела к ВИЧ 1/2 (скрининг)

Скрининговый анализ на антитела к ВИЧ 1,2 – система тестов, которые позволяют выявить лиц, инфицированных вирусом иммунодефицита. Помимо этих, существуют и так называемые подтверждающие (вспомогательные)тесты, задача которых заключается в том, чтобы выявить лиц не инфицированных вирусом, но с положительной реакцией на вирус при скрининге.

Суть скринингового исследования ВИЧ-инфекции заключается в определении антител к вирусу иммунодефицита.

Его отличительная особенность в повышенной чувствительности – более, чем 99,5%. Специфика тестирования состоит в том, что скрининг может дать ложноположительный результат, если в организме пациента содержатся аутоантитела.

Идентичный результат может быть выявлен и в случае болезни печени у пациента, противогриппозной вакцинации или же наличия какого-либо острого вирусного заболевания. Исходя из этого, для получения точных результатов, наряду со скринингом, обычно принято делать и упомянутый выше, подтверждающий тест.

Показания для анализа

В медицинской практике существует достаточно обширный спектр показаний для прохождения скринингового обследования.

Пациент может обратиться в лабораторию в случае:

  • возникновения подозрения на инфицирование (если имелся близкий контакт с носителем ВИЧ-инфекции);
  • при потерях веса, лихорадке;
  • пневмонии, которая не поддается обычной терапии;
  • заболеваниях хронического характера, возникших по непонятным причинам;
  • в процессе подготовки к хирургической операции;
  • переливания крови;
  • планировании беременности и семьи;
  • При воспаленных лимфоузлах;
  • Случайных половых связях.

Лица, попадающие в особую группу риска: наркоманы и люди, ведущие беспорядочную половую жизнь.

Как проводится скрининг на на антитела к ВИЧ 1/2

Проведение процедуры подразумевает соблюдение ряда необходимых правил:

  • пациент должен сдавать кровь исключительно натощак (пить воду разрешено);
  • с момента последнего приема пищи должно пройти не менее восьми часов;
  • врач должен быть уведомлен о том, какие лекарства принимает пациент и знать дозировку (если нет возможности даже кратковременной их отмены);
  • если пациент в состоянии повременить с применением лекарственных средств, ему рекомендовано это сделать за 10-15 дней до дня манипуляции;
  • за день до начала тестирования пациенту желательно отказаться от приема жареных или жирных продуктов, также ему запрещено употреблять алкогольные напитки, курить, ограничить тяжелые физические нагрузки.

Необходимо отметить, что лабораторные исследования на наличие инфекции у детей, которые были рождены от матерей-носителей вируса иммунодефицита, имеют свою специфику.

Поскольку в первые месяцы жизни ребенка, в его крови могут присутствовать материнские антитела к ВИЧ, то по результатам анализа невозможно получить объективную картину о состоянии здоровья новорожденного и даже отрицательный результат отнюдь не означает, что вирус не смог проникнуть через плацентарный барьер.

Для получения точных данных тестирования следует проводить в период 36 месяцев после рождения ребенка.

Услуги по направлению «Современная диагностика»

Клиники по направлению «Современная диагностика»

Перед тестированием или скринингом на антитела к ВИЧ стоят две широкие, но очень четко определенные цели — выявление случаев и эпидемиологический надзор. При выявлении случаев прежде всего нужно уточнить статус инфицированности ВИЧ каждого данного индивидуума для назначения соответствующего лечения или для наблюдения с принятием надлежащих мер.

Цель эпидемиологического надзора заключается в оценке распространенности ВИЧ, распределения случаев инфекции и ее тенденций в группе или целой популяции.

Чувствительность теста на антитела к ВИЧ есть мера его способности точно выявлять эти антитела в пробе, а специфичность теста — мера его способности точно подтверждать отсутствие антител, если их в пробе нет.

В идеале чувствительность и специфичность теста должны достигать 100%. На практике же ни один биологический тест этому требованию не удовлетворяет и тем не менее применяемые тесты на антитела к ВИЧ принадлежат к числу наиболее чувствительных и специфичных тестов, имеющихся в настоящее время

Лабораторная диагностика СПИДа состоит в проведении вирусологических, серологических, иммунологических исследований материала от больных лиц с подозрением на это заболевание.

При вирусологических исследованиях с целью выделения вируса могут быть использованы первичные культуры мононуклеарных клеток крови.

Выделение и идентификация вируса методически сложны и могут выполняться в специализированных лабораториях. Наиболее эффективным методом диагностики, используемым в настоящее время для повседневных массовых обследований, является обнаружение антител к вирусу иммунодефицита человека. Антитела к ВИЧ могут появляться к концу первого месяца заражения. Поданным ряда авторов, для развитиясероконверсии требуется от 4-7 недель до 6 месяцев и больше. Наличие антител имеет диагностическое значение при СПИДе или указывает на риск его развития.

Антитела — не только серологический маркер СПИДа. Выявляясь в предклинической фазе заболевания, они позволяют осуществить его раннюю диагностику. Особую значимость их наличие приобретает для обнаружения носителей.

Антитела выявляются в течение многих лет, практически на протяжении всей жизни. Исследователи установили параллелизм в выявлении вируса и антител к нему, т. е. наличие антител к вирусу иммунодефицита указывает на высокую вероятность того, что человек является вирусоносителем.

Антитела к антигену ВИЧ, появившись в инкубационном периоде, продолжают интенсивно вырабатываться с развитием болезни, так как антигенное раздражение стимулируется и вирионами, выделяющимися из зараженных лимфоцитов, и субвирионными компонентами, попадающими в кровоток при распаде зараженных клеток, и зараженными лимфоцитами.

В то же время провирус, встроенный в геном зараженных клеток, остается недоступным для специфических антител. Этим и объясняется, казалось бы, парадоксальный факт: чем больше антител к вирусу иммунодефицита человека в сыворотке крови, тем легче выделить сам вирус от больного.

Происходит это потому, что антитела, вырабатывающиеся в ответ на инфекцию вируса, не являются нейтрализующими и вследствие этого не оказывают заметного влияния на вирус, а просто присутствуют в организме вместе с ним. Для обнаружения антител (AT) к вирусу СПИДа разработан ряд тестов, позволяющих осуществить исследования на достаточно высоком уровне специфичности и чувствительности. Это методы твердофазного радиоиммунологического анализа, радиоиммунопреципитации, иммунофлюоресцен-ции, иммуноферментного анализа и иммунного блотинга.

Наиболее широкое применение в практике нашли методы иммуноферментного анализа (ИФА), который отличается высокой чувствительностью, возможностью количественного и визуального учета результатов реакции, что делает метод доступным для лаборатории любого уровня.

В ИФА используются зарубежные и отечественные тест-системы.

Клиническое течение ВИЧ-инфекции и СПИДа

Надо проявлять осторожность в отношении детей, рожденных от инфицированных матерей. При отсутствии клиники ребенок считается инфицированным в том случае, если AT к ВИЧ сохраняются после года. При получении положительного результата в ИФА необходимо трехкратно протестировать сыворотки, давшие однократно положительные результаты, и подтвердить положительный результат в независимой системе — иммунном блотинге

Обнаружение AT в реакции ИФА не дает достаточной информации, так как не говорито состоянии исследуемого, а свидетельствует лишь об инкубации, о болезни или о наличии бессимптомной инфекции.

Иммунный блотинг дает большуюинформацию.таккакналичие AT ко многим антигенам ВИЧ характерно для выраженной болезни, в то время как реакция с 1-2 антигенами более характерна для слабовыраженного инфекционного процесса

Информативным является подсчет количества Т (хелперов) и соотношения Т4 к Те (супрессоров) лимфоцитов, определяемых с помощью моно-кпональных антител.

Важным критерием заболевания может служить резкое увеличение количества иммуноглобулинов, особенно А и V. В общем клиническом анализе крови о заболевании может свидетельствовать лимфопения, лейкопения, эритропения, тромбоцитопения, эозинофилия.

Тесты на ВИЧ, используемые для эпидемиологического надзора, не должны обладать такой же точностью, какая требуется для клинических целей.

Однако при очень низкой пораженности ВИЧ в популяции все положительные пробы необходимо исследовать повторно в дополнительных тестах.

Сбор крови для теста на антитела к ВИЧ или для скрининга может сопровождаться регистрацией фамилий обследуемых (поимененный сбор), либо производиться без регистрации фамилий или индивидуальной идентификационной информации (анонимный сбор) (табл.

2).

Скрининг вич

Для анонимного скрининга без учета идентификационной информации характерны следующие моменты: используются пробы крови, собранные для других целей; гарантируется анонимность благодаря тому, что идентификационные данные не собираются, либо не учитываются; не требуется получать согласия обследуемых; не требуется контакт с консультационными и социальными службами; наконец, что самое важное, сводятся к минимуму ошибки в статистических оценках, зависящие от уровня участия населения.

Хотя при анонимном исследовании на ВИЧ можно получить более точные данные, этот метод имеет следующие недостатки: он не может устранить потенциальное смещение оценки, обусловленное отбором; данные о связанном с высоким риском поведении и других важных переменных недоступны и не могут быть собраны ретроспективно; невозможно установить контакт с пораженными ВИЧ лицами, чтобы сообщить им об их состоянии; обследование можно проводить только в группах лиц, у которых кровь взята для других целей.

В районах, где распространенность ВИЧ-инфекций считается очень низкой, надзор за нею в рамках системы здравоохранения должен прежде всего быть направлен на отдельных лиц или группы населения, для которых характерно поведение, связанное с наибольшим риском заражения Повсеместно к ним относятся лица, имеющие большое число половых партнеров

Кровь для исследования на ВИЧ в такой группе риска легче всего брать в центрах, специализирующихся на лечении болезней, передаваемых половым путем, или подобных им учреждениях.

Если распространено также внутривенное введение наркотиков, пробы крови следует брать у их потребителей в специальных учреждениях.

Сбор крови один раз в 3 или 6 месяцев в группах наибольшего риска из географических районов, где таких групп больше всего, будет обычно достаточным. Исключение могут составить такие группы риска, как наркоманы, практикующие внутривенное введение препаратов, для которых могут потребоваться более частные обследования.

Сейчас ВОЗ занимается созданием системы классификации (стади-рования) заболевания для клинических исследований, которую можно также использовать в испытаниях методов лечения, что может иметь также прогностическую ценность.

Однако такая система не призвана заменить существующие определения СПИДа, используемые при проведении надзора в системе здравоохранения.

В настоящее время повсеместно разрабатываются системы планового (рутинного) надзора за ВИЧ.

Эти системы необходимо адаптировать к существующей эпидемиологической ситуации; так, методы составления выборок в популяциях с очень низкой распространенностью вируса должны обязательно отличаться от применяемых там, где распространенность умеренная или высокая.

Такой надзор предполагает рутинные обследования четко охарактеризованных и доступных групп населения.

В него прежде всего следует включать те группы, которые подвергаются наибольшему риску заражения, и в каждой из этих групп необходимо отбирать постоянное заранее установленное число лиц для обследования.

В последние годы анонимный скрининг в наблюдаемых группах без учета идентифицикационных данных получает все большую распространенность как точный и экономически эффективный способ эпидемиологического надзора за ВИЧ-инфекцией в системе здравоохранения.

Методы лабораторной диагностики ВИЧ

В высокоспециализироваиной лаборатории проводятся:

а) определение циркулирующих в крови антител, антигенов и иммунных комплексов; культивирование вируса, выявление его геномного материала и ферментов;

б) оценка функций клеточного звена иммунной системы.

Основная роль принадлежит методам серологической диагностики, направленным на определение антител, а также антигенов возбудителя в крови и других биологических жидкостях организма.

Тестирование на антитела к ВИЧ осуществляют с целью:

а) безопасности гемотрансфузий и трансплантаций;

б) эпиднадзора, тестирование в целях мониторинга превалентности ВИЧ-инфекции и изучения динамики ее распространенности в определенной популяции;

в) диагностики ВИЧ-инфекции, т.

е. добровольное тестирование сыворотки крови практически здоровых людей или больных с различными клиническими признаками и симптомами, сходными с ВИЧ-инфекцией или СПИДом.

Система проведения лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции построена по трехэтапному принципу.

Первый этап — скрининговый, предназначен для выполнения первичных исследований крови на наличие антител к белкам ВИЧ. Второй этап референтный — позволяет с помощью специальных методических приемов уточнить (подтвердить) первичный положительный результат, полученный на скрининговом этапе. Третий этан — экспертный, предназначен для окончательной проверки наличия и специфичности маркеров ВИЧ-инфекции, выявленных на предыдущих этапах лабораторной диагностики.

Необходимость нескольких этапов лабораторной диагностики обусловлена прежде всего экономическими соображениями.

В практике применяется несколько тестов, позволяющих с достаточной степенью достоверности выявлять ВИЧ-инфицированных:

— ИФА (ELISA)-тecт (твердофазный иммуноферментный анализ) выявления первого уровня, характеризуется большой чувствительностью, хотя и меньшей специфичностью перед нижеследующими;

— иммунный блот (Western-blot), весьма специфичный и наиболее используемый тест, позволяющий дифференцировать ВИЧ-1 и ВИЧ — 2;

— антигенемия р25-тест, эффективный в начальных стадиях заражения;

— полимеразная цепная реакция (ПЦР).

В случаях массового скрининга образцов крови рекомендуется тестировать смеси сывороток от группы обследуемых, составленные с таким расчетом, чтобы конечное разведение каждого образца не превышало 1:100.

Если смесь сывороток оказывается положительной, проводится исследование каждой сыворотки положительной смеси. Этот способ не ведет к потере чувствительности как в ИФА, так и в иммуноблоте, но снижает трудовые затраты и стоимость первичного обследования на 60-80%.

Иммунологические методы

1.

количество Т хелперов,

2. соотношение Т4 иТ8,

3. состояние гиперчувствительности,

4. компенсаторная функция Т клеточной системы.

Проявляется гиперпродукцией иммуноглобулинов, они низко аффинны и материал организма расходуется еще больше.

Недостатки: проявляются поздно, некоторые иммунологические показатели могут быть при других инфекциях.

Клинические методы – м.б. сходны с другими заболеваниями, наиболее типичные проявления регистрируются на поздних стадиях, поэтому клиническая диагностика мало эффективна

Основной метод – серологический – реализуется в 2 этапа:

1 – скрининговое обследование – отбор проб к суммарным антителам ко всем белкам иммунного анализа.

Этот этап дает 95% истинных результатов и 5% ложноположительных.

2 – подтверждающий метод – все пробы исследуют с помощью подтверждающего метода. Эта методика позволяет выявить антитела к вирусному белку.

Положительный результат, когда обнаружены антитела не менее чем к 3 вирусным белкам, если к 1 или к 2 результат сомнительный и требует дополнительного обследования.

Скрининг вич При первичной серодиагностике ВИЧ-инфекции проводится определение суммарных антител с помощью скрининговых отборочных тестов — ИФА и агглютинационных реакций.

На втором (арбитражном) этапе используют более сложный тест — иммуноблот, позволяющий не только подтвердить или отклонить первоначальное заключение, но и сделать это на уровне определения антител к индивидуальным белкам вируса.

Интерпретация результатов анализа на антитела к ВИЧ

Достаточно большое количество различных факторов влияет на результат анализа на антитела к ВИЧ и среди них важное значение имеет время проведения анализа после возможного заражения.

В большинстве случаев антитела к ВИЧ можно обнаружить через 6–12 недель после заражения.

Этот период от попадания вируса в организм до появления определяемого количества антител называется периодом положительной сероконверсии или периодом “окна”. Есть редкие случаи появления антител через 6 месяцев после заражения, а сообщения о выявлении антител только через 1 год не имеют доказательств. В настоящее время диагностическая служба использует новые генерации методов ИФА, которые позволяют выявить антитела к ВИЧ через 3–4 недели после заражения, а определенные комбинации этих методов, так называемые стратегии тестирования, сокращают период “окна” до 2–3 недель, т.е.

дают возможность выявить антитела к ВИЧ как только они начинают вырабатываться в организме.

Отрицательный результат означает, что антитела к ВИЧ в крови обследуемого не обнаружены.

Такое состояние называется серонегативностью и означает, как правило, что человек не заражен.

Отрицательный результат не дает никаких гарантий на будущее. Он констатирует только состояние в момент обследования. Существует незначительный шанс, что обследование проведено в период “окна”. Поэтому, если человек раньше рисковал заразиться ВИЧ и получил отрицательный результат тестирования, необходимо пройти повторное тестирование по крайней мере через 6 месяцев после рискованного события.

Положительный результат означает, что в крови обследуемого найдены антитела к ВИЧ.

Такое состояние называется серопозитивностью – человек заражен ВИЧ. Важно понимать, что положительный результат свидетельствует только о ВИЧ-инфекции, а не о заболевании СПИДом.

Тем не менее, крайне важно срезу по получению положительного результата обратиться ко врачу для получения консультаций и, если нужно, медицинской помощи, что позволит поддержать качество жизни на хорошем уровне длительное время.

Неопределенный результат. В редких случаях результат анализа на антитела к ВИЧ неясен.

Лаборатория не может дать ответ серопозитивен человек или серонегативен. В таких обстоятельствах необходимо проконсультироваться с врачом, и еще раз пройти тестирование.



Источник: ekoshka.ru


You May Also Like

About the Author: admind

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте, как обрабатываются ваши данные комментариев.