Пцр на вич качественный


Подтверждающие тесты

Как следует из названия, они позволяют наверняка убедиться в наличии или отсутствии вируса иммунодефицита у человека. Их минус в сложности и дороговизне.

Иммуноблоттинг помогает проверить результаты скрининговых анализов и уточнить, каким видом вируса инфицирован человек: ВИЧ-1, ВИЧ-2 или обоими. Этот метод обладает высокой точностью, чувствительностью, но дорог и сложен в исполнении. Он является комбинацией ИФА и электрофореза, что позволяет определить антитела к специфическим антигенам ВИЧ-1 (gp160, gp120, gp41). Белки под действием электрического поля располагаются в виде полосок на нитроцеллюлозной мембране.

При положительной реакции антиген/антитело на полосках становится видно потемнение.

ПЦР (полимеразная цепная реакция). Тест способен находить генетический материал ВИЧ (ДНК/РНК), то есть проверяет, есть ли непосредственно вирус в крови. Нуклеиновые кислоты могут обнаруживаться уже на 7-й день после инфицирования (по данным CDC — c 10 по 33 день).


При этом методе в пробирке с помощью различных ферментов многократно дублируется участок ДНК или РНК вируса до таких объемов, что его можно увидеть глазом в виде полосок. Кроме того, ПЦР бывает качественным и количественным. В последнем случае можно отслеживать вирусную нагрузку (концентрацию вируса в крови и других биологических жидкостях) у людей с ВИЧ, оценивая эффект терапии.

А я могу сдать сразу иммуноблот или ПЦР, чтобы узнать свой ВИЧ-статус?

Иммуноблот используют специальные лаборатории центров по борьбе со СПИДом. Пробы крови направляются туда для перепроверки уже положительных первичных скрининговых анализов. Сразу сдать его не получится, даже в платных клиниках.

ПЦР, наоборот, можно сдать в любой момент, но только обратившись в коммерческую лабораторию. В СПИД-центрах его делают также для перепроверки ранее положительного теста. Да, ПЦР позволяет максимально быстро (в течение 7—10 дней после инфицирования) обнаружить ВИЧ, но и у него есть недостатки:

  • высокая стоимость;
  • может обнаружить только ВИЧ-1;
  • в редких случаях выявление низких уровней РНК ВИЧ (например, <1000 копий/мл) может привести к ложноположительному результату.

Этот тест имеет смысл делать если:

  • у человека есть подозрение на острую ВИЧ-инфекцию (высокий риск инфицирования) или в период серологического окна;
  • донорам крови;
  • новорожденным от ВИЧ-положительных матерей

Как тогда правильно проверяться на ВИЧ?

Согласно рекомендациям Минздрава, первоначальным анализом должен быть скрининговый тест ИФА. Если результат оказывается положительным, то в лаборатории, используя тот же образец крови, делают еще один анализ. Если и он «с плюсом», то тогда уже проводят иммуноблот.

Нужно ли повторно тестироваться, если результат анализа отрицательный?

Универсальной рекомендации, увы, нет. Повторные тесты нужны чтобы застраховаться от попадания в период окна, когда в крови еще нет антител и антигенов ВИЧ, а вирус уже проник в организм.

То же самое и с частотой тестирования — она зависит от разных факторов: количества рисков, приема доконтактной (PrEP) и постконтактной (PEP) профилактики, нахождения в группах риска (инъекционные наркопотребители, секс-работники, мужчины, практикующие секс с мужчинами). Однако эксперты рекомендуют проверяться каждые 6—12 месяцев.

Пцр на вич качественный

Что может влиять на результат теста на ВИЧ?

Анализ на ВИЧ может дать неправильные результаты в следующих случаях:

  • при наличии системных аутоиммунных заболеваний (коллагенозов, васкулитов) и злокачественных опухолей;
  • при тестировании в период серологического окна — когда в крови еще не появились антитела к ВИЧ;
  • из-за ошибки при проведении теста в лаборатории;
  • после вакцинации от гриппа.

У детей, рожденных от ВИЧ-положительных матерей, до восемнадцатимесячного возраста в крови могут сохраняться материнские антитела, что может приводить к ложноположительным результатам.

Источник: spid.center

В чем суть метода

ПЦР – диагностический подход, появившийся в клинической медицине благодаря молекулярной биологии. Именно из этой ветки науки исследование пришло в медицину. И стало активно использоваться для постановки различных диагнозов, включая заражение ВИЧ-инфекцией.

Всем известно, что любой живой организм состоит из ДНК и РНК. Полимеразная цепная реакция основана на способности этих нуклеиновых кислот к самовоспроизведению.

ДНК диагностика

Важно помнить, что ПЦР способна определять даже небольшие концентрации вирусных частиц в крови. Происходит это благодаря тому, что в биологической жидкости циркулируют «обломки» нуклеиновых кислот, которые улавливаются и распознаются специальной аппаратурой. Это позволяет поставить верный диагноз даже в том случае, если заражение произошло совсем недавно.

И вирусные частицы еще не успели размножиться в организме пациента. Полученный от пациента биологический материал помещается в специальный реактор. Чаще всего используется венозная кровь.

Специальные компоненты, взаимодействуя с частицами вируса, многократно увеличивают число обнаруженных фрагментов. В итоге фрагменты становятся определяемыми, их можно оценить и сделать выводы о заражении.

Сдают кровь из вены по стандартной методике.


сдача крови на ВИЧ

Перед посещением врача не принимают пищу, приходить лучше с утра. Если пациент проходит курс иммуностимуляции, необходимо прервать его за две недели до анализа.

Плюсы и минусы методики

Как и любой другой метод диагностики той или иной болезни, ПЦР-исследование имеет ряд преимуществ и недостатков. К преимуществам метода относят:

  • низкую вероятность столкнуться с ложноотрицательным или ложноположительным итогом;
  • возможность использовать для исследования не только кровь, но и другие биологические жидкости, такие как выделения из влагалища, сперма и др. (правда, как отмечают врачи, точность может снижаться);
  • возможность использовать единожды взятый материал для диагностики сразу нескольких заболеваний;
  • быстроту получения результатов (если анализ срочный, то итоги получают уже на следующий день);
  • возможность быстро диагностировать заражение и, соответственно, начать терапию заболевания, улучшив таким образом прогноз;
  • отсутствие ограничений по возрасту (забор крови из вены можно выполнить даже новорожденному малышу).

Естественно, недостатки у ПЦР тоже есть. К ним относят:

  • немаленькую цену на исследование, особенно в сравнении с базовыми скрининговыми методами, применяемыми в большинстве больниц;
  • необходимость наличия сложного оборудования, которое также стоит недешево;
  • вероятность все же столкнуться с ложными результатами, если нарушена технология выполнения анализа, процесс забора крови или человек страдает от аутоиммунного, опухолевого или хронического инфекционного заболевания.

Естественно, выполнять ПЦР исследование стоит по рекомендации врача.

мужчина на приеме венеролога

Доктор сможет оценить в каждом конкретном случае, насколько достоверными будут результаты. Если врач посчитает это необходимым, он вместо ПЦР посоветует своему пациенту другой метод диагностики. Или после получения результатов дополнит план диагностических мероприятия дополнительным пунктом.

Пцр на вич качественный

Когда рекомендуется выполнение

Многих пациентов волнует вопрос о том, всем ли людям делается ПЦР-исследование на ВИЧ. На самом деле диагностика обязательна не для всех. Однако есть группы пациентов, которым изредка приходится сдавать кровь для анализа.

  • Предварительная диагностика

Исследование может быть рекомендовано пациентам, которые обратились к дерматовенерологу после незащищенного полового контакта с ненадежным партнером. Итоги можно получить быстро и затем подтвердить их с помощью ИФА.

  • Положительное иммуноглобулиновое исследование

Иммуноблотинг, который дал положительный результат на вирус иммунодефицита человека, обязательно подтверждают с помощью полимеразной цепной реакции. Аналогично поступают, если ПЦР выполнялась первой. Дополнение исследований друг другом почти полностью исключает вероятность ошибок.

  • Контроль терапии

Пациенты с подтвержденным ВИЧ-статусом довольно регулярно сдают кровь на ПЦР. Это необходимо, чтобы контролировать ход лечения и, если необходимо, корректировать терапию.

  • Оценка безопасности крови

Любая донорская кровь должна быть исследована с помощью полимеразной цепной реакции.

донор сдает кровь

Это исключает передачу ВИЧ-инфекции через переливание крови.

  • Оценка статуса новорожденного

Если ребенок рожден от ВИЧ-положительной женщины, ему также обязательно выполняется ПЦР. Это необходимо, чтобы определить статус ребенка и выработать тактику его дальнейшего ведения.

Достоверность исследования

Многих пациентов волнует вопрос о том, насколько достоверна полимеразная цепная реакция в том случае, если планируется диагностировать вирус иммунодефицита человека. Несмотря на то, что ПЦР – это одна из самых современных методик, на все 100% все же нельзя доверять даже ей.

Сегодня ПЦР до сих пор не используется как скрининговый метод именно из-за того, что может давать ложноположительные результаты.

ложноположительный результат

Чтобы избежать этого, врачи рекомендуют правильно готовиться к забору биоматериала, но даже подготовка не всегда помогает. Например, тест может дать положительный результат, если у человека есть злокачественная опухоль в организме. Если он страдает от любой хронической инфекции или, например, аутоиммунного процесса. Даже несмотря на наличие вероятности получить ложноположительный результат, ПЦР используется в практике, как один из самых надежных методов.

Чтобы исключить ошибки, врачи часто рекомендуют своим пациентам сдавать анализ повторно, если результат оказался положительным. Также в ряде случаев рекомендуется дополнительно проводить ИФА реакцию и другие исследования. Выполнение комплекса тестов всегда дает более достоверный результат, чем выполнение только одного исследования.

Для чего можно использовать тест

Далеко не все пациенты знают, для чего конкретно применяется полимеразная цепная реакция в клинической практике врача.

Ее рекомендуется проводить, если:


  • Необходимо обнаружить заболевание в латентном периоде

Вирус иммунодефицита в течение длительного времени может существовать в организме латентно.

ПЦР – единственное исследование, способное указать на присутствие патогена в организме. Даже в том случае, если вирусных частиц еще совсем мало.

  • Установление генотипа

Сегодня выявлено несколько генотипов ВИЧ-инфекции. Часто важно определить, какой конкретно генотип заразил человека, так как от этого зависит подбор противовирусных препаратов.

  • Определение именно вируса, а не антител к нему

Одно из преимуществ анализа состоит в том, что с помощью методики можно выявить не антитела к вирусным частицам, а непосредственно сам вирус.

лабораторная диагностика методом ПЦР

Почему это именно преимущество, интересуются многие пациенты. Дело в том, что если упор делается на обнаружение самого патогена, уменьшается вероятность столкнуться с ложноположительными реакциями из-за схожести различных антител. Как отмечают доктора, во многом именно способность определять сам вирус, а не антитела сделала методику столь эффективной.

В какие сроки сдавать


Часто пациенты интересуются вопросом о том, через сколько можно посетить врача, чтобы сдать биологический материал.

Все зависит от того, что именно планируется определять с помощью методики.

  • ДНК

ДНК вируса иммунодефицита человека рекомендуется искать в том случае, если есть подозрение на заражение инфекцией, и необходима ранняя диагностика. В крови ДНК в среднем начинает определяться через десять дней после того, как заражение произошло. Однако анализ рекомендуется подтвердить с помощью ИФА сначала через 4 недели от заражения, а затем через 12 недель.

сроки получения результата

Если ИФА подтверждает диагноз, статус пациента расценивается, как положительный.

  • РНК

Исследование для определения РНК всегда носит количественный характер. Его рекомендуется проводить в том случае, если положительный статус пациента подтвержден, и начато лечение с помощью противовирусной терапии. Если в организме много РНК, то диагностируется острая фаза заболевания. Если мало – считается, что подавление патогена прошло успешно, и терапия может быть изменена на более щадящую.

  • Оценка резистентности

Некоторые штаммы ВИЧ проявляют резистентность к препаратам, используемым для их лечения. Чтобы оценить вероятность отсутствия реакции на лечение, также рекомендуется проводить исследование. Ее выполняют, если после назначения терапии улучшение не наступает. Также она рекомендована в острый период инфекционного процесса.

Вирус иммунодефицита человека с каждым годом распространяется в человеческой популяции все активнее. Столкнуться с патологией может любой человек, а потому иногда жизненно необходимо знать, как правильно поставить диагноз.

ПЦР – хороший метод диагностики, если он правильно используется врачом. А пациенту главное – соблюдать рекомендации доктора по подготовке к исследованию, в которых нет ничего сложного.

Источник: intimnyjotvet.ru

Через сколько времени можно сдавать ПЦР на ВИЧ

Выявить наличие ВИЧ-вируса возможно спустя 4-6 дней после инфицирования. В данном случае информативность анализа будет достигать 85%. Спустя 10-13 дней анализ может определить заболевание с точностью до 98%. Отрицательный результат будет верен только при условии его сдачи не ранее, чем спустя 2 недели после предполагаемого заражения.

Причины ложноположительного результата 

Получить ложноположительный результат достаточно сложно.

неожиданный результат

Такое возможно при несоблюдении правил забора биологического материала, неправильной маркировки пробирки, использования некачественной тест-системы и других подобных факторов. В остальных случаях шанс получения подобного результата составляет не более 2%.

Через сколько времени можно получить результаты анализа? 

Если смотреть с технической стороны, результаты ПЦР можно получить в течение 4 часов. Однако на практике пациент лабораторное заключение получает от одного до нескольких дней. В целом, сроки проведения зависят от загруженности лаборатории и от того, насколько организованно построена ее работа. 

Проведение полимеразной реакции у новорожденного 

ПЦР назначается в случае, когда ребенок рожден от ВИЧ-положительной матери. Проведение ИФА в данном случае не информативно. Поскольку у ребенка примерно до 2 лет сохраняются антитела против ретровируса. По этой причине иммуноферментное исследование не даст точного ответа.  При проведении ПЦР у ребенка возрастом 4-6 недель и получении положительного результата речь будет идти о заражении.

забор крови на ПЦР у ребенка

Если ПЦР, проведенный в возрасте от 8 недель до полугода, показывает отрицательные результаты (при условии, что ребенок не питался грудным молоком матери) инфицирование исключается.

Почему для определения ВИЧ ПЦР лучше ИФА? 

Полимеразная реакция позволяет выявить РНК вируса, его наличие в организме, в том числе количественное. Задача ИФА заключается в определении антител к ВИЧ-инфекции. Иммуноферментный анализ относительно определения возможного инфицирования не уступает ПЦР, его точность достигает 99%. Однако, в отличии от ПЦР — не способен определить заболевание на ранних стадиях его развития.

Преимущества проведения ПЦР на ВИЧ

  • Полимеразная реакция непосредственно определяет наличие инфекционного агента. К примеру, ИФА может выявить исключительно антитела и продукты жизнедеятельности микроорганизма.
  • Анализ четко идентифицирует конкретный патогенный микроорганизм, даже при условии наличия нескольких перекрестно реагируемых. 
  • Методика позволяет исследовать любой вид биологического материала, в том числе засохшие капли крови. 

Из недостатков ПЦР можно выделить повышенную чувствительность анализа. Это иногда становится причиной получения ложноположительного результата. Такое происходит в случае присутствия в пробирке или на инструментах хотя бы незначительного количества постороннего ДНК.

Диагностика ВИЧ с помощью ПЦР и ИФА: расшифровка, достоверность результатов 

Иммуноферментный анализ, при котором результаты тестирования указывают на отсутствие в организме антител к ВИЧ и антигена р24, является отрицательным. В случае наличия данных молекул — выдается положительное диагностическое заключение.  В ряде случаев пациент может получить ложноположительный или ложноотрицательный результат. Подобное является следствием раннего срока беременности, наличия герпетической инфекции, некорректно проведенного забора материала, нарушения транспортировки пробирок. Кроме того, подобные результаты встречаются у пациентов с протекающими аутоиммунными заболеваниями и гепатитами различного типа. Может проводиться Western Blot (иммунный блоттинг), который сочетает в себе ИФА и разделение белков вируса.

иммуноблоттинг в лаборатории

Тогда положительный результат будет при наличии гликопротеида вирусной инфекции gp160. Он является предшественником гликопротеинов оболочки ВИЧ gp41 и gp120. Если данные молекулы отсутствуют, заключение лабораторного исследования считается отрицательным. Проведение Western Blot в сочетании с ИФА позволяет получить результаты, достоверность которых превышает 98%. В случае, когда ИФА положительный, а Western Blot отрицательный — тестирование считается сомнительным и требует проведения ПЦР.

Источник: prosifilis.ru

Добрый день! У меня такая история…
С 01.07. странно заболел — температура 38,5-39, врач поставила диагноз — ОРВИ. Проявлений ОРВИ, таких как заложенность носа, красное горло — небыло.
Через четыре дня температура спала, 36,8… Но началась УЖАСНАЯ слабость.
Ни сидеть, ни ходить невозможно — бросало в «холодный пот», темнело в глазах.
К врачу ездил три раза, первые два врач ничего не предпринимала, утверждала, что после ОРВИ такое состояние — норма. В третий раз я стал выпрашивать обследования.
Сделали рентген легких, гепатиты В, С, А, Д, биохимию.
Все оказалось в норме, кроме биохимии — тромбоциты 93.

Самостоятельно сдал анализ на ВИЧ, сифилис, геперс и т.п. (уже сдавал сам платно в инфекционной больнице — прсто от безысходности, так было плохо).
Результат на ВИЧ пришел со штампом «анализ повторить». В дальнейшем, сдал ИФА в двух разных местах, результат-тот же — «анализ повторить».
Потом сдал ИФА и ПЦР ВИЧ качественный — в научной лаборатории ВИЧ/СПИД (занимаются диагностически сложными случаями, делают генотипирование, резистентности и т.п.).

За время подготовки этих анализов «сдался» в центр диагностики вич/спид (Минск), ИФА положительный, иммуноблот положительный, выдали направление на постановку на учет.

Позже пришел ПЦР ВИЧ качественный научной лаборатории — «НЕ ОБНАРУЖЕНО», исследование ИФА — «анализ повторить».

Там же, в научной лаборатории, я сдал ПЦР ВИЧ количественный, получил результат 390 000 копий.
Там же сотрудники были озадачены… в первой пробе ПЦР качественный — не выявляется, во второй ПЦР количественный — вирусная нагрузка определяется.

Сейчас делают мне бесплатно, повторно, ПЦР и резистентность (бояться, что буду претензии предъявлять), с новой порцией крови.

На сегодняшний день общие показатели:
СД4 = 249 кл. = 11 % (по данным диспансера ВИЧ);
СД 4 = 270 кл. = 11,8% (по данным научной лаборатории ВИЧ, платная сдача, самостоятельная, развернутый анализ приложил сюда);
ВН = 3,9 в (десять в пятой степени) = 390 000 по данным научной лаборатории ВИЧ, платная сдача, самостоятельная);

Терапию пока не назначают, врач сказала, можем подождать резистентность, раз уж делают. Будет готово числа 10-го октября.

P.S. начался небольшой зуд кожи головы, и начали немного лезть волосы =(…
В моем анамнезе — вторичный иммунодефицит на фоне хронической рецидивирующей герпетической инфекции (проявляется тогда, когда я прикусываю слизистую или язык, например, так бывает при приеме пищи); два раза была мерцательная аритмия (трепетание предсердий).
Начал пить «Супрадин» витамины, как курс осенью.

Я бы хотел узнать мнение, почему может быть при наличии ПЦР количественного, происходит ерунда с ПЦР качественным. Логично, что должны определяться оба теста…

Вложение Размер
img_20160928_142448.jpg 27.59 КБ

Источник: arvt.ru

ПЦР (полимеразная цепная реакция) представляет собой метод молекулярной генетики, который позволяет анализировать любую короткую последовательность ДНК (или РНК) даже в образцах, содержащих только мельчайшие количества ДНК или РНК, тем самым определив наличие/отсутствие патогенного возбудителя (определить, например есть ли в человеке вирус ВИЧ или гепатита Б или микобактерии туберкулёза). ПЦР используется для воспроизведения/умножения/клонирования (амплификации) выбранных участков ДНК или РНК для анализа.

Метод ПЦР настолько прост, что его может поставить даже школьник)

Раньше амплификация ДНК включала клонирование сегментов, представляющих интерес, в векторы для экспрессии в бактериях и занимала недели. Но теперь, когда ПЦР делается в пробирках, требуется всего несколько часов. ПЦР является высокоэффективной, так что из ДНК может быть сделано огромное количество копий.

Более того, ПЦР использует те же молекулы, которые природа использует для копирования ДНК:

  • Два «праймера», коротких одноцепочечных последовательностей ДНК, которые синтезируются так, чтобы соответствовать началу и концу растяжения ДНК, подлежащей копированию.
  • Фермент, называемый полимеразой, который перемещается вдоль сегмента ДНК, считывает его код и собирает копию.
  • Куча блоков ДНК, которые необходимо сделать этой полимеразе.

То есть ПЦР — это такая техника при которой частицы ДНК (иногда РНК) умножаются в определенном растворе или на специальной поверхности, где они могут быть депонированы.

ПЦР — это метод, с помощью которого учёные могут находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл.

Ключом к пониманию ПЦР является знание о том, что каждый человек, животное, растение, паразит, бактерия или вирус содержит генетический материал — ДНК (или РНК) последовательности (нуклеотидные последовательности или кусочки ДНК (или РНК)), которые уникальны для каждого индивидуума. То есть, если образец содержит сегменты ДНК или РНК,

задача ПЦР как метода — умножить (амплифицировать), сделать как можно больше их копий, чтобы можно было идентифицировать кому они могут принадлежать (определенному человеку, животному или патогенному организму), даже если есть только следы наличия ДНК/РНК.

Однако ПЦР-амплификация является лишь частью диагностического теста. После проведения амплификации амплифицированные сегменты необходимо сравнить с другими нуклеотидными сегментами, но уже из известного источника (например, конкретного человека, животного или патогенного организма). Это сравнение уникальных сегментов часто выполняется путем размещения нуклеотидных последовательностей, сгенерированных ПЦР, рядом с известными нуклеотидными последовательностями от людей, патогенов или других источников в специальном геле.

Когда электрический ток проходит через гель, то различные нуклеотидные последовательности образуют полосы, которые напоминают «лестницу» в соответствии с их электрическим зарядом и молекулярным размером. Это называется гель-электрофорез.  Они мигрируют на одни и те же уровни в геле, показывая идентичность нуклеотидных последовательностей. Этот метод является одним из самых популярных последних этапов ПЦР-тестов.

ПЦР лестницы.

Как ПЦР работает?

В 1983 году Кари Муллис разработал основные этапы по амплификации ДНК-последовательностей. Он и Майкл Смит были удостоены Нобелевской премии за создание ПЦР в 1993 году.

Кари Муллис - создатель ПЦР.

ПЦР проводится в одной пробирке с соответствующими химическими веществами и при определенной температуре нагревания.

Необходимы следующие реагенты или химикаты:

  • Образец, содержащий нуклеотидную последовательность (из крови, волос, гноя, кожи и т. д.).
  • ДНК-праймеры: короткая одноцепочечная ДНК, которая присоединена к нуклеотидным последовательностям, которая способствует синтезу комплементарной цепи нуклеотидов.
  • ДНК-полимераза: фермент, который, когда ДНК связывается с праймером, спускается по фрагменту ДНК с добавлением структурных блоков ДНК для образования комплементарных пар оснований и, таким образом, синтезирует комплементарную нуклеотидную цепь ДНК (введение термостойкой ДНК-полимеразы, Taq-полимеразы , полученной из термостойких бактерий, заметно улучшает способность к ПЦР).
  • Большой избыток структурных блоков ДНК, называемых нуклеотидами (аденин, тимидин, цитозин и гуанин, сокращенные как: A, T, C и G соответственно) в растворе. Когда эти блоки соединены вместе, они образуют нуклеотидную последовательность или одну нить ДНК. Когда эти строительные блоки связывают свой комплементарный строительный блок слабыми водородными связями (например, A будет связываться только с T и G только с C) образуется комплементарная нуклеотидная последовательность ДНК, которая связана с исходной одноцепочечной ДНК. Когда связывание завершается, комплементарная ДНК с двойной цепью образуется в определенной последовательности.

Кари Муллис очень интересный, прикольный дядечка, посмотрите как он интересно рассказывает, как он придумал ПЦР:

Он верит в астрологию, но не верит, что ВИЧ вызывает СПИД.) 

Затем полимеразно-цепная реакция начинается с сегмента ДНК из образца, который помещается в пробирку с указанными выше реагентами. Раствор нагревают до 94°С. Нагревание разрушает водородные связи, которые позволяют образовывать комплементарные цепи ДНК, поэтому в смеси существуют только одиночные нити (это называется денатурацией двухцепочечной ДНК).

Смеси дают остыть до 54°C. При этой температуре ДНК-праймеры и ДНК-полимераза связываются с отдельной одноцепочечной ДНК (это называется отжигом ДНК). Поскольку строительных блоки в избытке (высокая концентрация) в смеси, полимераза использует их для создания новых комплементарных нитей ДНК (называемых расширением ДНК), и этот процесс происходит быстрее при 72°C. Этот процесс создает новую двухцепочечную молекулу ДНК из каждой из одиночных нитей исходной молекулы.

Этот цикл повторяется примерно 40 раз в машине, называемой термическим циклером (термосайклером), который автоматически повторяет циклы нагрева-охлаждения, при этом количество каждой последовательности ДНК удваивается каждый раз, когда цикл нагрева-охлаждения завершается. То, что изначально было одним коротким сегментом ДНК, можно было увеличить до примерно 100 миллиардов копий после 40 циклов удвоения.

Когда необходим тест на ПЦР?

Тест на ПЦР является основой для ряда тестов, которые могут отвечать на многие различные медицинские вопросы, которые помогают врачам диагностировать и лечить пациентов. Например, тесты ПЦР могут обнаруживать и идентифицировать патогенные организмы у пациентов, особенно тех, которые трудно культивировать (например, ВИЧ и другие вирусы и некоторые грибы).

Одни врачи назначают ПЦР-тесты, чтобы помочь диагностировать генетические заболевания, в то время как другие врачи используют ПЦР для обнаружения биологических родственных отношений, таких как идентификация родителей детей. ПЦР-тесты также используются для идентификации и характеристики генетических мутаций и перегруппировок, обнаруженных при определенных раковых заболеваниях.

Тем не менее, ПЦР-тесты были модифицированы и внедрены во многие аспекты научных исследований, включая эволюционную биологию, генетическую отпечатку пальцев, судебно-медицинские исследования и многие другие.

Что такое ОТ-ПЦР?

Обратно-транскриптазный ПЦР (RT-PCR) — это тест на ПЦР, который предназначен для обнаружения и измерения количества РНК. Хотя первоначальные тесты ПЦР амплифицировали ДНК, многие вирусы и другие биологические компоненты (например, митохондрии) используют РНК в качестве своего генетического материала. RT-PCR отличается от обычной ПЦР сначала взятием РНК и превращением нити РНК в нить ДНК. Это делается по существу тем же самым методом для ПЦР, описанным выше, за исключением использования фермента, называемого обратной транскриптазой, вместо ДНК-полимеразы.

Обратная транскриптаза позволяет перевести одну нить РНК в комплементарную цепь ДНК. Как только эта реакция происходит, рутинный метод ПЦР можно затем использовать для амплификации ДНК. RT-PCR используется для обнаружения и изучения многих РНК-вирусов. RT-PCR не следует путать с другим вариантом ПЦР, называемым ПЦР в реальном времени (реал-тайм).

ПЦР в реальном времени представляет собой вариацию ПЦР, которая позволяет анализировать амплифицированную ДНК в течение обычных 40 циклов процедуры. Хотя процедура аналогична обычной ПЦР с циклированием, ПЦР реального времени использует флуоресцентные красители, прикрепленные к некоторым из строительных блоков или небольших нуклеотидных нитей. В зависимости от используемого метода флуоресценция возникает, когда образуются амплифицированные нити ДНК. Количество флуоресценции можно измерить на протяжении 40 циклов и позволяет исследователям измерять определенные продукты и их количества во время циклов амплификации.

Это часто позволяет исследователям или техническим специалистам пропускать гель-электрофорез или другие вторичные процедуры, необходимые для анализа продуктов ПЦР, тем самым обеспечивая более быстрые результаты. ПЦР в реальном времени и RT-PCR являются вариациями или модификациями исходного теста ПЦР. Тем не менее, существует еще много вариантов (не менее 25), которые существуют и используются для решения конкретных проблем. Все они имеют разные названия, такие как сборка ПЦР, ПЦР с горячим началом, мультиплексная ПЦР, твердотельная ПЦР и многие другие.

ПЦР будет развиваться и дальше, чтобы помочь ответить на многие другие вопросы в медицине, биологии и других областях науки.

Что такое ПЦР анализ на ВИЧ?

ПЦР (полимеразная цепная реакция) — метод умножения  генетического материала вируса, анализ, который определяет генетический материал вируса — РНК или ДНК ВИЧ.

Если вирус содержится в минимальном значении, то в результате реакции это количество многократно увеличивается. Поэтому ПЦР имеет высокое диагностическое значение.

Обычно этот тест используется для определения ВИЧ в донорской крови или для раннего определения наличия ВИЧ в организме до выработки специфических антител к ВИЧ. Специфические антитела определяют обычные тесты на ВИЧ (ИФА), но только через 1-3, редко 12 месяцев после заражения. А с помощью ПЦР можно дать достаточно точный ответ через 14 дней с достоверностью 98% и даже через 5 дней, но тогда достоверность будет 80%.  ПЦР на ВИЧ — это дорогой и более трудоемкий анализ, чем ИФА, поэтому его используют не всем подряд, а только по особым показаниям (доноры, пострадавшие от медицинской аварии с ВИЧ-инфицированным) или платно.

Качественный ПЦР анализ на ВИЧ

Качественный ПЦР анализ на ВИЧ — определяет есть вирус ВИЧ-1/ВИЧ-2 или его нет, но он не определяет количество копий вируса (для определения количества используется количественный ПЦР). Качественный ПЦР НЕ делают тем у кого известен диагноз «ВИЧ-инфекция». Его делают только тем, у кого пока неизвестно  — инфицирован он ВИЧ или нет.

Это метод определения комплиментарного участка ДНК в геноме клетки лимфоцита пораженного ВИЧ. Т.е. определяется не сам вирус, а материал, который вирус встраивает в клетку. В ядре клетки уже будет храниться его ДНК из которой он потом будет считываться и  размножаться (копировать самого себя).

Количественный ПЦР анализ на ВИЧ

Количественный ПЦР анализ на РНК ВИЧ  — определяет количество копий РНК вируса в крови (для определения вируса в клетках используют ПЦР ДНК, например у детей). Делается только у ВИЧ-инфицированных, для контроля лечения, определения выраженности процесса развития болезни, эффективности лечения.

Через сколько времени после заражения можно обнаружить ВИЧ с помощью метода ПЦР?

Через сколько дней можно сдавать ПЦР на ВИЧ после контакта с ВИЧ положительным партнёром?

ВИЧ с помощью ПЦР можно обнаружить через 4-14 дней после заражения. Отрицательный результат ПЦР на ВИЧ достоверен после 14 дней после рискованного контакта, но по действующим нормативам всё равно требуется обследование с помощью ИФА. 

Чем отличается ПЦР ДНК от ПЦР РНК ВИЧ?

РНК обычно используется в количественных тестах для оценки вирусной нагрузки у диагностированных лиц, например, для оценки эффективности терапии.

ДНК — в мононуклеарных клетках, например, для диагностики у детей, там, где антитела к ВИЧ матерей мешает использовать метод ИФА.

И тот и другой тест могут быть и количественными, и качественными.

И тот, и другой можно в особых случаях применить диагностики, но с учетом конкретных ограничений, которые накладывают технические параметры системы, т.е. по назначению врача.

Может ли ПЦР на ВИЧ быть ложноположительным, причины?

Если всё сделано правильно: медсестра не перепутала пробирки, посмотрела паспорт, прежде, чем делать забор крови, правильно промаркировала пробирку, правильно выписала направление и т.д., а специалист лаборатории (обычно это врач-лаборант)  сделал всё согласно инструкции, им были соблюдены все требования лабораторного регламента (например, правильно «расскапал» биоматериал, без перекрестной контаминации (загрязнения) и т.д.) и была использована качественная тест-система, ТО ПЦР ложноположительным быть МОЖЕТ только в 2% случаях (это связано с чувствительностью используемых тест-систем).

Но если были допущены ошибки со стороны персонала медицинского учреждения, ТО ПЦР может быть ложноположительным, более чем в 2% случаев. 

Как сдается ПЦР на ВИЧ?

Для исследования на ВИЧ методом ПЦР сдаётся кровь из вены, желательно (но необязательно) утром натощак.

Где можно сдать анализы на ПЦР ВИЧ?

Для этого нужно ввести в поиск Вашего браузера «сдать пцр вич» и добавить в запрос Ваш населенный пункт и Вы увидите организации, которые занимаются у Вас исследованиями на ПЦР.

Например,

Сколько стоит анализ на ВИЧ методом ПЦР?

Около 1,5-3 тыс. руб. в зависимости от региона.

Какова достоверность результатов ПЦР анализа на ВИЧ?

Через 14 дней после заражения достоверность ПЦР на ВИЧ составляет 100%, с 4-5 дня — достоверность 80%.

Сколько времени делается анализ ПЦР на ВИЧ?

Технически 4-6 часов, но в реальности зависит от организации работы лаборатории и обычно результат выдается через 2-3 дня.

ПЦР на ВИЧ у новорожденного ребенка

Так как у ребёнка до 1,5 лет рожденного от ВИЧ+ матери сохраняются её антитела против ВИЧ, то определить заражен ВИЧ ребенок или нет с помощью ИФА невозможно. В такой ситуации используется ПЦР:

  • Если у ребенка возрастом 1 мес с помощью ПЦР обнаружили вирус, значит он заразился.
  • Если у ребенка в 1-2 месяца и 4-6 месяцев ПЦР отрицательная, то при условии, что мать не кормила его своим грудным молоком — ребёнок здоров.

Источник: spid-vich-zppp.ru


You May Also Like

About the Author: admind

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.